1.一种绿藻植物铁蛋白的表达纯化方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)重组蛋白表达工程菌的构建:
将绿藻铁蛋白的基因序列亚克隆至质粒载体中,即得到含有目的基因的质粒,将该质粒热激转化至大肠杆菌感受态细胞中,通过氨苄青霉素抗性筛选阳性单克隆转化子,将阳性单克隆转化子热激转化至大肠杆菌中,挑取单菌落获得重组蛋白表达工程菌;
(2)重组蛋白的表达和收获:
将步骤(1)所得的重组蛋白表达工程菌接种于含氨苄青霉素的tb培养基中培养,当od600=2时,加入iptg诱导,离心收菌;
(3)重组蛋白的分离纯化:
将步骤(2)得到的菌体超声破碎后离心取上清,采用亲和层析法对目的蛋白和其余杂蛋白进行分离纯化,柱上酶切去除gst标签后,再通过体积排阻色谱对重组的目的蛋白进一步纯化,最终得到绿藻重组植物蛋白。
2.如权利要求1所述的绿藻植物铁蛋白的表达纯化方法,其特征在于:步骤(1)中,绿藻植物铁蛋白的编码基因的序列为seqidno.1所示的核苷酸序列。
3.如权利要求1或2所述的绿藻植物铁蛋白的表达纯化方法,其特征在于:步骤(1)中,绿藻植物铁蛋白的编码蛋白为seqidno.2所示的氨基酸序列。
4.如权利要求1或2所述的绿藻植物铁蛋白的表达纯化方法,其特征在于:绿藻为孔石莼。
5.如权利要求1或2所述的绿藻植物铁蛋白的表达纯化方法,其特征在于:步骤(1)中,大肠杆菌为e.colibl21(de3)菌株。
6.如权利要求1或2所述的绿藻植物铁蛋白的表达纯化方法,其特征在于:步骤(2)为,将步骤(1)所得的重组蛋白表达工程菌以1±0.2%的比例接种于含氨苄青霉素的tb培养基中,37±3℃震荡培养约4±0.5h,当od600=2时,加入iptg诱导,离心收菌。
7.如权利要求1或2所述的绿藻植物铁蛋白的表达纯化方法,其特征在于:步骤(2)中,iptg的终浓度为1±0.1mm,诱导温度为25±3℃,时间为12±2h。
8.如权利要求1或2所述的绿藻植物铁蛋白的表达纯化方法,其特征在于:步骤(3)包括:
(31)将步骤(2)得到的菌体沉淀用结合/清洗缓冲液进行重悬,将菌体超声破碎,离心后收集上清;
(32)将上清过0.45μm滤膜后与gst琼脂糖树脂结合,用结合/清洗缓冲液重复清洗除去杂蛋白;
(33)将凝血酶溶于pbs缓冲液中,摇晃后与步骤(32)所得树脂结合,室温孵育4±0.5小时后,流出液中包含目的蛋白和凝血酶;
(34)将步骤(33)中的流出液超滤浓缩后,通过体积排阻色谱进一步纯化,即得到绿藻重组植物蛋白。
9.权利要求1-8任意一项所述的绿藻植物铁蛋白的表达纯化方法所得绿藻重组植物蛋白的应用,其特征在于:用于黄酮类化合物的装载。
10.如权利要求9所述的应用,其特征在于:黄酮类化合物装载的方法,包括如下步骤:
a、将黄酮类化合物溶于无水乙醇制备成母液;
b、在步骤(3)得到的绿藻重组植物蛋白中添加尿素避光孵育2±0.3h,得蛋白溶液;
c、步骤a的母液加入到步骤b所得的蛋白溶液中,4℃条件下避光搅拌搅拌约30±5min,然后将溶液转移至透析袋中,透析除去尿素和未结合的分子,离心后,得到的澄清透明浅黄色溶液为绿藻重组植物蛋白-黄酮类复合物,绿藻重组植物蛋白与黄酮类化合物的摩尔浓度比为1:(500±50)。