技术特征：
1.一种aav衣壳蛋白，其包括含有来自序列sttlysp(seq id no:1)或fvvgqsy(seq id no:2)的至少四个连续氨基酸的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的aav衣壳蛋白，其包括含有来自序列sttlysp(seq id no:1)或fvvgqsy(seq id no:2)的至少五个连续氨基酸的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的aav衣壳蛋白，其包括含有来自序列sttlysp(seq id no:1)或fvvgqsy(seq id no:2)的至少六个连续氨基酸的氨基酸序列。4.根据权利要求1至3任一项所述的aav衣壳蛋白，其中所述aav为aav9。5.根据权利要求1至4任一项所述的aav衣壳蛋白，其包含aav9 vp1。6.根据权利要求5所述的aav衣壳蛋白，其中所述序列插入在对应于seq id no:6的氨基酸588和589的位置中。7.一种核酸，其编码根据权利要求1至6任一项所述的aav衣壳蛋白。8.一种aav，其包含根据权利要求1至6任一项所述的衣壳蛋白，并优选地不包含野生型vp1、vp2、或vp3衣壳蛋白。9.根据权利要求8所述的aav，其进一步包含转基因，优选地治疗性转基因。10.一种将转基因递送至细胞的方法，所述方法包括使所述细胞与根据权利要求1至9任一项所述的aav相接触。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述细胞为神经元(任选地，背根神经节神经元或螺旋神经节神经元)、星形胶质细胞、心肌细胞、或肌细胞、星形胶质细胞、神经胶质细胞、内毛细胞、外毛细胞、支持细胞、内耳的纤维细胞、光感受器、中间神经元、视网膜神经节、或视网膜色素上皮细胞。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述细胞在活受试者中。13.根据权利要求11所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物受试者。14.根据权利要求10至13任一项所述的方法，其中所述细胞在选自脑、脊髓、背根神经节、心脏、内耳、眼、或肌肉、及其组合的组织中。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述受试者患有阿尔茨海默症；帕金森氏症；x
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连锁肾上腺脑白质营养不良；canavan病；尼曼匹克症；脊髓型肌肉萎缩症；亨廷顿病；connexin
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26；usher综合征3a型；usher综合征2d型；毛细胞相关听力丧失；毛细胞相关听力丧失(dfnb7/11)；内毛细胞相关听力丧失(dfnb9)；usher综合征1f型；usher综合征1b型；视网膜色素变性(rp；非综合征)；莱伯氏先天性黑蒙症；莱伯氏遗传性视神经病变；usher综合征(rp；伴有耳聋的综合征)；杜兴氏肌肉营养不良；同种异体移植血管病变；血友病a和b。16.根据权利要求10至13中任一项所述的方法，其中所述细胞在受试者脑中，和所述aav通过肠胃外递送；脑内；或鞘内递送来施用。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述鞘内递送是通过腰椎注射、小脑延髓池注射、或实质内注射。18.根据权利要求10至16任一项所述的方法，其中所述aav通过肠胃外递送、优选地通过静脉内、动脉内、皮下、腹腔内、或肌内递送来递送。19.根据权利要求10至13中任一项所述的方法，其中所述细胞在所述受试者眼中，和所述aav通过视网膜下或玻璃体内注射来施用。20.根据权利要求10至13中任一项所述的方法，其中所述细胞在所述受试者的内耳中，
和所述aav通过在圆窗膜上或通过圆窗膜应用、通过邻近圆窗的外科手术钻孔耳蜗造口术、骨卵圆窗中的膜孔、或半规管来施用至耳蜗。21.一种文库构建体aav，其包括：(i)由启动子驱动的编码cre重组酶的序列；(ii)cre盒下游的、由启动子驱动的、编码具有插入在编码衣壳的氨基酸(aa)588
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589的序列之间的七聚体肽的aav9衣壳蛋白的序列。22.根据权利要求21所述的文库构建体aav，其中所述七聚体包括随机七聚体肽或预选的七聚体肽。23.一种文库，其包括多个根据权利要求21或22所述的文库构建体。24.根据权利要求23所述的文库，其中所述文库包括具有编码所述七聚体的所有可能变体的序列的文库构建体。25.一种识别在预选的细胞类型中介导转基因表达的工程化衣壳的方法，所述方法包括：(a)将根据权利要求23或24所述的文库施用至非人模型动物，优选哺乳动物，其中所述模型动物的细胞表达报告序列的上游的loxp
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侧翼的stop盒；(b)分离预选的细胞类型的细胞；(c)选择表达所述报告序列的细胞；(d)从来自步骤(c)的表达所述报告序列的所选细胞分离文库构建体的至少一部分、优选包括七聚体的部分；和(e)确定步骤(d)中分离的文库构建体中的七聚体的身份，其中分离的七聚体可在所述预选的细胞类型中介导转基因表达。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述报告序列编码荧光报告蛋白。27.根据权利要求25所述的方法，其中所述模型动物对于具有报告序列的上游的loxp
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侧翼的stop盒是转基因的，或其中所述报告序列的上游的loxp
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侧翼的stop盒可由第二构建体表达。28.根据权利要求25所述的方法，其中确定文库构建体中的七聚体的身份包括使用dna测序分析。29.根据权利要求25所述的方法，其在步骤(e)之前和/或之后还包括：使用pcr从步骤(d)中分离的文库构建体扩增包含七聚体序列、任选地包含完整衣壳序列的序列；将扩增的序列克隆回第二组文库载体；重新包装第二组文库载体；和对第二组文库载体进行步骤(a)
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(d)或(a)
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(e)。
技术总结
用于例如CNS、PNS、内耳、心脏、或视网膜中的转基因表达的工程化AAV载体及其使用方法。还提供了开发在期望的细胞类型中介导转基因表达的新工程化AAV载体的方法。表达的新工程化AAV载体的方法。表达的新工程化AAV载体的方法。
技术研发人员：C
受保护的技术使用者：哈佛大学
技术研发日：2020.03.30
技术公布日：2021/12/30