本发明涉及体外诊断领域，特别涉及一种rna保存液及其制备方法和应用。
背景技术：
核糖核酸(ribonucleicacid，rna)存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。由至少几十个核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接而成的一类核酸，因含核糖而得名。每个rna分子都由核苷酸单元长链组成，每个核苷酸单元含有一个含氮碱基、一个核糖和一个磷酸基。含rna的生物样品一旦从体内采集分离，它的rna会变得非常不稳定，极易被降解。且rna是单链结构，在提取过程或保存过程中都极易发生降解。因此，rna的提取和保存过程需要进行严格的处理，防止rna发生特异或非特异的降解。
rna为细胞的主要成分之一，参与细胞的各种功能活动，是生物学、医学和药学等生命有关学科的重要研究对象，rna检测更是分子生物学研究的一个重要技术，包括生物芯片、基因表达矩阵分析(arrayanalysis)和定量rt-pcr检测等。大多数情况下，由于各种各样的原因，rna从生物样本中提取出来后并不能立刻得到检测，而需进行保存，以便后续的研究使用。因此，rna保存过程中的质量和完整性会显著影响检测结果的准确性和可靠性。
在生物样品中广泛存在并极度稳定的rnase对rna的水解作用很强，许多rnase对rna的降解作用不需任何辅助因子，给rna的纯化、储存和使用带来极大困难。因此，一种能够有效防止rna降解，不影响后续检测结果的rna保存液，对rna的分子生物学检测非常重要，也是目前rna保存迫切需要解决的技术难题。
申请公布号cn111172239a的发明专利公开了一种病毒样本保存液，包括硫氰酸胍、吐温-20、聚多卡醇、乙醇、柠檬酸三钠、柠檬酸和二硫苏糖醇。但该保存液仅保证rna在室温下保存24小时内不降解。
申请公布号cn110616218a的发明专利公开了一种血液rna保存液，由如下组分组成：异硫氰酸胍、kcl、edta、tween20、8-羟基喹啉、巯基乙醇和水。该血液rna保存液可以使血液中rna在4℃保存至少一周不降解，-20℃保存至少4周不发生降解。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供了一种rna保存液及其制备方法和应用。该rna保存液可以使rna在室温保存1个月、在2-8℃保存6个月，解决了rna提取后保存不稳定的问题。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种rna保存液，rna保存液包括如下组分：
tris-hcl、edta-na2、蛋白酶k、np-40、甘油、carrierrna及depc水。
作为优选，rna保存液中各组分浓度为：
优选地，rna保存液中各组分浓度为：
更优选地，rna保存液中各组分浓度为：
作为优选，rna保存液的ph值为6.6～7.6。
优选地，rna保存液的ph值为7.2。
本发明还提供了该rna保存液的制备方法，将tris-hcl、edta-na2、蛋白酶k、np-40、甘油、carrierrna和depc水混合，调节ph值。
本发明还提供了该rna保存液作为磁珠法提取rna的洗脱液的应用，或者作为提取rna后的rna稀释液的应用。也可以直接加入扩增反应液内进行下一步实验。
在本发明中，rna为mrna、mirna、snrna、scrna中的一种或几种。
本发明还提供了一种rna的保存方法，将rna溶于上述rna保存液，置于-80～30℃下保存。
作为优选，保存温度为-20～8℃。
本发明提供了一种rna保存液及其制备方法和应用。该rna保存液包括如下组分：tris-hcl、edta-na2、蛋白酶k、np-40、甘油、carrierrna及depc水。本发明具有的技术效果为：
本发明的rna保存液洗脱后可以使rna在室温保存1个月、在2-8℃保存6个月，解决了rna提取后保存不稳定的问题；
而且本发明中使用的成分均无毒无害，具有安全性，制造成本低廉。
具体实施方式
本发明公开了一种rna保存液及其制备方法和应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
术语解释：
tris-hcl：中文别名为三(羟甲基)氨基甲烷、氨丁三醇、缓血酸铵、三羟甲基氨基甲烷、tris，英文名称为tris(hydroxymethyl)aminomethane；
edta-na2：中文别名为乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸二钠盐、依地酸二钠、edta二钠，英文名为ethylenediaminetetraaceticaciddisodiumsalt；
np-40：nonidetp40的缩写，中文译为乙基苯基聚乙二醇；
carrierrna：是片段在200-3000nt之间的rna混合物，溶解于rna保护剂中，浓度为6μg/μl。在柱纯化微量核酸的过程中，比如病毒rna纯化、病毒dna纯化及微量dna提取等，微量的核酸在纯化柱上的结合和洗脱效率降低，导致不能回收到足够的pcr模板，最终导致检测失败。在柱纯化核酸纯化体系中添加carrierrna，可提高10倍以上微量核酸的回收效率，同时由于carrierrna的存在，还可特别保护微量的rna模板，减少rna酶对微量rna模板的攻击机率；
depc水：是用depc(diethylpyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压灭菌的超纯水(一级水)，无色液体。经检测不含杂质rna、dna和蛋白质。
本发明提供的rna保存液及其制备方法和应用中所用试剂或仪器均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1本发明保存液的配制
根据需要确定配制体积，按标准配方计算出各种原料的用量。在容器中加入所需量的各组分，其中tris-hcl缓冲液浓度为10mm、edta-na2终浓度为0.1mm、蛋白酶k浓度为10μg/ml、np-40浓度为0.01％、甘油浓度为5％、carrierrna浓度为2μg/ml，加depc水至终体积的80％，使其充分混匀；测ph值，调整ph至7.2；使用depc水定容至所需体积。配制完毕，放置于室温保存。
实施例2本发明保存液的保存效果
使用磁珠法提取血清中hcv病毒rna，在最后一步对rna进行洗脱时使用本保存液；洗脱后的rna混匀后分装每支60μl用于测试。分别置于室温和2-8℃，室温检测0/7/14/28天时的ct值，每次3个复孔。2-8℃检测0、1/2/3/6月时的ct值。检测结果如下：
表1rna保存稳定性检测
结论：从表1可以看出，本发明的rna保存液可以使rna在室温保存28天，在2-8℃保存6个月。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。