一种二氢吲哚酮类化合物的制备及其抗肿瘤应用

1.本发明涉及一种二氢吲哚酮类化合物的制备及其应用，属于抗肿瘤药学技术领域。


背景技术：

2.溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4，brd4)是溴结构域和超末端 (bromodomain and extra-terminal，bet)家族的一员，能够与乙酰化的组蛋白或非组蛋白结合，进而调节基因复制和转录，影响细胞周期、细胞分化、细胞增殖等过程。brd4在多种恶性肿瘤的基因调控网络中具有重要作用，能通过激活c-myc等转录因子进而影响多种肿瘤的恶性进展，brd4表达上调是白血病、乳腺癌、肺癌、肝癌等肿瘤恶性进展和不良预后的一个关键靶标。
3.现有的brd4抑制剂的耐药性导致其难以发挥理想的抗肿瘤作用，本发明通过采用自噬靶向嵌合体(autophagy-targeting chimeras，autac)技术，利用自噬体对目标蛋白的降解作用设计并合成了一系列靶向brd4的二氢吲哚酮类自噬降解剂。该类降解剂能够通过自噬途径降解brd4蛋白，并在多种肿瘤细胞中表现出良好的抗增殖活性，因此针对于此类降解剂的开发具有很广阔的研究前景。


技术实现要素：

4.本发明解决的技术问题是提供一种作为靶向brd4的二氢吲哚酮类自噬降解剂。
5.本发明提供如下所示的化合物或其药学上可接受的盐：
[0006][0007]
其中，r为碘原子(i)或溴原子(br)
[0008]
m为0或1；
[0009]
n为2-6；
[0010]
z为0-6；
[0011]
x为碳原子(c)或氧原子(o)。
[0012]
本发明还提供上述化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。
[0013]
进一步的，所述抗肿瘤药物优选为靶向brd4的降解剂类药物。
[0014]
所述抗肿瘤药物优选为抗肿瘤的药物，所对应的肿瘤三阴性乳腺癌、肺腺癌、急性早幼粒细胞白血病。
[0015]
本发明制备的化合物或其药学上可接受的盐，可以作为靶向brd4的自噬降解剂，具有抗肿瘤活性，能有效的抑制癌细胞的生长。本发明化合物对三阴性乳腺癌、肺腺癌、急性早幼粒细胞白血病的肿瘤细胞具有抑制作用，尤其对三阴性乳腺癌细胞具有较好的抑制作用。
附图说明
[0016]
表1为上述化合物的对mda-mb-231细胞(三阴性乳腺癌细胞)中brd4的降解率及其对mda-mb-231，a549，hl-60细胞抗增殖活性测试结果。
[0017]
表1.式i相关化合物的brd4降解率测试结果和抗肿瘤细胞增殖活性结果
[0018][0019]
图1为化合物1-11对hela细胞(宫颈癌细胞)中的brd4蛋白具有降解作用。
[0020]
图2为化合物6在不同细胞系中对brd4蛋白的降解作用。
具体实施方式
[0021]
本发明提供如下所示的化合物或其药学上可接受的盐：
[0022][0023]
其中，r为碘原子(i)或溴原子(br)
[0024]
m为0或1；
[0025]
n为2-6；
[0026]
z为0-6；
[0027]
x为碳原子(c)或氧原子(o)。
[0028]
下面是本发明的化合物的一些优选结构。
[0029]
[0030]
[0031][0032]
本发明还提供上述化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。
[0033]
进一步的，所述抗肿瘤药物优选为靶向brd4的降解剂类药物。
[0034]
所述抗肿瘤药物优选为治疗三阴性乳腺癌、肺腺癌、急性早幼粒细胞白血病的药物。
[0035]
本发明还提供一种药物组合物，它是包含有效剂量的上述化合物或其药学上可接受的盐的制剂。
[0036]
可以通过本领域已知的方法可将本发明化合物制成以下形式：片剂、胶囊剂、水性或油性溶液剂、混悬剂、乳剂、乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、喷鼻剂、栓剂、用于吸入的细小分散的粉剂或气雾剂或喷雾剂、用于胃肠道外(包括静脉内、肌内或输注)的无菌水性或油性溶液或混悬剂或无菌乳剂。可采用无菌水或水-丙二醇溶液作为溶剂来制备液体制剂，还可将活性组分配制在聚乙二醇水溶液中。用于口服给予的水性溶液可通过将活性组分溶解在水中并按需要加入合适的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂来制备。口服使用的水性混悬剂可通过将细小分散的活性组分与粘性物质一道分散在水中，所述粘性物质如为天然合成胶、
树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素和其他药剂领域已知的悬浮剂。
[0037]
药物组合物可为单位剂量形式。在这些形式中，将所述组合物分成含适量活性组分的单位剂量。该单位剂量形式可为包装制剂，包装中包括分隔量的制剂，例如盒装片剂、胶囊剂和在管形瓶或安瓿中的粉剂。单位剂量形式还可为胶囊剂、扁囊剂或片剂或其可为适当数量的任何这些包装形式。
[0038]
本发明的药物组合物，其活性成分可仅为本发明的化合物，也可与其它抗肿瘤化合物组合作为活性成分。
[0039]
在治疗肿瘤的过程中，可采用本发明的药物组合物与其他抗肿瘤药进行联合治疗。例如，与用于医学肿瘤学的抗增殖/抗肿瘤药、细胞生长抑制剂、抗入侵药物、生长因子功能抑制剂、抗血管生成剂、血管损伤剂等联用。
[0040]
在治疗肿瘤时，可通过同时、序贯或单独给予各种治疗成分可实现这种联合治疗。此类组合产品应用有效剂量范围内的本发明化合物和准许剂量范围内的其他药学活性剂。
[0041]
下面结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步的描述，并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
[0042]
实施例1优选化合物的合成
[0043]
优选化合物采用如下反应式合成：
[0044][0045]
(i)k2co3，dmf，80℃；(ii)哌啶，乙醇，回流；(iii)tfa，dcm，室温；(iv)dmf，hatu， dipea，室温；(v)tfa，dcm，室温；(vi)dmf，hatu，dipea，室温。
[0046]
1.中间体1-5的合成通法
[0047]
在80℃dmf(6.0ml)中分别加入3，5-二溴-4-羟基苯甲醛(560mg，2.0mmol)、2-溴乙酸叔丁酯(468.1mg，2.4mmol)、k2co3(552mg，4.0mmol)，将生成的反应混合物进行强烈搅拌。反应完成后，用乙酸乙酯萃取混合物，使用无水硫酸钠干燥。产品用柱色谱法在硅胶上(石油醚/乙酸乙酯＝20∶1-10∶1)纯化，得到中间体1。
[0048]
在中间体1(394mg，1.00mmol)的乙醇(5.0ml)溶液中，加入5-碘吲哚-2-酮(224mg，1.30 mmol)和哌啶在室温下溶解。反应完成后，将反应液回流至80℃，回流3h，用乙醇洗涤两次，过滤得到中间体2(471.6mg，74％)的反应混合物。
[0049]
将中间体2(471.6mg，0.743mmol)溶于无水二氯甲烷(7ml)中，温度为25℃。在反应混合物中加入tfa(2ml)。第二步完全转化后，反应混合物浓缩。产物经硅胶柱色谱法 (ch2cl2/meoh＝5∶1-3∶1)提纯，得到中间体3。
[0050]
将中间体3(43.3mg，0.08mmol)、hatu(37.1mg，0.10mmol)和dipea(38.7mg，0.3 mmol)的混合物在2ml dmf中室温搅拌3h，用乙酸乙酯萃取，使用无水硫酸钠干燥，得到中间体4。
[0051]
在无水二氯甲烷(2.0ml)中加入中间体4(37.5mg，0.05mmol)进行磁力搅拌。在反应混合物中加入tfa(1ml)。将混合物在25℃下搅拌3h，得到下一步直接使用的中间体5。
[0052]
2.化合物1-12的合成通法
[0053]
将中间体5(38.2mg，0.05mmol)、hatu(26.6mg，0.07mmol)、jq1(羧酸)(20.0mg，0.05 mmol)和dipea(25.8mg，0.2mmol)的混合物在2ml dmf中室温搅拌3h，用乙酸乙酯萃取，使用无水硫酸钠干燥，用硅胶柱层析纯化得到化合物1-11。
[0054]
化合物1，黄色固体，收率69％；1h nmr(600mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：10.86(s，2/3h)， 10.80(s，1/3h)，8.78(s，1h)，8.29-8.24(m，1h)，8.19(dt，j＝17.7，6.0hz，1h)，8.03(s，1h)，8.00 (s，1h)，7.85(s，2/3h)，7.68(s，1/3h)，7.56(q，j＝7.9hz，1h)，7.50-7.46(m，2h)，7.41(d，j＝8.3 hz，2h)，6.74(d，j＝8.1hz，1/3h)，6.68(d，j＝8.1hz，2/3h)，4.52(dd，j＝8.3，6.0hz，1h)，4.49
ꢀ‑
4.39(m，2h)，3.30-3.18(m，5h)，3.14-3.06(m，1h)，2.57(s，3h)，2.38(s，3h)，1.60(s，3h)， 1.51(dq，j＝21.5，7.4，7.0hz，4h)；
13
c nmr(150mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：169.5，167.6，166.5， 166.2，163.1，155.2，152.8，152.3，149.9，142.8，140.6，138.7，137.6，136.8，136.2，135.3，134.4， 133.7，133.6，133.5，133.3，132.3，130.7，130.2，129.9，129.6，128.5，128.2，127.1，123.1，117.8， 117.1，112.1，84.3，84.0，71.0，55.0，53.9，38.4，38.2，37.7，30.4，29.1，26.7，26.6，14.1，12.7，11.4. hr-esi-ms[m+h]
+
：m/z 1029.96228。
[0055]
化合物2，黄色固体，收率58％；1h nmr(600mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：10.85(s，2/3h)，10.79(s，1/3h)，8.78(s，1h)，8.21(t，j＝5.6hz，1h)，8.18-8.14(m，1h)，8.03(d，j＝1.7hz，1h)， 8.00(s，1h)，7.84(s，2/3h)，7.67(s，1/3h)，7.58-7.53(m，1h)，7.49-7.45(m，2h)，7.41(d，j＝ 8.3hz，2h)，6.74(d，j＝8.1hz，1/3h)，6.69(d，j＝8.1hz，2/3h)，4.50(td，j＝6.1，3.0hz，1h)， 4.45(s，2/3h)，4.42(s，4/3h)，3.28-3.17(m，4h)，3.15-3.05(m，2h)，2.57(s，3h)，2.38(s，3h)， 1.60(s，3h)，1.57-1.41(m，6h)；
13
c nmr(150mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：169.8，168.0，166.9， 166.6，163.5，155.6，153.2，152.7，150.3，143.2，141.0，139.1，138.0，137.2，136.6，135.7，134.8， 134.2，134.1，134.0，133.9，133.7，132.7，131.1，130.6，130.3，130.0，128.9，128.6，127.5，123.5， 118.2，117.5，113.2，112.5，84.7，71.4，
54.4，40.8，38.8，38.1，29.3，29.1，24.2，14.5，13.1，11.8. hr-esi-ms[m+h]
+
：m/z 1043.97805。
[0056]
化合物3，黄色固体，收率71％；1h nmr(400mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：10.84(s，2/3h)， 10.79(s，1/3h)，8.78(s，1h)，8.23-8.11(m，2h)，8.05-7.99(m，1h)，7.85(s，2/3h)，7.68(s， 1/3h)，7.55(ddd，j＝10.0，7.5，1.7hz，1h)，7.51-7.38(m，5h)，6.75(d，j＝8.1hz，1/3h)6.70(d，j＝8.1hz，2/3h)，4.57-4.48(m，1h)，4.46(s，2/3h)，4.43(s，4/3h)，3.26-3.15(m，4h)，3.14
‑ꢀ
3.04(m，2h)，2.58(s，3h)，2.39(s，3h)，1.61(s，3h)，1.53-1.43(m，4h)，1.32(p，j＝3.6hz，4h)；
13
c nmr(150mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：169.4，166.5，166.1，163.0，162.3，155.1，152.8，149.8， 142.8，140.6，137.6，136.8，136.2，135.3，134.4，133.5，133.3，132.3，130.7，130.1，129.9，129.6， 128.5，127.1，117.8，117.1，112.0，84.3，71.0，53.9，38.5，38.3，37.7，29.3，29.0，26.1，14.1，12.7，11.3. hr-esi-ms[m+h]
+
：m/z 1057.99451。
[0057]
化合物4，黄色固体，收率64％；1h nmr(400mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：10.83(s，2/3h)， 10.78(s，1/3h)，8.76(s，1h)，8.30(t，j＝5.5hz，1h)，8.22-8.11(m，1h)，8.02(s，1h)，7.98(s，1h)， 7.82(s，2/3h)，7.67(s，1/3h)，7.53(d，j＝6.4hz，1h)，7.49-7.37(m，4h)，6.74(d，j＝8.1hz， 1/3h)，6.69(d，j＝8.1hz，2/3h)，4.69-4.38(m，3h)，3.62-3.47(m，4h)，3.41(s，2h)，3.28(ddd， j＝19.7，12.2，5.9hz，4h)，2.57(s，3h)，2.38(s，3h)，1.60(s，3h)；
13
c nmr(150mhz， dmso-d6)，δ(ppm)：170.2，168.0，166.9，166.9，163.5，155.5，153.2，152.7，150.2，143.2，141.0， 139.1，138.0，137.2，136.6，135.7，134.8，134.1，133.9，133.7，132.7，131.1，130.6，130.3，130.0， 128.9，128.6，127.5，123.4，118.2，117.5，113.2，112.4，84.7，84.4，71.4，69.4，69.0，54.3，39.1，38.8， 38.0，14.5，13.1，11.8.hr-esi-ms[m+h]
+
：m/z 1045.95874。
[0058]
化合物5，黄色固体，收率73％；1h nmr(400mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：10.85(s，2/3h)， 10.79(s，1/3h)，8.79(s，1h)，8.30(s，1h)，8.13(dt，j＝20.6，5.8hz，1h)，8.01(s，1h)，7.84(s， 2/3h)，7.69(s，1/3h)7.58-7.54(m，1h)，7.53-7.43(m，3h)，7.44-7.40(m，2h)，6.75(d，j＝8.1 hz，1/3h)6.70(d，j＝8.1hz，2/3h)，4.58-4.46(m，3h)，3.59-3.53(m，5h)，3.49(t，j＝5.9hz， 2h)，3.34-3.25(m，3h)，3.18(d，j＝5.1hz，3h)，3.09(q，j＝7.3hz，1h)，2.59(s，3h)，2.40(s， 3h)，1.67-1.57(m，3h)；
13
c nmr(150mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：170.2，168.0，166.9，163.5， 155.5，153.2，152.7，150.2，143.2，141.0，139.1，138.0，137.2，136.6，135.7，134.8，134.2，134.1， 133.9，133.7，132.7，131.1，130.6，130.3，130.0，128.9，128.6，127.5，127.5，123.4，118.1，117.4， 113.2，112.4，84.7，84.3，71.5，70.1，70.1，69.7，69.2，54.3，54.0，46.1，39.1，38.8，38.0，14.5，13.1， 11.8，9.0.hr-esi-ms[m+h]
+
：m/z 1089.98621。
[0059]
化合物6，黄色固体，收率63％.；1h nmr(400mhz，cdcl3)，δ(ppm)：10.67(s，2/3h)，9.36 (s，1/3h)，8.51(s，1h)，7.77(s，1h)，7.76-7.65(m，2h)，7.54(s，1h)，7.46(dd，j＝8.2，1.7hz，1h)， 7.43-7.37(m，2h)，7.31(dd，j＝8.6，2.7hz，2h)，7.24(s，1h)，6.86(d，j＝8.1hz，1/3h)，6.75(d， j＝8.1hz，2/3h)，4.77(t，j＝8.1，6.2hz，2/3h)，4.67(t，j＝8.1，6.2hz，1/3h)，4.58(s，2/3h)，4.56 (s，4/3h)，3.72-3.40(m，16h)，3.40-3.18(m，2h)，2.69(s，3h)，2.41(s，3h)，1.90(t，j＝6.0hz， 2h)，1.80(q，j＝6.0，5.6hz，2h)，1.67(s，3h)；
13
c nmr(200mhz，cdcl3)，δ(ppm)：170.3，170.3，167.4，167.1，164.2，163.9，155.7，152.8，
152.6，150.0，141.9，140.6，139.0，138.2，136.9，136.8， 136.5，136.5，136.1，133.8，133.5，133.4，132.9，132.1，131.9，131.8，131.1，131.1，131.0，131.0， 130.7，130.6，129.9，128.8，128.7，128.3，128.2，127.9，126.6，123.1，118.3，117.5，113.0，112.8，84.2， 84.1，71.2，71.0，70.9，70.6，70.6，70.5，70.4，70.1，70.0，69.8，69.5，69.0，54.4，38.9，38.1，37.6，37.5， 36.9，29.7，29.2，29.1，29.1，28.6，14.5，13.2，11.9.hr-esi-ms[m+h]
+
：m/z 1162.04346。
[0060]
化合物7，黄色固体，收率55％；1h nmr(400mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：10.89(s，1h)，8.85(s， 1/3h)，8.79(s，2/3h)，8.35-8.25(m，1h)，8.18-8.09(m，1h)，8.07-8.00(m，1h)，7.86(s，1h)， 7.71-7.53(m，2h)，7.51-7.45(m，2h)，7.42(dt，j＝8.6，2.1hz，2h)，6.77(dd，j＝8.2，3.1hz， 1/3h)，6.72(dd，j＝8.2，3.1hz，2/3h)，4.66-4.34(m，3h)，3.83-3.60(m，3h)，3.56(s，6h)，3.50
ꢀ‑
3.42(m，5h)，3.33-3.20(m，4h)，2.58(s，3h)，2.39(s，3h)，1.60(s，3h)；
13
c nmr(150mhz， dmso-d6)，δ(ppm)：171.4，170.2，170.2，166.8，163.5，162.8，155.5，150.3，137.2，136.2，135.7， 132.7，131.2，130.6，130.3，130.0，128.9，125.7，125.0，125.0，112.6，84.8，79.6，70.2，70.2，70.1， 70.0，69.6，68.5，61.1，54.3，49.1，39.1，38.0，36.3，31.2，14.5，13.1，11.8.hr-esi-ms[m+h]
+
：m/z1155.9938。
[0061]
化合物8，黄色固体，收率66％；1h nmr(400mhz，cdcl3)，δ(ppm)：9.15(s，4/5h)，8.52 (s，1/5h)，7.82(d，j＝1.7hz，1h)，7.78(s，2h)，7.56(s，1h)，7.53-7.46(m，2h)，7.44-7.38(m， 2h)，7.36-7.29(m，2h)，7.26-7.21(m，1h)，6.85(d，j＝8.2hz，1/5h)，6.76(d，j＝8.2hz，4/5h)，4.68(t，j＝7.0hz，1h)，4.61(s，2h)，3.86-3.64(m，10h)，3.63(d，j＝4.4hz，5h)，3.56(ddd，j＝ 10.8，8.5，4.7hz，4h)，3.50(q，j＝4.8hz，2h)，3.41(dd，j＝14.7，7.2hz，1h)，2.66(s，3h)，2.39(s， 3h)，1.66(s，3h)；
13
c nmr(100mhz，cdcl3)，δ(ppm)：170.7，168.6，167.4，164.0，155.8，153.0， 150.0，142.0，139.2，136.9，136.7，136.2，133.9，133.8，133.5，132.2，131.9，131.1，130.9，130.7， 130.0，128.8，128.4，123.2，118.3，112.8，84.3，71.5，70.7，70.6，70.5，70.4，70.0，69.8，54.5，39.5， 39.0，39.0，14.5，13.2，12.0.hr-esi-ms[m+h]
+
：m/z 1200.0197。
[0062]
化合物9，黄色固体，收率55％；1h nmr(600mhz，cdcl3)，δ(ppm)：10.01(s，1/2h)，9.86 (s，1/2h)，8.48(s，1h)，7.78(d，j＝1.6hz，1h)，7.75(s，1h)，7.71(t，j＝5.5hz，1h)，7.57(dt，j＝ 24.0，5.6hz，1h)，7.52(d，j＝5.7hz，1h)，7.46(dd，j＝8.2，1.7hz，1h)，7.39(d，j＝8.2hz，2h)， 7.30(d，j＝8.6hz，2h)，6.79(d，j＝8.1hz，1/2h)，6.72(d，j＝8.1hz，1/2h)，4.69(dt，j＝9.0，7.1 hz，1h)，4.59(s，1h)，4.54(s，1h)，3.65-3.62(m，8h)，3.61-3.55(m，15h)，3.51-3.45(m，2h)， 3.42(td，j＝14.5，13.5，6.2hz，1h)，2.66(s，3h)，2.38(s，3h)，1.64(s，3h)；
13
c nmr(200mhz， dmso-d6)，δ(ppm)：170.8，168.8，167.7，167.6，167.1，164.1，164.0，155.7，153.1，152.8，150.0， 142.4，140.4，139.1，138.1，136.9，136.6，136.2，133.8，133.6，133.5，133.0，132.1，131.6，131.1，131.0，130.6，129.9，128.8，128.5，128.2，127.7，126.7，123.1，118.2，117.4，113.1，112.5，84.2，71.4， 70.4，70.2，70.0，69.8，54.4，39.4，39.0，38.8，14.5，12.0，11.8.hr-esi-ms[m+h]
+
：m/z1244.0463。
[0063]
化合物10，黄色固体，收率70％；1h nmr(400mhz，cdcl3)，δ(ppm)：10.02(s，2/3h)，9.92 (s，1/3h)，8.51(s，1h)，7.78(s，2h)，7.74-7.54(m，2h)，7.53-7.44(m，2h)，7.43-7.38(m，2h)， 7.34-7.30(m，2h)，6.83-6.79(m，2/3h)，6.72-6.69(m，1/3h)4.77-4.66(m，1h)，
4.61(s， 4/3h)，4.57(s，2/3h)3.75(tt，j＝4.4，2.1hz，1h)，3.65(t，j＝4.4hz，8h)，3.61(q，j＝6.8，6.2hz， 18h)，3.50(q，j＝5.6hz，2h)，3.43(dd，j＝14.8，6.9hz，1h)，2.68(s，3h)，2.40(s，3h)，1.66(s， 3h)；
13
c nmr(200mhz，cdcl3)，δ(ppm)：170.5，168.5，167.3，167.2，166.8，163.9，156.3，155.5， 152.8，152.5，149.8，142.5，140.4，138.9，137.9，136.6，136.4，136.0，133.8，133.7，133.2，133.1， 132.9，131.8，131.3，130.9，130.7，130.3，129.8，128.5，128.0，127.6，126.5，122.8，118.7，117.9， 117.1，113.0，112.3，83.8，83.7，71.1，71.0，71.0，70.4，70.3，70.3，70.3，70.2，70.2，70.1，70.0，69.7， 69.7，69.5，69.5，69.4，54.1，53.9，42.2，39.2，38.8，38.4，18.3，17.1，14.3，13.0，11.9，11.6. hr-esi-ms[m+h]
+
：m/z 1288.0729。
[0064]
化合物11，黄色固体，收率57％；1h nmr(400mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：10.86(s，2/3h)， 10.81(s，1/3h)，8.78(s，1h)，8.16(dt，j＝13.9，5.5hz，2h)，8.02(s，1h)，7.89(t，j＝1.9hz，1h)， 7.87(d，j＝2.4hz，1h)，7.47(d，j＝8.4hz，2h)，7.44-7.33(m，3h)，6.86(d，j＝8.3hz，1/3h)， 6.81(d，j＝8.3hz，2/3h)，4.51(dd，j＝8.0，6.2hz，1h)，4.45(s，2/3h)，4.43(s，4/3h)，3.50(dt，j＝ 5.7，3.4hz，6h)，3.48-3.44(m，4h)，3.42(d，j＝6.6hz，2h)，3.26(q，j＝4.8，3.4hz，2h)，3.23
‑ꢀ
3.18(m，2h)，3.18-3.08(m，2h)，2.58(s，3h)，2.39(s，3h)，1.79-1.64(m，4h)，1.60(s，3h)；
13
cnmr(150mhz，dmso-d6)，δ(ppm)：169.9，168.2，167.1，166.7，166.6，163.5，162.8，155.5，153.2， 152.8，150.2，142.9，140.6，137.2，136.6，135.7，135.1，134.3，134.1，133.9，133.7，133.4，132.7， 132.2，131.1，130.6，130.3，130.0，128.9，128.8，127.7，127.2，125.3，123.4，123.0，118.2，117.5， 113.7，113.2，112.0，71.4，70.2，70.1，70.0，68.9，68.5，54.3，38.1，36.6，36.3，29.9，29.6，14.5，13.1， 11.8.hr-esi-ms[m+h]
+
：m/z 1136.0391。
[0065]
试验例1化合物1～11的蛋白免疫印迹试验
[0066]
采用免疫印迹法检测了化合物1-11在hela细胞中对brd4的降解率，结果见表1，图1 和图2。从表1、图1、图2的结果中可以看出，化合物4、5、6、8、9、11对brd4有较好的降解作用，其中化合物6的降解作用最好。并且化合物6在a549(肺腺癌细胞)、hl-60 (急性早幼粒细胞白血病细胞)、mda-mb-231(三阴性乳腺癌细胞)、mda-mb-436(三阴性乳腺癌细胞)、mda-mb-468(三阴性乳腺癌细胞)、mcf-7(乳腺癌细胞)中对brd4均有很好的降解作用(图2)。
[0067]
试验例2化合物1～11对mda-mb-231，a549，hl-60细胞的抗增殖试验
[0068]
在mda-mb-231、a549、hl-60细胞中进行抗增值活性试验，其结果见表1。用优选化合物处理mda-mb-231，a549，hl-60细胞，测定了对不同肿瘤细胞的半数抑制浓度。从表 1可以明显看出，该系列化合物对多种肿瘤细胞具有显著的较强的抗增殖活性。
[0069]
综合以上实验，我们获得了能够有效降解brd4发挥抗癌作用的降解剂，该类降解剂能够为治疗包括三阴性乳腺癌、肺腺癌、急性早幼粒细胞白血病在内的多种过表达brd4的肿瘤提供了一种好的方法，针对于此类降解剂的开发，具有很广阔的研究前景。