一种玉米雄性核不育基因ms40及其分子标记和应用的制作方法

本发明属于生物
技术领域：
，具体涉及一种玉米雄性核不育基因；还涉及用于鉴定该核不育基因的分子标记及其引物；此外，还涉及它们的用途。
背景技术：
：玉米是最早利用杂种优势的植物之一，杂种优势的利用极大地提高了玉米的产量、抗性和适应性等。玉米是典型的异花授粉作物，因此，在制种时需要进行严格的人工去雄，如果去雄不及时不彻底，极易造成混杂，进而会影响到玉米商品杂交种子的纯度；其次，人工去雄还耗费大量的劳力，大大增加种子的生产成本。而利用雄性不育制种，不仅可以大大提高种子纯度，保证制种质量，而且可以节约劳力、增加制种产量和降低种子生产成本，因而是解决玉米人工去雄制种问题的有效途径。植物雄性不育(malesterility)分为细胞质雄性不育(cytoplasmicmalesterility，cms)和细胞核雄性不育(genicmalesterility，gms)。细胞质雄性不育是核质互作的产物，其不育细胞质类型主要有t、s、c三种，通过细胞质雄性不育系、保持系和恢复系三系配套进行种子生产。美国曾大面积推广应用t型不育细胞质配制的玉米杂交种，但是由于上世纪七十年代针对t型不育胞质的玉米小斑病t小种的大爆发，给美国的玉米生产造成严重损失，只能放弃应用t型雄性不育细胞质。同时，s型胞质不育存在不育性不稳定，c型胞质不育很难找到恢复系、且面临玉米小斑病c小种的威胁等问题。所有这些因素都限制了细胞质雄性不育在玉米制种上的应用。细胞核雄性不育一般由核基因突变产生，目前在玉米中已经发现200多个核不育突变体，其中已经克隆报道了17个雄性不育基因，除ms44由单显性基因控制外，其他核不育基因均为隐性不育基因。核不育一般为显性或隐性单基因遗传，其存在一个明显的缺点，即后代群体常表现为1：1的育性分离，很难找到一个保持系，因而难以在玉米制种中直接应用。美国先锋国际良种有限公司发明了一种新型不育系制种技术-spt种子生产技术，该技术将育性恢复基因、花粉致死基因和籽粒荧光基因连锁构建spt保持系表达盒，然后将其导入到隐性核不育系纯合子基因组中，构建spt系；用spt系给相应不育系授粉，即可得到不育系的后代，解决了核不育系繁种的问题。通过spt技术实现了不育系和保持系的一系两用；同时spt盒只通过雌配子传代，有效杜绝了转基因花粉的扩散，不存在转基因污染的问题。spt种子生产技术成功解决了细胞核雄性不育系和保持系分离的难题，在杂交种制种上已经得到广泛的应用。但是spt技术要求利用的核不育基因具有稳定的彻底败育的表型，而现有的很多核不育的花粉败育性不彻底、不育性不稳定，影响制种质量，亟待寻找花粉败育彻底的核不育基因的材料。技术实现要素：本发明人利用甲基磺酸乙酯(ems)对玉米自交系rp125花粉进行处理，在其诱变后代中意外发现一个不育突变体，该突变体表现为雄花干瘪，花粉粒不可染，为完全败育的雄性不育突变体。经进一步研究发现，该雄性不育受单隐性基因控制，将该核不育基因命名为ms40。本发明是在此意外发现的基础上实现的。现本发明的技术方案如下：本发明提供一种玉米核不育基因ms40，所述的玉米核不育基因ms40由seqidno：1所示的核苷酸序列组成。本发明还提供了上述玉米核不育基因ms40在玉米制种上的应用。本发明提供了上述玉米核不育基因ms40在培育隐性雄性不育的转基因玉米中的应用。本发明还提供了上述核不育基因编码的蛋白质，所述的蛋白质由seqidno：2所示的氨基酸序列组成。本发明还提供了上述核不育基因ms40的分子标记，所述分子标记的pcr扩增引物由seqidno：3和seqidno：4所示的核苷酸序列组成；所述引物序列为：正向引物ms40-indel-f:5′-cctcattgtcccgcctctg-3′(seqidno：3)，反向引物ms40-indel-r:5′-ccgccgtacgtacaatgaca-3′(seqidno：4)。本发明还提供了上述分子标记在鉴定玉米核不育基因ms40上的应用。本发明还提供了用于扩增上述分子标记的引物，所述的引物由seqidno：3和seqidno：4所示的核苷酸序列组成。本发明还提供了利用上述分子标记鉴定筛选玉米核不育材料的方法，包括以待测玉米样品基因组dna为模板，以seqidno：3和seqidno：4所示的核苷酸序列为引物进行pcr扩增，得扩增产物；如果扩增产物仅为一条65bp的带，则该植株为不育株；如果扩增产物仅为一条72bp的带，则该植株为纯合可育株；如果扩增产物为一条72bp的带和一条65bp的带，则该植株为杂合可育株。本发明还提供了上述核不育基因ms40的snp标记，所述的snp标记的扩增引物由seqidno：5和seqidno：6所示的核苷酸序列组成。所述引物为：正向引物snp-f:5′-tgtcattgtacgtacggcgg-3′(seqidno：5)，反向引物snp-r:5′-cgtgggatgtacggcgatg-3′(seqidno：6)。本发明还提供了利用上述snp标记鉴定筛选核不育基因ms40材料的方法，包括以待测玉米材料基因组dna为模板，以seqidno：5和seqidno：6所示的核苷酸序列为引物进行pcr扩增，得片段大小为957bp的扩增产物，然后对所得扩增产物进行测序；通过一代测序，检测其438位碱基；若该位置碱基为c，则该待测玉米材料的基因型为可育野生型植株；若该位置碱基为t，则该待测玉米材料的基因型为ms40突变体；若该位置碱基为c/t，则该待测玉米材料的基因型为野生型和突变体的杂合基因型。与现有技术相比，本发明具有如下优点：(1)本发明提供了一种新的玉米核不育基因ms40，其突出特点是败育时期较早，且败育彻底，在玉米制种中具有巨大利用价值；(2)本发明核不育基因为snp突变，该突变体只影响育性，对其他基因的基因功能没有影响，因而对其他农艺性状等都没有影响，其在不同的遗传背景下不育性很稳定，利用价值较大；(3)该核不育基因可通过spt技术用于玉米制种，具有广阔的应用前景。附图说明图1为野生型rp125和不育突变体ms40的花药对比照片；其中1为野生型rp125；2为不育突变体ms40。图2为野生型rp125和不育突变体ms40的雄穗对比照片；其中1为野生型rp125；2为不育突变体ms40。图3为野生型rp125和不育突变体ms40的花药显微照片；其中1为野生型rp125；2为不育突变体ms40。图4为本发明玉米雄性核不育基因ms40与其分子标记在染色体上的相对位置及候选基因示意图。图5为利用本发明分子标记鉴定不育材料和可育材料的电泳图谱；其中1为不育株；2、4、5、7、8和9为纯合可育株；3、6、11和12为带型杂合的可育株。具体实施方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例1本发明玉米核不育突变体的发现过程(1)2015年春，用ems(甲基磺酸乙酯)对玉米自交系rp125的花粉进行处理，再用处理后的花粉为玉米自交系rp125授粉，获得m1代种子。(2)种植m1代，对每一株m1植株进行自交，收获得m2代；(3)按照不同果穗分小区种植m2代，在开花期对每一个m2代植株的花药形态进行田间观察，并对所有实验材料进行单株挂牌，从植株雄穗有少量花药外露时开始，逐株进行育性调查，重复调查3次，每两天调查一次，调查时同时收集调查数据，最后进行统计分析。结果在一个小区中发现存在育性异常的突变体植株，该突变体在植株在营养生长阶段和生殖生长阶段与野生型(rp125)均没有明显差异，但是雄穗的小穗形态与野生型差异明显。将小穗在体式显微镜下观察，发现野生型小穗饱满充实，内含大量花粉粒，粒大而饱满；但突变体的小穗干瘪，不含花粉粒(分别见图1、图2和图3)，该突变体的花粉粒败育彻底。将该核不育突变体命名为ms40，为了保存不育突变体，用野生型rp125给不育株授粉。实施例2本发明不育突变体ms40的不育性状的遗传分析按照如下方法进行：用野生型rp125花粉为实施例1中不育突变体ms40授粉得到f1代，f1代自交获得f2代；对f2代植株进行育性调查及统计，育性调查方法参照实施例1步骤(3)。镜检结果：可染株为155株，不可染株为39株，经卡方检验符合3:1的分离比例，说明该突变体的不育性状由隐性单基因控制。将该核不育基因命名为ms40。另外，观察还发现不育突变体在开放授粉情况下可以正常授粉结实，说明该突变体的雌性发育不受该核不育基因的影响。实施例3本发明核不育基因ms40的初定位按照如下方法进行：(1)选取均匀覆盖在玉米10条染色体上的134对indel分子标记，利用双亲(本发明不育突变体ms40，b73)对引物进行初筛，得到42对在双亲间呈现多态性的引物；(2)随机选取(ms40×b73)f2群体中完全可育株和完全不育株各15株，利用ctab法提取叶片dna。分别等量混合各株dna，构建可育池dna和不育池dna；利用步骤(1)中筛选到的多态性引物对不育池dna和可育池dna进行基因分型，结果发现umc2289与umc1940两对分子标记(相应的引物见表1)在不育池中与ms40带型一致，在可育池中与(ms40×b73)f1带型一致。两对分子标记位于4号染色体长臂末端。为了进一步证明该上述两对分子标记是否与不育性状连锁，以f2群体中完全不育单株dna为模板，以上述两对引物为引物进行pcr扩增。表1初定位的两对分子标记的引物序列分子标记正向引物(5′--3′)反向引物(5′--3′)umc2289ggctccgattcacttgatgccagcaccacccagttaaccacumc1940aacaacaaatgggatctccgttacccatctgctgagggcttatctg结果发现扩增的带型出现了偏分离现象，即大部分不育株与ms40一致的带型，因此，将ms40基因初步定位于第4染色体长臂上的umc2289与umc1940两个分子标记之间，两个分子标记之间的物理位置间隔为19.57mb。实施例4本发明核不育基因ms40的精细定位和候选基因克隆(1)为进一步缩小定位区间，扩大了不育突变体(ms40×b73)f2群体，通过育性调查，一共鉴定出735株完全不育单株，通过ctab法对不育单株的叶片dna进行提取。(2)在实施例3中的初定位区间内，在该区段内开发了34对在双亲(不育突变体ms40，b73)和其f1呈多态性的indel标记。最终利用735株完全不育单株将候选基因定位于x214和x242两个分子标记之间(相应引物序列见表2)，两个分子标记分别存在1株和2株交换单株。两个分子标记之间的物理位置间隔为282kb,其中包含有5个候选基因(见图4)。表2精细定位的两对分子标记的引物序列分子标记正向引物(5′--3′)反向引物(5′--3′)x214agcggcaagattctccctttcatgtttgtacctgcgctgcx242gatatggccggccttttgttgagccctaccagtaccagtg(3)通过对5个候选基因进行功能注释，并根据该突变体的突变表型，以及文献报道(ferguson等.newphytologist,2016；swee-suakko等.plantcell,2014)，推测基因登录号zm00001d053895可能为一个该核不育基因的候选基因。(4)根据步骤(3)推测的候选基因，设计引物ms40-f，ms40-r；以野生型rp125和不育突变体ms40的dna为模板进行扩增。使用toyobo公司高保真酶kodfx对目的序列进行扩增。pcr反应体系(50ul)：2×kodbuffer25ul，dntp10ul，正向和反向引物各1.5ul，100ng/ul模板dna1ul，kod酶1ul，加ddh2o至50ul。pcr反应程序为：94℃5min，98℃10s，55℃30s，68℃2.30min，68℃8min，4℃保存，35～40个循环。结束反应，配制1.5％的琼脂糖凝胶，在150v的电泳仪电泳25min，采用美基生物琼脂糖凝胶dna回收试剂盒回收pcr产物并进行ta克隆。其中上述引物为：正向引物ms40-f:5′-agctcatgcaaagacccgaa-3′(seqidno：7)，反向引物ms40-r:5′-ccacacatgcatgaggcaac-3′(seqidno：8)。(5)将检测为阳性的菌液送至擎科生物技术有限公司用abi3730xldna测序仪进行双向测通，利用codoncodealigner5.1及dnaman对目标序列进行分析。通过对野生型和突变体序列进行比较发现，在玉米ms40基因编码区第7个外显子的第22个碱基处，由野生型的碱基c突变为突变体的碱基t，并导致其编码的氨基酸发生了改变，由甘氨酸(ggg)突变为碱性精氨酸(agg)。因此推测zm00001d053895是不育性状的目的基因。该核不育基因ms40的核苷序列如seqidno：1所示，其蛋白的氨基酸序列如seqidno：2所示。实施例5玉米隐性核不育基因ms40关键候选基因snp分子标记验证试验(1)以突变体ms40为母本，野生型rp125为父本进行杂交得到f1，自交后得到f2，在f2群体中进行姊妹交，分果穗种植姊妹交群体。(2)在苗期对姊妹群体的育性基因型进行鉴定在苗期，对姊妹交群体的所有单株取5g新鲜玉米叶片，采用ctab法提取基因组dna。根据实施例4中寻找到的突变位点设计snp标记的引物snp-f，snp-r，以提取的基因组dna为模板，以snp-f和snp-r为引物进行pcr扩增，引物序列如下：正向引物snp-f:5′-tgtcattgtacgtacggcgg-3′(seqidno：5)，反向引物snp-r:5′-cgtgggatgtacggcgatg-3′(seqidno：6)。pcr的反应体系为：tiangen的taqdnapolymerase，10×taqbuffer2.4ul，2.5mmdntpmixture0.8ul，10um的正向反向引物各0.2ul，2.5u/uldnapolymerase0.2ul，模板dna80ng，补ddh20至15ul；pcr的反应条件为：预变性95℃5min；变性95℃30s，退火67℃30s，延伸72℃30s，循环10次，每次退火温度降低1℃；变性95℃30s，退火57℃30s，延伸72℃30s，循环35次；充分延伸72℃5min。最后4℃保存。(4)所得扩增产物的片段大小为957bp，将扩增产物送至擎科生物进行测序，根据突变位点碱基判断单株基因型，即检测其438位碱基，若该位置碱基为c，则该待检植株为野生型基因型；若该位置碱基为t，则该待检植物基因型为突变体基因型；若该位置碱基为c/t，则标志着该待检植株为杂合基因型，并在田间对单株进行标记。(5)育性田间调查在散粉期，对姊妹交群体的每一个单株进行育性调查。育性调查方法参照实施例1步骤(3)。通过对基因型数据与育性调查结果进行比对，发现基因型为野生型基因型的，其田间育性均为可育；基因型为突变体基因型的，其田间育性均为不育；基因型为杂合基因型的,田间育性均为可育。因此，基因型数据与田间育性调查结果一致，说明ms40雄性不育突变表型是由该关键候选基因的snp突变所导致。实施例6与核不育ms40基因型-表型共分离的分子标记的设计、筛选与鉴定按照如下方法进行：(1)采用ctab法提取双亲(双亲分别为核不育突变体ms40和b73)成熟期叶片的dna，分别以所提取的基因组dna为模板，以ms40-f、ms40-r为引物进行pcr扩增，并克隆测序，发现了一些indel差异，根据这些差异位点设计开发了6对标记。所设计标记的引物如下(见表3)：表3根据双亲差异设计的indel引物(2)以双亲(核不育突变体ms40，b73)和其f1的dna为模板，分别以表3中的6对引物为引物进行pcr扩增。pcr的反应体系为：tiangen的taqdnapolymerase，10×taqbuffer2.4ul，2.5mmdntpmixture0.8ul，10um的正向反向引物各0.2ul，2.5u/uldnapolymerase0.2ul，模板dna80ng，补ddh20至15ul；pcr的反应条件为：预变性95℃5min；变性95℃30s，退火67℃30s，延伸72℃30s，循环10次，每次退火温度降低1℃；变性95℃30s，退火57℃30s，延伸72℃30s，循环35次；充分延伸72℃5min。最后4℃保存。结果只有引物6在双亲和f1之间呈多态性。(3)引物连锁鉴定以(ms40×b73)f2群体中的不育株和可育株对引物6进行基因型鉴定，结果(见图5)发现可育株只能扩增出一条72bp的带，或者同时扩增出一条72bp的带和一条65bp的带；不育株只能扩增出一条65bp的带。上述结果说明用引物6扩增所得dna片段与育性基因连锁紧密，且为共显性，可作为核不育基因ms40的分子标记。将引物6扩增所得分子标记命名为ms40-indel。所述的引物6为：正向引物ms40-indel-f:5′-cctcattgtcccgcctctg-3′(seqidno：3)，反向引物ms40-indel-r:5′-ccgccgtacgtacaatgaca-3′(seqidno：4)。实施例7利用分子标记辅助选择核不育基因ms40的回交转育试验按照如下方法进行：(1)以核不育突变体材料ms40为母本，以b73为父本杂交，获得f1代；(2)播种f1代；在开花期以f1为母本，以轮回亲本b73为父本进行回交，获得bc1代；(3)bc1代中带有核不育基因材料的选择：播种bc1代，获得不少于500株幼苗，在幼苗期采集各单株叶片，用ctab法提取单株dna，以ms40-indel-f和ms40-indel-r为引物进行pcr扩增；保留带型为双带的杂合基因型单株，拔除纯合野生型的单株；(4)在成株期选取与轮回亲本b73相似度高(例如大于88％相似度)的材料；以所选bc1代单株为父本为轮回亲本b73授粉，获得bc2代；(5)对选出的bc2代材料重复步骤(3)和步骤(4)的操作2-4次，选出与轮回亲本b73相似度高的回交代植株；自交，获得bc4f2-bc6f2代；(6)将步骤(5)中选出的单株进行背景筛选，选择除了不育性状外，其余性状与b73背景相似度接近100％的单株，如果选的单株扩增后为纯合突变体，则该单株为最终目标材料，可进一步与轮回亲本杂交保存材料，或与其他玉米材料进行杂交；利用实施例6中的分子标记ms40-indel对单株基因型进行鉴定，若单株是杂合带型(即同时扩增出一条72bp的带和一条65bp的带)，即可直接用于保存种质，或通过自交获得不育株用于杂交育种或制种。通过上述分子标记辅助选择，不仅可以加快转育进程，节省了人力物力，而且极大的缩短了育种年限。另外，除了不育性状外，回交转育所得材料与b73表现相同，说明不育基因对其他性状没影响。以上所述仅是本发明的优选实施方案，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视本发明的保护范畴。序列表<110>四川农业大学<120>一种玉米雄性核不育基因ms40及其分子标记和应用<141>2020-06-30<160>8<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>1680<212>dna<213>zeamays<400>1atgggagggggagtccaccaccaccacccgtgcgtggctgctgatggagatggggccggg60gccgggcccgggccggccagcgtggaggccgcgttgaggcctcttgtcggcgtcgacgcc120tgggactactgcgtctactggaggctgtctcctgatcagaggttcttggagatggctggg180ttctgctgcagcagtgagttcgaggcacagcttccagcgctgggcgacctgcctccatca240atccagctcgactcctcgtctgcagggatgcacgccgaggcaatggtgtccaaccagccg300atctggcagagcagccgcgtgccagagctccaaacaggttactccagtggcatggtgcag360gagcccgggtccggcggcggcccgaggacgcggctgctggtgcccgtcgccggcggcctc420gtcgagctcttcgcggcgagatacatggcggaggaggagcagatggcggagctggtgatg480gcgcagtgcggggtgccgagcggcggcgaggggggcgcgtggccaccgggattcgcgtgg540gacggcggcgccgcggacgcgtcgcgtgggatgtacggcgatgcggtgccgccgtcgctc600agcctgttcgacgccgccggcagcgtcgcggcggacccgttccaggcggtgcagcaggcg660ccgggcgccggtggtggtggggtggacgacgtcgccgggtggcagtatgctgctgcggct720gggagcgagctggaggcggtgcagctgcagcaggagcagcagccgcgcgatgcggactcg780gggtccgaggtcagcgacatgcagggggacccagaggacgacggcgacggcgacggcgac840gcgcaggggcgtggcggcggcaagggcggcgggaagcggcagcagtgcaagaacctcgag900gcggagcggaagcggcggaagaagctcaacgagcggctctacaagctcaggtcgctcgtc960ccgaacatctccaagatggaccgcgcggcgatcctcagggacgccatcgactacatcgtg1020ggcctgcagaaccaggtgaaggcgctgcaggacgagctggaggacccggcggacggcgcc1080ggcgcccccgacgtcctcctggaccacccgccgccggcgagcctggtggggctggagaac1140gacgagtcgccgcccacgagccaccagcacccgctcgccgggaccaagagggcccgtgcg1200gcggcggaggaggaggaggaggagaaggggaacgacatggagccgcaggtggaggtgcgg1260caggtggaggccaacgagttcttcctgcagatgctgtgcgagcgccggcccgggcgcttc1320gtccagatcatggactccatcgccgacctgggactggaggtcaccaacgtcaacgtcacc1380tcccacgagagcctcgtcctcaacgtcttccgcgccgccaggcgggacaatgaggtggca1440gtgcaggcggacagactgagggactcgctgctggaggtgatgcgggagccgtacggcgta1500tggtcgtcgtcggcgccgccggtggggatgagcggcagcggcatcgccgacgtgaagcat1560gacagcgtggacatgaagctcgatggcatcatcgacgggcaggcggcaccgagcgtcgca1620gtgggggtttcagaggatcactacggcggctacaaccatctcctccaatacctcgcttga1680<210>2<211>559<212>prt<213>zeamays<400>2metglyglyglyvalhishishishisprocysvalalaalaaspgly151015aspglyalaglyalaglyproglyproalaservalglualaalaleu202530argproleuvalglyvalaspalatrpasptyrcysvaltyrtrparg354045leuserproaspglnargpheleuglumetalaglyphecyscysser505560serglupheglualaglnleuproalaleuglyaspleuproproser65707580ileglnleuaspserserseralaglymethisalaglualametval859095serasnglnproiletrpglnserserargvalprogluleuglnthr100105110glytyrserserglymetvalglngluproglyserglyglyglypro115120125argthrargleuleuvalprovalalaglyglyleuvalgluleuphe130135140alaalaargtyrmetalagluglugluglnmetalagluleuvalmet145150155160alaglncysglyvalproserglyglygluglyglyalatrppropro165170175glyphealatrpaspglyglyalaalaaspalaserargglymettyr180185190glyaspalavalproproserleuserleupheaspalaalaglyser195200205valalaalaasppropheglnalavalglnglnalaproglyalagly210215220glyglyglyvalaspaspvalalaglytrpglntyralaalaalaala225230235240glysergluleuglualavalglnleuglnglngluglnglnproarg245250255aspalaaspserglysergluvalseraspmetglnglyaspproglu260265270aspaspglyaspglyaspglyaspalaglnglyargglyglyglylys275280285glyglyglylysargglnglncyslysasnleuglualagluarglys290295300argarglyslysleuasngluargleutyrlysleuargserleuval305310315320proasnileserlysmetaspargalaalaileleuargaspalaile325330335asptyrilevalglyleuglnasnglnvallysalaleuglnaspglu340345350leugluaspproalaaspglyalaglyalaproaspvalleuleuasp355360365hisproproproalaserleuvalglyleugluasnaspgluserpro370375380prothrserhisglnhisproleualaglythrlysargalaargala385390395400alaalagluglugluglugluglulysglyasnaspmetgluprogln405410415valgluvalargglnvalglualaasngluphepheleuglnmetleu420425430cysgluargargproglyargphevalglnilemetaspserileala435440445aspleuglyleugluvalthrasnvalasnvalthrserhisgluser450455460leuvalleuasnvalpheargalaalaargargaspasngluvalala465470475480valglnalaaspargleuargaspserleuleugluvalmetargglu485490495protyrglyvaltrpserserseralaproprovalglymetsergly500505510serglyilealaaspvallyshisaspservalaspmetlysleuasp515520525glyileileaspglyglnalaalaproservalalavalglyvalser530535540gluasphistyrglyglytyrasnhisleuleuglntyrleuala545550555<210>3<211>19<212>dna<213>zeamays<400>3cctcattgtcccgcctctg19<210>4<211>20<212>dna<213>zeamays<400>4ccgccgtacgtacaatgaca20<210>5<211>20<212>dna<213>zeamays<400>5tgtcattgtacgtacggcgg20<210>6<211>19<212>dna<213>zeamays<400>6cgtgggatgtacggcgatg19<210>7<211>20<212>dna<213>zeamays<400>7agctcatgcaaagacccgaa20<210>8<211>20<212>dna<213>zeamays<400>8ccacacatgcatgaggcaac20当前第1页12