一种用于棉粕脱毒的复合菌剂及其制备方法和应用

1.本发明涉及复合菌剂的技术领域，尤其涉及一种用于棉粕脱毒的复合菌剂。


背景技术：

2.我国的蛋白饲料资源尤其优质蛋白饲料原料严重短缺，每年粮油饲料资源需求量达3.5亿吨，其中进口量占需求量1/3左右，大豆和鱼粉的进口量居世界第一。2018年全国棉花种植面积为3352.3千公顷，产量达609.6万吨。棉花的种子称为棉籽，是重要的油料来源，棉籽经过机械压榨或预榨浸提等方式可产生12％～18％棉籽油和45％棉籽饼粕副产物。棉粕中粗蛋白含量在35％以上，且价格相对低廉，但棉粕中含有内源性毒素—游离棉酚(fg)，fg对畜禽的生长繁殖具有一定的毒害作用，限制了棉粕在畜禽饲料中的应用。近年来，国内外学者致力于棉粕的脱毒研究，脱毒后的棉粕不但有害成分显著降低，且饲料品质也明显改善。
3.由国内外棉粕的研究进展来看，国内研究主要针对选育高降解棉酚菌株，所得到的菌株虽然具有较好的脱毒性，但是单菌发酵作用效果较为单一，利用复合菌种混合发酵棉粕，可以在保证脱毒率的同时有效改善棉粕的营养品质，此外，微生物发酵可以产生多种酶类，在生长代谢过程中，不仅可以有效降低游离棉酚含量，还可以提高棉籽蛋白利用率。目前，对于采用产酶菌株复合发酵改善棉粕营养品质的研究报道较为少见。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于为克服现有技术中存在的上述缺陷，提供一种具有棉粕脱毒效果的复合菌剂及其制备方法和应用，该复合菌剂制备工艺简单、成本和能耗低、适应性强、保藏时间长、易于批量生产、脱毒效果稳定且效果好。
5.为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
6.本发明提供了一种用于棉粕脱毒的复合菌剂，所述复合菌剂包含芽孢杆菌bacillus、酿酒酵母saccharomyces cerevisiae和植物乳杆菌lactobacillus plantarum。
7.本发明还提供了一种用于棉粕脱毒的复合菌剂的制备方法，包含如下步骤：
8.(1)将芽孢杆菌加入到lb肉汤培养基，进行摇床振荡培养，得到最终发酵用的芽孢杆菌种子液；
9.(2)将酿酒酵母加入到ypd液体培养基，进行摇床振荡培养，得到最终发酵用的酿酒酵母种子液；
10.(3)将植物乳杆菌加入到mrs液体培养基，进行静置培养，得到最终发酵用的植物乳杆菌种子液；
11.(4)将上述最终发酵用的芽孢杆菌种子液、酿酒酵母种子液和植物乳杆菌种子液进行复配，得到复合菌剂。
12.优选的，所述步骤(1)中，所述lb肉汤培养基的组成成分为蛋白胨0.5～1.5g，酵母粉0.4～0.6g，氯化钠0.4～0.6g，ph值为7.2～7.4，灭菌条件为120～125℃灭菌15～25min；
13.所述步骤(2)中，所述ypd液体培养基的组成成分为酵母浸出粉0.5～1.5g、蛋白胨1.5～2.5g，葡萄糖1.5～2.5g，ph值为7.2～7.4，灭菌条件为120～125℃灭菌15～25min；
14.所述步骤(3)中，所述mrs液体培养基的组成成分为蛋白胨0.5～1.5g、牛肉膏0.5～1.5g、酵母浸出粉0.4～0.6g、葡萄糖1～3g、无水醋酸钠0.4～0.6g、柠檬酸二铵0.1～0.3g、吐温
‑
800.1～0.2ml、硫酸镁0.05～0.06g、硫酸锰0.02～0.03g，ph值为6.2～6.4，灭菌条件为120～125℃灭菌15～25min。
15.优选的，所述步骤(1)中，所述芽孢杆菌种子液的具体制备方法为：挑取1～3环芽孢杆菌接入到4～6ml lb肉汤培养基中，于24～26℃，180～220r/min的条件下振荡培养18～22h，得一级种子液，再将一级种子液倒入40～60ml lb肉汤培养基中，于24～26℃，180～220r/min的条件下振荡培养18～22h，得到的二级种子液作为最终发酵用的芽孢杆菌种子液；
16.所述步骤(2)中，所述酿酒酵母种子液的具体制备方法为：挑取1～3环酿酒酵母接入到4～6ml ypd液体培养基中，于26～30℃，160～200r/min的条件下振荡培养22～26h，得一级种子液，再将一级种子液倒入40～60ml ypd液体培养基中，于26～30℃，160～200r/min的条件下振荡培养22～26h，得到的二级种子液作为最终发酵用的酿酒酵母种子液；
17.所述步骤(3)中，所述植物乳杆菌种子液的具体制备方法为：挑取1～3环植物乳杆菌接入到4～6ml mrs液体培养基中，于35～40℃的条件下静置培养18～22h，得一级种子液，再将一级种子液倒入40～60mlmrs液体培养基中，于35～40℃的条件下静置培养18～22h，得到的二级种子液作为最终发酵用的植物乳杆菌种子液。
18.优选的，所述步骤(4)中，所述芽孢杆菌种子液、酿酒酵母种子液和植物乳杆菌种子液复配的体积比为1～2:1～3:2～3。
19.本发明还提供了用于棉粕脱毒的复合菌剂在棉粕脱毒过程中的应用。
20.优选的，所述应用过程包括：在棉粕发酵培养基上接种用于棉粕脱毒的复合菌剂，然后依次进行发酵，酶解。
21.优选的，所述棉粕发酵培养基的组分为棉籽粕80～85g，麸皮9～10g，红糖5～10g，蒸馏水66～106ml，所述棉粕发酵培养基的灭菌条件为120～125℃灭菌15～25min，所述棉籽粕的粒径为55～65目。
22.优选的，所述发酵过程中，复合菌剂的接种量为占复合菌剂总体积的3～9％，料水比为48～52g:40～45ml，发酵温度为30～40℃，发酵时间为70～75h。
23.优选的，所述酶解条件为自然酶解11～13h。
24.本发明的有益效果如下：
25.(1)本发明方法所采用的芽孢杆菌，具有抗逆性强、易于保存等特点，产蛋白酶，可改善棉粕的蛋白品质，提高棉粕的营养价值。
26.(2)本发明方法选取的芽孢杆菌、酿酒酵母、植物乳酸杆菌三种微生物，利用其综合作用，可降解棉粕中游离棉酚的含量，消除棉粕中抗营养因子，提高蛋白质的利用率，同时兼具微生态制剂的作用，具有改善动物肠道微生态平衡、提高动物免疫力等作用。
27.(3)本发明具有生产工艺简单、能耗低、无三废、投资小、易于规模化生产等特点。
附图说明
28.图1为芽孢杆菌菌株s77中性蛋白酶活性测定结果；
29.图2为酿酒酵母菌菌株zy.003产纤维素酶活性测定结果；
30.图3为实施例2所得复合菌剂发酵后自然酶解12h效果；
31.图4为接种量
‑
水料比的响应面分析；
32.图5为接种量
‑
反应时间的响应面分析图；
33.图6为反应温度
‑
反应时间的响应面分析图；
34.图7为脱毒棉籽粕不同替代比对小鼠血清alt活性的影响(21天)；
35.图8为脱毒棉籽粕不同替代比对小鼠血清ast活性的影响(21天)。
36.保藏说明
37.芽孢杆菌s77，拉丁文名称为bacillus s77，保藏单位名称为中国典型培养物保蔵中心，地址为中国.武汉.武汉大学，保藏日期为2021年5月13日，保藏编号为cctcc no:m 2021528；
38.植物乳杆菌lr002，拉丁文名称为lactobacillus plantarum lr002，保藏单位名称为中国典型培养物保蔵中心，地址为中国.武汉.武汉大学，保藏日期为2021年5月13日，保藏编号为cctcc no:m 2021527。
具体实施方式
39.本发明提供了一种用于棉粕脱毒的复合菌剂，所述复合菌剂包含芽孢杆菌bacillus、酿酒酵母saccharomyces cerevisiae和植物乳杆菌lactobacillus plantarum。
40.本发明还提供了一种用于棉粕脱毒的复合菌剂的制备方法，包含如下步骤：
41.(1)将芽孢杆菌加入到lb肉汤培养基，进行摇床振荡培养，得到最终发酵用的芽孢杆菌种子液；
42.(2)将酿酒酵母加入到ypd液体培养基，进行摇床振荡培养，得到最终发酵用的酿酒酵母种子液；
43.(3)将植物乳杆菌加入到mrs液体培养基，进行静置培养，得到最终发酵用的植物乳杆菌种子液；
44.(4)将上述最终发酵用的芽孢杆菌种子液、酿酒酵母种子液和植物乳杆菌种子液进行复配，得到复合菌剂。
45.在本发明中，所述步骤(1)中，所述lb肉汤培养基的组成成分优选为蛋白胨0.5～1.5g，酵母粉0.4～0.6g，氯化钠0.4～0.6g，进一步优选为蛋白胨1g，酵母粉0.5g，氯化钠0.5g，ph值优选为7.2～7.4，进一步优选为7.3，灭菌条件优选为120～125℃灭菌15～25min，进一步优选为121℃灭菌20min；
46.所述步骤(2)中，所述ypd液体培养基的组成成分优选为酵母浸出粉0.5～1.5g、蛋白胨1.5～2.5g，葡萄糖1.5～2.5g，进一步优选为酵母浸出粉1g、蛋白胨2g，葡萄糖2g，ph值优选为7.2～7.4，进一步优选为7.3，灭菌条件优选为120～125℃灭菌15～25min，进一步优选为121℃灭菌20min；
47.所述步骤(3)中，所述mrs液体培养基的组成成分优选为蛋白胨0.5～1.5g、牛肉膏0.5～1.5g、酵母浸出粉0.4～0.6g、葡萄糖1～3g、无水醋酸钠0.4～0.6g、柠檬酸二铵0.1～
0.3g、吐温
‑
800.1～0.2ml、硫酸镁0.05～0.06g、硫酸锰0.02～0.03g，进一步优选为蛋白胨1g、牛肉膏1g、酵母浸出粉0.5g、葡萄糖2g、无水醋酸钠0.5g、柠檬酸二铵0.2g、吐温
‑
800.15ml、硫酸镁0.058g、硫酸锰0.025g，ph值优选为6.2～6.4，进一步优选为6.3，灭菌条件优选为120～125℃灭菌15～25min，进一步优选为121℃灭菌20min。
48.在本发明中，所述步骤(1)中，所述芽孢杆菌种子液的具体制备方法优选为：挑取1～3环芽孢杆菌接入到4～6ml lb肉汤培养基中，于24～26℃，180～220r/min的条件下振荡培养18～22h，得一级种子液，再将一级种子液倒入40～60ml lb肉汤培养基中，于24～26℃，180～220r/min的条件下振荡培养18～22h，得到的二级种子液作为最终发酵用的芽孢杆菌种子液，进一步优选为挑取2环芽孢杆菌接入到5ml lb肉汤培养基中，于25℃，200r/min的条件下振荡培养20h，得一级种子液，再将一级种子液倒入50ml lb肉汤培养基中，于25℃，200r/min的条件下振荡培养20h，得到的二级种子液作为最终发酵用的芽孢杆菌种子液；
49.所述步骤(2)中，所述酿酒酵母种子液的具体制备方法优选为：挑取1～3环酿酒酵母接入到4～6ml ypd液体培养基中，于26～30℃，160～200r/min的条件下振荡培养22～26h，得一级种子液，再将一级种子液倒入40～60ml ypd液体培养基中，于26～30℃，160～200r/min的条件下振荡培养22～26h，得到的二级种子液作为最终发酵用的酿酒酵母种子液，进一步优选为挑取2环酿酒酵母接入到5mlypd液体培养基中，于28℃，180r/min的条件下振荡培养24h，得一级种子液，再将一级种子液倒入50ml ypd液体培养基中，于28℃，180r/min的条件下振荡培养24h，得到的二级种子液作为最终发酵用的酿酒酵母种子液；
50.所述步骤(3)中，所述植物乳杆菌种子液的具体制备方法优选为：挑取1～3环植物乳杆菌接入到4～6ml mrs液体培养基中，于35～40℃的条件下静置培养18～22h，得一级种子液，再将一级种子液倒入40～60ml mrs液体培养基中，于35～40℃的条件下静置培养18～22h，得到的二级种子液作为最终发酵用的植物乳杆菌种子液，进一步优选为挑取2环植物乳杆菌接入到5ml mrs液体培养基中，于37℃的条件下静置培养20h，得一级种子液，再将一级种子液倒入50ml mrs液体培养基中，于37℃的条件下静置培养20h，得到的二级种子液作为最终发酵用的植物乳杆菌种子液。
51.在本发明中，所述步骤(4)中，所述芽孢杆菌种子液、酿酒酵母种子液和植物乳杆菌种子液复配的体积比优选为1～2:1～3:2～3，进一步优选为1:2:2。
52.本发明还提供了用于棉粕脱毒的复合菌剂在棉粕脱毒过程中的应用。
53.在本发明中，所述应用过程优选包括：在棉粕发酵培养基上接种用于棉粕脱毒的复合菌剂，然后依次进行发酵，酶解。
54.在本发明中，所述棉粕发酵培养基的组分优选为棉籽粕80～85g，麸皮9～10g，红糖5～10g，蒸馏水66～106ml，进一步优选为棉籽粕84.1g，麸皮9.4g，红糖6.5g，蒸馏水86ml，所述棉粕发酵培养基的灭菌条件优选为120～125℃灭菌15～25min，进一步优选为121℃灭菌20min，所述棉籽粕的粒径优选为55～65目，进一步优选为60目。
55.在本发明中，所述发酵过程中，复合菌剂的接种量优选为占复合菌剂总体积的3～9％，进一步优选为占复合菌剂总体积的4～7％，更进一步优选为占复合菌剂总体积的5％，料水比优选为48～52g:40～45ml，进一步优选为50g:43ml，发酵温度优选为30～40℃，进一步优选为35℃，发酵时间优选为70～75h，进一步优选为72h。
56.在本发明中，所述料水比是指棉粕发酵培养基干物质重量与添加水分的重量比值。
57.在本发明中，所述酶解条件优选为自然酶解11～13h，进一步优选为自然酶解12h。
58.下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
59.本发明各实施例中所述的芽孢杆菌为芽孢杆菌s77，保藏编号为cctcc no:m 2021528，于2021年5月13日保藏于中国典型培养物保蔵中心；所述酿酒酵母菌为酿酒酵母zy.003，购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cicc1027；所述植物乳杆菌为植物乳杆菌lr002，保藏编号为cctcc no:m 2021527，于2021年5月13日保藏于中国典型培养物保蔵中心。
60.实施例1
61.(1)芽孢杆菌种子液的制备：
62.从保存菌种的斜面上挑取1环芽孢杆菌接入到含4ml lb肉汤培养基(培养基组分为蛋白胨0.5g，酵母粉0.4g，氯化钠0.4g，ph值为7.2，灭菌条件为120℃灭菌15min)的50ml三角瓶中，于24℃，180r/min的条件下在恒温摇床中振荡培养18h，得一级种子液，再将一级种子液倒入含40ml lb肉汤培养基的250ml三角瓶中，于24℃，180r/min的条件下在恒温摇床中振荡培养18h，得到的二级种子液作为最终发酵用的芽孢杆菌种子液。
63.(2)酿酒酵母种子液的制备：
64.从保存菌种的斜面上挑取1环酿酒酵母接入到含4mlypd液体培养基(培养基组分为酵母浸出粉0.5g、蛋白胨1.5g，葡萄糖1.5g，ph值为7.2，灭菌条件为120℃灭菌15min)的50ml三角瓶中，于26℃，160r/min的条件下在恒温摇床中振荡培养22h，得一级种子液，再将一级种子液倒入含40ml ypd液体培养基的250ml三角瓶中，于26℃，160r/min的条件下在恒温摇床中振荡培养22h，得到的二级种子液作为最终发酵用的酿酒酵母种子液。
65.(3)植物乳杆菌种子液的制备：
66.从保存菌种的斜面上挑取1环植物乳杆菌接入到含4ml mrs液体培养基(培养基组分为蛋白胨0.5g、牛肉膏0.5g、酵母浸出粉0.4g、葡萄糖1g、无水醋酸钠0.4g、柠檬酸二铵0.1g、吐温
‑
800.1ml、硫酸镁0.05g、硫酸锰0.02g，ph值为6.2，灭菌条件为120℃灭菌15min)的50ml三角瓶中，于35℃恒温箱中静置培养18h，得一级种子液，再将一级种子液倒入含40ml mrs液体培养基的250ml三角瓶中，于35℃恒温箱中静置培养18h，得到的二级种子液作为最终发酵用的植物乳杆菌种子液。
67.(4)复合菌剂的制备：将上述得到的最终发酵用的芽孢杆菌种子液、酿酒酵母种子液和植物乳杆菌种子液按照1:1:2的体积比进行复配，得到复合菌剂。
68.(5)配制棉粕发酵液体培养基：
69.将棉籽粕80g，麸皮9g，红糖5g装于500ml发酵袋中，加蒸馏水66ml，120℃灭菌15min，其中，棉籽粕过55目筛。
70.实施例2
71.(1)芽孢杆菌种子液的制备：
72.从保存菌种的斜面上挑取2环芽孢杆菌接入到含5ml lb肉汤培养基(培养基组分为蛋白胨1g，酵母粉0.5g，氯化钠0.5g，ph值为7.3，灭菌条件为121℃灭菌20min)的50ml三
角瓶中，于25℃，200r/min的条件下在恒温摇床中振荡培养20h，得一级种子液，再将一级种子液倒入含50ml lb肉汤培养基的250ml三角瓶中，于25℃，200r/min的条件下在恒温摇床中振荡培养20h，得到的二级种子液作为最终发酵用的芽孢杆菌种子液。
73.(2)酿酒酵母种子液的制备：
74.从保存菌种的斜面上挑取2环酿酒酵母接入到含5mlypd液体培养基(培养基组分为酵母浸出粉1g，蛋白胨2g，葡萄糖2g，ph值为7.3，灭菌条件为121℃灭菌20min)的50ml三角瓶中，于28℃，180r/min的条件下在恒温摇床中振荡培养24h，得一级种子液，再将一级种子液倒入含50mlypd液体培养基的250ml三角瓶中，于28℃，180r/min的条件下在恒温摇床中振荡培养24h，得到的二级种子液作为最终发酵用的酿酒酵母种子液。
75.(3)植物乳杆菌种子液的制备：
76.从保存菌种的斜面上挑取2环植物乳杆菌接入到含5ml mrs液体培养基(培养基组分为蛋白胨1g、牛肉膏1g、酵母浸出粉0.5g、葡萄糖2g、无水醋酸钠0.5g、柠檬酸二铵0.2g、吐温
‑
800.15ml、硫酸镁0.058g、硫酸锰0.025g，ph值为6.3，灭菌条件为121℃灭菌20min)的50ml三角瓶中，于37℃恒温箱中静置培养20h，得一级种子液，再将一级种子液倒入含50ml mrs液体培养基的250ml三角瓶中，于37℃恒温箱中静置培养20h，得到的二级种子液作为最终发酵用的植物乳杆菌种子液。
77.(4)复合菌剂的制备：将上述得到的最终发酵用的芽孢杆菌种子液、酿酒酵母种子液和植物乳杆菌种子液按照1:2:2的体积比进行复配，得到复合菌剂。
78.(5)配制棉粕发酵液体培养基：
79.将棉籽粕84.1g，麸皮9.4g，红糖6.5g装于500ml发酵袋中，加蒸馏水86ml，121℃灭菌20min，其中，棉籽粕过60目筛。
80.实施例3
81.(1)芽孢杆菌种子液的制备：
82.从保存菌种的斜面上挑取3环芽孢杆菌接入到含6ml lb肉汤培养基(培养基组分为蛋白胨1.5g，酵母粉0.6g，氯化钠0.6g，ph值为7.4，灭菌条件为125℃灭菌25min)的50ml三角瓶中，于26℃，220r/min的条件下在恒温摇床中振荡培养22h，得一级种子液，再将一级种子液倒入含60ml lb肉汤培养基的250ml三角瓶中，于26℃，220r/min的条件下在恒温摇床中振荡培养22h，得到的二级种子液作为最终发酵用的芽孢杆菌种子液。
83.(2)酿酒酵母种子液的制备：
84.从保存菌种的斜面上挑取3环酿酒酵母接入到含6mlypd液体培养基(培养基组分为酵母浸出粉1.5g、蛋白胨2.5g，葡萄糖2.5g，ph值为7.4，灭菌条件为125℃灭菌25min)的50ml三角瓶中，于30℃，200r/min的条件下在恒温摇床中振荡培养26h，得一级种子液，再将一级种子液倒入含60ml ypd液体培养基的250ml三角瓶中，于30℃，200r/min的条件下在恒温摇床中振荡培养26h，得到的二级种子液作为最终发酵用的酿酒酵母种子液。
85.(3)植物乳杆菌种子液的制备：
86.从保存菌种的斜面上挑取3环植物乳杆菌接入到含6ml mrs液体培养基(培养基组分为蛋白胨1.5g、牛肉膏1.5g、酵母浸出粉0.6g、葡萄糖3g、无水醋酸钠0.6g、柠檬酸二铵0.3g、吐温
‑
800.2ml、硫酸镁0.06g、硫酸锰0.03g，ph值为6.4，灭菌条件为125℃灭菌25min)的50ml三角瓶中，于40℃恒温箱中静置培养22h，得一级种子液，再将一级种子液倒入含
60ml mrs液体培养基的250ml三角瓶中，于40℃恒温箱中静置培养22h，得到的二级种子液作为最终发酵用的植物乳杆菌种子液。
87.(4)复合菌剂的制备：将上述得到的最终发酵用的芽孢杆菌种子液、酿酒酵母种子液和植物乳杆菌种子液按照2:3:3的体积比进行复配，得到复合菌剂。
88.(5)配制棉粕发酵固体培养基：
89.将棉籽粕85g，麸皮10g，红糖10g装于500ml发酵袋中，加蒸馏水106ml，125℃灭菌25min，其中，棉籽粕过65目筛。
90.以实施例2所得复合菌剂和棉粕发酵液体培养基为例进行实验，结果如表1：
91.表1通用旋转实验设计及试验结果
92.[0093][0094]
由表1可知，与对比例相比，以实验例1中5％接种量(v/w)，料水比50:43，发酵温度为35℃，发酵周期72h的发酵条件进行发酵，棉酚脱毒率最高，可达92.12％。
[0095]
实验例5
[0096]
设置接种量(v/w)为5％，料水比为50:43，发酵温度为35℃，发酵周期为72h，酶解时间为12h，研究发酵酶解后棉籽粕的各项营养指标，结果如表2：
[0097]
表2复合菌发酵酶解棉籽粕各项营养指标检测
[0098]
[0099][0100]
由表2可知，采用5％接种量(v/w)，料水比50:43，发酵温度为35℃，发酵周期72h的发酵条件，酶解12h后，棉籽粕中的粗蛋白由44.35％增加到54.65％，提升了23.22％，酸溶蛋白由3.08％增加到4.83％，提升了56.82％，粗纤维由11.4％降解到8.1％，下降了28.95％，限制性氨基酸赖氨酸由1.86％增加到2.01％，提升了8％，蛋氨酸由0.5增加到0.7，提升了40％，氨基酸总量整体提高了22.42％，此外维生素b1、b2和b6含量也分别提高了66.97％、329.73％和321.67％，棉籽粕的营养品质得到了很大提升。
[0101]
实验例6
[0102]
以实施例2所得复合菌剂和棉粕发酵液体培养基为例，采用在接种量5％，周期72h，料水比为50:43，发酵温度为35℃的发酵条件下所得的脱毒棉粕对小鼠进行饲喂试验。
[0103]
清洁级21日龄昆明小鼠90只(雌雄各半)，体质量(20
±
2)g，许可证号：no.11400700309252，购自兰州市实验动物研究中心。
[0104]
适应3天后将小鼠随机分成6组，每组15只，雌雄分笼饲养，分别为对照组d1(商品粮组)、对照组d2(未脱毒棉粕组)、试验组s1(25％脱毒棉粕组)、试验组s2(50％脱毒棉粕组)、试验组s3(75％脱毒棉粕组)、试验组s4(100％脱毒棉粕组)。实验组、对照组鼠粮组成见表3。
[0105]
表3小鼠日粮组成
[0106]
[0107][0108]
动物饲养条件：温度(22
±
2)℃，相对湿度40％～60％，控制照明12h/12h昼夜循环。小鼠饲养3周，实验期间自由摄食摄水。实验动物每1d更换新粮，每天观察小鼠的一般行为表现并记录小鼠腹泻和死亡情况。
[0109]
试验结果表明，随着试验时间的增加发现25％、50％的代替量对小鼠体重变化并无显著影响，75％、100％和未脱毒组显著降低了小鼠的平均日增重，结果见表4。
[0110]
表4小鼠平均体重测定结果(单位：g)
[0111]
[0112][0113]
注:同行数据肩标字母不用表示差异显著(p＜0.05)，相同或者无肩标表示差异不显著(p＞0.05)。
[0114]
研究脱毒棉籽粕对小鼠的脏器重量的影响，结果见表5：
[0115]
表5脱毒棉籽粕对小鼠的脏器重量的影响
[0116][0117]
由表5可知，各组间小鼠肝脏指数、脾脏指数和肾脏指数均无显著差异(p>0.05)，说明脱毒棉籽粕对小鼠无毒副作用。
[0118]
本研究结果综合表明，发酵脱毒棉籽粕添加量在25％、50％、75％三种水平下均未出现上述棉酚中毒症状，其中s1组(添加量25％)和s2(添加量50％)与对照组d2(未脱毒组)相比显著的提高了小鼠的生长性能、降低了alt、alt活性，对改善小鼠肝功能有一定积极影响，除此之外，与对照组d1(商品粮)相比也无显著差异，且在饲喂21天时显著降低了小鼠血清中ast活性，这表明复合菌剂对棉籽粕脱毒效果较好，当一定量代替日粮中的豆粕，并不会对小鼠的生长性能及肝脏转氨酶指标产生明显的影响，因此，复合菌剂发酵棉粕可以较好的代替豆粕作为饲料蛋白原料。
[0119]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。