一种饲料用硒酵母及其制备方法与流程

1.本发明涉及硒酵母生产技术领域，尤其涉及一种饲料用硒酵母及其制备方 法。


背景技术：

2.硒元素是动物生理不可缺少的微量元素，硒酵母是利用酵母开发出来的一 种优质的有机硒源，具有无毒性、吸收率高的优点，在满足动物对硒的生理需 求后，还可以在动物体内储存，避免短期内再次缺硒。目前在硒酵母生产中， 常用的酵母有产朊假丝酵母、酿酒酵母、红酵母和黏红酵母等，使用这些酵母 制备硒酵母的产量低，生产成本高，产品市场竞争力弱，且制得的硒酵母产品 中的有机硒含量低。


技术实现要素：

3.针对背景技术提出的问题，本发明的目的在于提出一种饲料用硒酵母的制 备方法，制备方法简单，制备硒酵母产品的产量高，生产成本低，解决了现有 硒酵母产品的生产产量低、生产成本高的问题；
4.本发明的另一个目的在于提出使用所述饲料用硒酵母的制备方法制备得到 的饲料用硒酵母，硒酵母产品中的有机硒含量高，硒酵母产量高，解决了现有 制备得到的硒酵母有机硒含量低的问题。
5.为达此目的，本发明采用以下技术方案：
6.一种饲料用硒酵母的制备方法，包括以下步骤：
7.步骤a、在茄瓶种子培养基中接入甘油管保藏的毕赤酵母的菌株，在30～ 35℃下静置进行茄瓶斜面种子培养，培养时间为24～72h，得到茄瓶斜面种子， 所述毕赤酵母的分类命名为巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)，已于2017年 10月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：gdmcc no:60262 的巴斯德毕赤酵母x33 plt-07菌株，保藏单位地址为：广州市先烈中路100号 大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，保藏单位代码为：gdmcc-广东省微生 物菌种保藏中心，存活性经广东省微生物菌种保藏中心于2017年10月27日检 测结果是存活；
8.步骤b、将茄瓶斜面种子划成接种块后接入摇瓶种子液培养基中，进行摇 瓶种子培养，培养温度为30～35℃，摇瓶转速为100～200rpm，培养时间为12～ 36h，得到摇瓶种子液；
9.步骤c、将摇瓶种子液接入到一级种子罐培养基中，通入无菌空气，在通 风量为10～20m3/h，搅拌转速为100～200rpm，培养温度为30～35℃的条件下 进行一级种子培养，培养时间为16～24h，得到一级种子液；
10.步骤d、将一级种子液接入发酵罐的发酵罐培养基中，通入无菌空气，在 通风量为100～200m3/h，搅拌转速为100～200rpm，培养温度为30～35℃的条 件下进行发酵培养，培养时间为24～48h，在培养至12h时开始匀速流加亚硒 酸钠溶液，发酵培养过程中控制ph为4.0～6.0，当菌体湿重不再增加时，结 束发酵培养，得到发酵液；
11.步骤e、将发酵液进行真空浓缩、喷雾干燥和过筛后，制得饲料用硒酵母。
12.更进一步说明，所述步骤d中，在培养至12h时开始匀速流加亚硒酸钠溶 液，使流加完毕后发酵罐培养基中的硒浓度为80～100ug/ml发酵液。
13.更进一步说明，所述步骤a中的茄瓶种子培养基按如下配比配制：葡萄糖 10～50g/l、蛋白胨10～50g/l、营养琼脂100～200g/l和余量水。
14.更进一步说明，所述步骤b中的摇瓶种子液培养基按如下配比配制：葡萄 糖10～50g/l、蛋白胨10～50g/l、酵母浸粉10～50g/l和余量水。
15.更进一步说明，所述步骤c中的一级种子罐培养基按如下配比配制：葡萄 糖10～50g/l、蛋白胨10～50g/l、酵母浸粉10～50g/l和余量水。
16.更进一步说明，所述步骤c中，培养至菌体湿重达到50～60g/l，且一级 种子罐培养基中无杂菌时，得到一级种子液。
17.更进一步说明，所述步骤d中的发酵罐培养基按如下配比配制：磷酸10～ 50g/l、硫酸钙1～5g/l、硫酸钾10～50g/l、硫酸镁10～50g/l、氢氧化钾1～ 5g/l、葡萄糖50～100g/l、微量元素5～10ml/l和余量水。
18.更进一步说明，所述步骤e中，所述真空干燥具体为：将发酵液加入真空 浓缩罐中，进行4～6倍的真空浓缩，浓缩温度为60～100℃，真空度为-1.0mpa。
19.更进一步说明，所述步骤e中，所述喷雾干燥具体为：将经过真空浓缩后 的浓缩液输送至喷雾干燥塔进行喷雾干燥，喷雾干燥的条件为进风温度150～ 200℃，出风温度60～90℃。
20.一种饲料用硒酵母，使用所述的饲料用硒酵母的制备方法制备得到。
21.与现有技术相比，本发明的实施例具有以下有益效果：
22.本发明提出一种饲料用硒酵母的制备方法，通过采用巴斯德毕赤酵母，将 无机硒添加进酵母菌培养液中进行发酵，在经过茄瓶斜面种子培养、摇瓶种子 培养、一级种子培养和发酵培养后，发酵得到吸收了无机硒的酵母，进行真空 浓缩、喷雾干燥和过筛后，制得饲料用的硒酵母产品，制备方法简单，制备硒 酵母产品的产量高，生产成本低，解决了现有硒酵母产品的生产产量低、生产 成本高的问题；
23.进而提出使用上述饲料用硒酵母的制备方法制备得到的饲料用硒酵母，硒 酵母产品中的有机硒含量高，硒酵母产量高，解决了现有制备得到的硒酵母有 机硒含量低的问题。
具体实施方式
24.一种饲料用硒酵母的制备方法，包括以下步骤：
25.步骤a、在茄瓶种子培养基中接入甘油管保藏的毕赤酵母的菌株，在30～ 35℃下静置进行茄瓶斜面种子培养，培养时间为24～72h，得到茄瓶斜面种子， 所述毕赤酵母的分类命名为巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)，已于2017年 10月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：gdmcc no:60262 的巴斯德毕赤酵母x33 plt-07菌株，保藏单位地址为：广州市先烈中路100号 大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，保藏单位代码为：gdmcc-广东省微生 物菌种保藏中心，存活性经广东省微生物菌种保藏中心于2017年10月27日检 测结果是存活；
26.步骤b、将茄瓶斜面种子划成接种块后接入摇瓶种子液培养基中，进行摇 瓶种子培养，培养温度为30～35℃，摇瓶转速为100～200rpm，培养时间为12～ 36h，得到摇瓶种子液；
27.步骤c、将摇瓶种子液接入到一级种子罐培养基中，通入无菌空气，在通 风量为10～20m3/h，搅拌转速为100～200rpm，培养温度为30～35℃的条件下 进行一级种子培养，培养时间为16～24h，得到一级种子液；
28.步骤d、将一级种子液接入发酵罐的发酵罐培养基中，通入无菌空气，在 通风量为100～200m3/h，搅拌转速为100～200rpm，培养温度为30～35℃的条 件下进行发酵培养，培养时间为24～48h，在培养至12h时开始匀速流加亚硒 酸钠溶液，发酵培养过程中控制ph为4.0～6.0，当菌体湿重不再增加时，结 束发酵培养，得到发酵液；
29.步骤e、将发酵液进行真空浓缩、喷雾干燥和过筛后，制得饲料用硒酵母。
30.目前在硒酵母生产中，常用的酵母有产朊假丝酵母、酿酒酵母、红酵母和 黏红酵母等，这些酵母在发酵培养时菌体湿重一般在100～150g/l之间，产量 低，生产成本高，产品市场竞争力弱，而巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris) x-33gdmcc no:60262在发酵培养时菌体湿重可以达到250g/l以上，硒酵母产 品中有机硒的含量高达3500～4000ug/g，远高于使用产朊假丝酵母生产硒酵母 的有机硒含量2000～3000ug/g，也即在相同发酵体积时，使用巴斯德毕赤酵母 (pichia pastoris)x-33生产硒酵母的产量是产朊假丝酵母、酿酒酵母、红 酵母和黏红酵母的1.67倍以上，本发明使用毕赤酵母进行硒酵母产品的制备， 可以大幅度降低硒酵母的生产成本，提高市场竞争力。
31.更进一步说明，在无机硒的选择中，无机硒主要有二氧化硒和亚硒酸钠两 种，两种都是剧毒物质，但是二氧化硒的致死量为4mg，远低于亚硒酸钠1g的 致死量，即二氧化硒的毒性比亚硒酸钠更强，从人身安全和环境安全考虑，本 发明使用的无机硒为亚硒酸钠。
32.本发明通过采用巴斯德毕赤酵母，将无机硒添加进酵母菌培养液中进行发 酵，在经过茄瓶斜面种子培养、摇瓶种子培养、一级种子培养和发酵培养后， 发酵得到吸收了无机硒的酵母，进行真空浓缩、喷雾干燥和过筛后，制得饲料 用的硒酵母产品，制备方法简单，制备硒酵母产品的产量高，生产成本低，解 决了现有硒酵母产品的生产产量低、生产成本高的问题。
33.更进一步说明，所述步骤d中，在培养至12h时开始匀速流加亚硒酸钠溶 液，使流加完毕后发酵罐培养基中的硒浓度为80～100ug/ml发酵液。
34.更进一步说明，所述亚硒酸钠溶液的添加量与酵母菌体的湿重有关，酵母 菌体的湿重高，亚硒酸钠溶液的添加量就高，通过限定亚硒酸钠的添加量，使 得发酵罐培养基中的硒浓度为80～100ug/ml发酵液(具体地，将亚硒酸钠溶液 流加至发酵罐培养基中，所述亚硒酸钠溶液的质量体积浓度为1～2％，每升发 酵液中添加0.3～0.6g亚硒酸钠溶液)，如果所述亚硒酸钠溶液的添加量过少， 使得发酵罐培养基中的硒浓度过低，则制得的饲料用硒酵母中的有机硒含量偏 低，如果所述亚硒酸钠溶液的添加量过多，使得发酵罐培养基中的硒浓度过高， 由于亚硒酸钠有毒性，会对酵母的生长有抑制作用，造成菌体湿重偏低，从而 影响产量。
35.优选地，所述步骤a中的茄瓶种子培养基按如下配比配制：葡萄糖10～ 50g/l、蛋白胨10～50g/l、营养琼脂100～200g/l和余量水。
36.具体地，所述步骤a为：在80ml茄瓶种子培养基中接入4℃冷藏保存的甘 油管种子1ml，接种好的茄瓶种子培养基放置于培养箱中，在30～35℃下静置 培养24～72h，得到茄瓶斜面种子。
37.所述步骤a中的茄瓶种子培养基的制备方法为，按照如下配比配制：葡萄 糖10～50g/l、蛋白胨10～50g/l、营养琼脂100～200g/l和余量水，ph自然， 进行高温灭菌，灭菌温度为121～123℃，灭菌保温时间为30min。
38.优选地，所述步骤b中的摇瓶种子液培养基按如下配比配制：葡萄糖10～ 50g/l、蛋白胨10～50g/l、酵母浸粉10～50g/l和余量水。
39.具体地，所述步骤b中，将茄瓶斜面种子用接种铲划成2cm
×
2cm大小的接 种块后，接入摇瓶种子液培养基中，然后将接种后的摇瓶种子液培养基置于恒 温摇瓶柜中进行摇瓶种子培养。
40.所述步骤b中的摇瓶种子液培养基的制备方法为，按照如下配比配制：葡 萄糖10～50g/l、蛋白胨10～50g/l、酵母浸粉10～50g/l和余量水，灭菌前 ph为6.0～7.0，进行高温灭菌，灭菌温度为121～123℃，灭菌保温时间为30min。
41.优选地，所述步骤c中的一级种子罐培养基按如下配比配制：葡萄糖10～ 50g/l、蛋白胨10～50g/l、酵母浸粉10～50g/l和余量水。
42.具体地，所述步骤c中，将摇瓶种子液用压差法接入到一级种子罐培养基 中进行一级种子培养，摇瓶种子液的接种量为10％，所述步骤c中的一级种子 罐培养基的制备方法为，按照如下配比配制：葡萄糖10～50g/l、蛋白胨10～50g/l、酵母浸粉10～50g/和余量水，灭菌前ph为6.0～7.0,进行高温灭菌， 灭菌温度为121～123℃，灭菌保温时间为30min。
43.更进一步说明，所述步骤c中，培养至菌体湿重达到50～60g/l，且一级 种子罐培养基中无杂菌时，得到一级种子液。
44.具体地，所述步骤c中，将摇瓶种子液接入到一级种子罐培养基中，通入 无菌空气，在通风量为10～20m3/h，搅拌转速为100～200rpm，温度为30～35℃ 的条件下进行一级种子培养，培养时间为16～24h，当培养至菌体湿重达到50～ 60g/l，且在显微镜下检查一级种子罐培养基中无杂菌时，得到一级种子液，可 以接入发酵罐中进行发酵培养。
45.优选地，所述步骤d中的发酵罐培养基按如下配比配制：磷酸10～50g/l、 硫酸钙1～5g/l、硫酸钾10～50g/l、硫酸镁10～50g/l、氢氧化钾1～5g/l、 葡萄糖50～100g/l、微量元素5～10ml/l和余量水。
46.具体地，所述步骤d中的发酵罐培养基的制备方法按如下配比配制：磷酸 10～50g/l、硫酸钙1～5g/l、硫酸钾10～50g/l、硫酸镁10～50g/l、氢氧化 钾1～5g/l、葡萄糖50～100g/l、微量元素5～10ml/l和余量水，灭菌前ph为 5.0～7.0,进行高温灭菌，灭菌温度为121～123℃，灭菌保温时间为30min。
47.更进一步说明，所述步骤d中，将一级种子液通过无菌移种管道全部接入 发酵罐的发酵罐培养基中，通入无菌空气，在通风量为100～200m3/h，搅拌转 速为100～200rpm，培养温度为30～35℃的条件下进行发酵培养，培养时间为 24～48h，在培养至12h时开始匀速流加亚硒酸钠溶液，在12h内全部流加完毕， 发酵培养过程中控制ph为4.0～6.0，每2h测定菌体湿重，当菌体湿重不再增 加时，结束发酵培养，得到发酵液。
48.具体地，所述步骤e中，所述真空干燥具体为：将发酵液加入真空浓缩罐 中，进行4
～6倍的真空浓缩，浓缩温度为60～100℃，真空度为-1.0mpa。
49.具体地，将发酵培养结束得到的发酵液用空气压入到真空浓缩罐中，进行 4～6倍的真空浓缩，且控制浓缩工艺参数，浓缩温度为60～100℃，真空度为
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1.0mpa。
50.具体地，所述步骤e中，所述喷雾干燥具体为：将经过真空浓缩后的浓缩 液输送至喷雾干燥塔进行喷雾干燥，喷雾干燥的条件为进风温度150～200℃， 出风温度60～90℃。
51.通过设定喷雾干燥的进风温度和出风温度，能够实现快速干燥，保证喷雾 干燥得到饲料用硒酵母的制备效率以及制备质量，在进行喷雾干燥和过筛后， 经过产品的检测和包装，制得饲料用硒酵母，生产效率高，质量稳定。
52.一种饲料用硒酵母，使用上述的饲料用硒酵母的制备方法制备得到。
53.通过所述饲料用硒酵母的制备方法制备得到的饲料用硒酵母，硒酵母产品 中的有机硒含量高，硒酵母产量高，解决了现有制备得到的硒酵母有机硒含量 低的问题。
54.下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。
55.为了便于理解本发明，下面对本发明进行更全面的描述。本发明可以以许 多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施 例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
56.实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或 条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以 通过市购获得的常规产品。
57.实施例a1～a6
58.一种饲料用硒酵母的制备方法，包括以下步骤：
59.步骤a、在茄瓶种子培养基中接入甘油管保藏的毕赤酵母的菌株，在35℃ 下静置进行茄瓶斜面种子培养，培养时间为72h，得到茄瓶斜面种子，所述毕 赤酵母的分类命名为巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)，保藏于广东省微生 物菌种保藏中心，保藏编号为：gdmcc no:60262的巴斯德毕赤酵母x33 plt-07 菌株；
60.茄瓶种子培养基的制备方法为，按照如下配比配制：葡萄糖30g/l、蛋白 胨30g/l、营养琼脂150g/l和余量水，ph自然，进行高温灭菌，灭菌温度为 122℃，灭菌保温时间为30min；
61.步骤b、将茄瓶斜面种子划成2cm
×
2cm大小的接种块后接入摇瓶种子液培 养基中，将接种后的摇瓶种子液培养基置于恒温摇瓶柜中进行摇瓶种子培养， 培养温度为35℃，摇瓶转速为200rpm，培养时间为36h，得到摇瓶种子液；
62.摇瓶种子液培养基的制备方法为，按照如下配比配制：葡萄糖30g/l、蛋 白胨30g/l、酵母浸粉30g/l和余量水，灭菌前ph为7.0，进行高温灭菌，灭 菌温度为122℃，灭菌保温时间为30min；
63.步骤c、将摇瓶种子液用压差法接入到一级种子罐培养基中，摇瓶种子液 的接种量为10％，通入无菌空气，在通风量为20m3/h，搅拌转速为200rpm，培 养温度为35℃的条件下进行一级种子培养，培养时间为24h，得到一级种子液， 可以接入发酵罐中进行发酵培养；
64.一级种子罐培养基的制备方法为，按照如下配比配制：葡萄糖30g/l、蛋 白胨30g/l、酵母浸粉30g/l和余量水，灭菌前ph为7.0,进行高温灭菌，灭菌 温度为122℃，灭菌保温
时间为30min；
65.步骤d、将一级种子液接入发酵罐的发酵罐培养基中，通入无菌空气，进 行发酵培养(培养条件如下表1所示)，在培养至12h时开始匀速流加亚硒酸钠 溶液(将亚硒酸钠溶液流加至发酵罐培养基中，所述亚硒酸钠溶液的质量体积 浓度为1～2％，每升发酵液中添加0.3～0.6g亚硒酸钠溶液，使得发酵罐培养 基中的硒浓度如下表1所示)，发酵培养过程中控制ph为6.0，当菌体湿重不 再增加时，结束发酵培养，得到发酵液；
66.发酵罐培养基的制备方法按如下配比配制：磷酸30g/l、硫酸钙5g/l、硫 酸钾30g/l、硫酸镁30g/l、氢氧化钾5g/l、葡萄糖80g/l、微量元素8ml/l和 余量水，灭菌前ph为7.0,进行高温灭菌，灭菌温度为122℃，灭菌保温时间为 30min；
67.步骤e、将发酵液加入真空浓缩罐中，进行6倍的真空浓缩，浓缩温度为 100℃，真空度为-1.0mpa，然后将经过真空浓缩后的浓缩液输送至喷雾干燥塔 进行喷雾干燥，喷雾干燥的条件为进风温度180℃，出风温度80℃，喷雾干燥 后经过过筛处理，制得饲料用硒酵母。
68.表1实施例a1～a6发酵培养条件
[0069][0070]
对实施例a1～a6在发酵培养完成时的菌体湿重、制得的饲料用硒酵母产品 中的总硒含量以及有机硒含量进行测定，得到的测试结果如表2所示。
[0071]
表2实施例a1～a6测试结果
[0072][0073]
由实施例a1～a6可知，当实施例a4～a6的步骤d进行发酵培养的发酵温 度过高时，将会影响菌体在发酵培养时的湿重，且降低了制得的饲料用硒酵母 中的有机硒含量，实施例a4～a6的菌体在发酵培养完成时的湿重明显低于实施 例a1～a3，且实施例a4～a6制得的饲料用硒酵母中的有机硒含量也明显低于 实施例a1～a3制得的饲料用硒酵母中的有机硒含量。
[0074]
实施例b1～b6
[0075]
一种饲料用硒酵母的制备方法，包括以下步骤：
[0076]
步骤a、在茄瓶种子培养基中接入甘油管保藏的毕赤酵母的菌株，在30℃ 下静置进行茄瓶斜面种子培养，培养时间为24h，得到茄瓶斜面种子，所述毕 赤酵母的分类命名为巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)，保藏于广东省微生 物菌种保藏中心，保藏编号为：gdmcc no:60262的巴斯德毕赤酵母x33 plt-07 菌株；
[0077]
茄瓶种子培养基的制备方法为，按照如下重量百分比配制：葡萄糖3％、蛋 白胨3％、营养琼脂15％和余量水，ph自然，进行高温灭菌，灭菌温度为122℃， 灭菌保温时间为30min；
[0078]
步骤b、将茄瓶斜面种子划成2cm
×
2cm大小的接种块后接入摇瓶种子液培 养基中，将接种后的摇瓶种子液培养基置于恒温摇瓶柜中进行摇瓶种子培养， 培养温度为30℃，摇瓶转速为100rpm，培养时间为12h，得到摇瓶种子液；
[0079]
摇瓶种子液培养基的制备方法为，按照如下配比配制：葡萄糖30g/l、蛋 白胨30g/l、酵母浸粉30g/l和余量水，灭菌前ph为7.0，进行高温灭菌，灭 菌温度为122℃，灭菌保温时间为30min；
[0080]
步骤c、将摇瓶种子液用压差法接入到一级种子罐培养基中，摇瓶种子液 的接种量为10％，通入无菌空气，在通风量为10m3/h，搅拌转速为100rpm，培 养温度为30℃的条件下进行一级种子培养，培养时间为16h，得到一级种子液， 可以接入发酵罐中进行发酵培养；
[0081]
一级种子罐培养基的制备方法为，按照如下如下配比配制：葡萄糖30g/l、 蛋白胨30g/l、酵母浸粉30g/l和余量水，灭菌前ph为7.0,进行高温灭菌，灭 菌温度为122℃，灭菌
保温时间为30min；
[0082]
步骤d、将一级种子液接入发酵罐的发酵罐培养基中，通入无菌空气，进 行发酵培养(培养条件如下表3所示)，在培养至12h时开始匀速流加亚硒酸钠 溶液(将亚硒酸钠溶液流加至发酵罐培养基中，所述亚硒酸钠溶液的质量体积 浓度为1～2％，每升发酵液中添加0.3～0.6g亚硒酸钠溶液，使得发酵罐培养 基中的硒浓度如下表3所示)，发酵培养过程中控制ph为6.0，当菌体湿重不 再增加时，结束发酵培养，得到发酵液；
[0083]
发酵罐培养基的制备方法按如下配比配制：磷酸30g/l、硫酸钙5g/l、硫 酸钾30g/l、硫酸镁30g/l、氢氧化钾5g/l、葡萄糖80g/l、微量元素8ml/l和 余量水，灭菌前ph为7.0,进行高温灭菌，灭菌温度为122℃，灭菌保温时间为 30min；
[0084]
步骤e、将发酵液加入真空浓缩罐中，进行4倍的真空浓缩，浓缩温度为 60℃，真空度为-1.0mpa，然后将经过真空浓缩后的浓缩液输送至喷雾干燥塔进 行喷雾干燥，喷雾干燥的条件为进风温度150℃，出风温度60℃，喷雾干燥后 经过过筛处理，制得饲料用硒酵母。
[0085]
表3实施例b1～b6发酵培养条件
[0086][0087]
对实施例b1～b6在发酵培养完成时的菌体湿重、制得的饲料用硒酵母产品 中的总硒含量以及有机硒含量进行测定，得到的测试结果如表4所示。
[0088]
表4实施例b1～b6测试结果
[0089]
[0090][0091]
由实施例b1～b6可知，当实施例b4～b6的发酵罐培养基中的硒浓度过高 时，由于亚硒酸钠有毒性，对酵母的生长有抑制作用，使得实施例b4～b6的菌 体在发酵培养完成时的湿重较低，影响产量，且实施例b4～b6制得的饲料用硒 酵母中的有机硒含量也明显低于实施例b1～b3制得的饲料用硒酵母中的有机 硒含量。
[0092]
实施例c1～c3和对比例c1～c3
[0093]
一种饲料用硒酵母的制备方法，包括以下步骤：
[0094]
步骤a、在茄瓶种子培养基中接入甘油管保藏的菌株(菌株类型如下表5 所示)，在32℃下静置进行茄瓶斜面种子培养，培养时间为36h，得到茄瓶斜面 种子；
[0095]
茄瓶种子培养基的制备方法为，按照如下重量百分比配制：葡萄糖3％、蛋 白胨3％、营养琼脂15％和余量水，ph自然，进行高温灭菌，灭菌温度为122℃， 灭菌保温时间为30min；
[0096]
步骤b、将茄瓶斜面种子划成2cm
×
2cm大小的接种块后接入摇瓶种子液培 养基中，将接种后的摇瓶种子液培养基置于恒温摇瓶柜中进行摇瓶种子培养， 培养温度为32℃，摇瓶转速为150rpm，培养时间为24h，得到摇瓶种子液；
[0097]
摇瓶种子液培养基的制备方法为，按照如下配比配制：葡萄糖30g/l、蛋 白胨30g/l、酵母浸粉30g/l和余量水，灭菌前ph为7.0，进行高温灭菌，灭 菌温度为122℃，灭菌保温时间为30min；
[0098]
步骤c、将摇瓶种子液用压差法接入到一级种子罐培养基中，摇瓶种子液 的接种量为10％，通入无菌空气，在通风量为15m3/h，搅拌转速为150rpm，培 养温度为32℃的条件下进行一级种子培养，培养时间为20h，得到一级种子液， 可以接入发酵罐中进行发酵培养；
[0099]
一级种子罐培养基的制备方法为，按照如下配比配制：葡萄糖30g/l、蛋 白胨30g/l、酵母浸粉30g/l和余量水，灭菌前ph为7.0,进行高温灭菌，灭菌 温度为122℃，灭菌保温时间为30min；
[0100]
步骤d、将一级种子液接入发酵罐的发酵罐培养基中，通入无菌空气，进 行发酵培养(培养条件如下表5所示)，在培养至12h时开始匀速流加亚硒酸钠 溶液(将亚硒酸钠溶液流加至发酵罐培养基中，所述亚硒酸钠溶液的质量体积 浓度为1～2％，每升发酵液中添加0.3～0.6g亚硒酸钠溶液，使得发酵罐培养 基中的硒浓度如下表5所示)，发酵培养过程中
控制ph为6.0，当菌体湿重不 再增加时，结束发酵培养，得到发酵液；
[0101]
发酵罐培养基的制备方法按如下配比配制：磷酸30g/l、硫酸钙5g/l、硫 酸钾30g/l、硫酸镁30g/l、氢氧化钾5g/l、葡萄糖80g/l、微量元素8ml/l和 余量水，灭菌前ph为7.0,进行高温灭菌，灭菌温度为122℃，灭菌保温时间为 30min；
[0102]
步骤e、将发酵液加入真空浓缩罐中，进行5倍的真空浓缩，浓缩温度为 80℃，真空度为-1.0mpa，然后将经过真空浓缩后的浓缩液输送至喷雾干燥塔进 行喷雾干燥，喷雾干燥的条件为进风温度180℃，出风温度80℃，喷雾干燥后 经过过筛处理，制得饲料用硒酵母。
[0103]
表5实施例c1～c3和对比例c1～c3发酵培养条件
[0104][0105]
注：实施例c1～c3使用的巴斯德毕赤酵母的分类命名为巴斯德毕赤酵母 (pichia pastoris)，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：gdmccno:60262的巴斯德毕赤酵母x33 plt-07菌株；对比例c1～c3使用的产朊假丝 酵母2008为湖北海宜生物科技有限公司提供。
[0106]
对实施例c1～c3和对比例c1～c3在发酵培养完成时的菌体湿重、制得的 饲料用硒酵母产品中的总硒含量以及有机硒含量进行测定，得到的测试结果如 表6所示。
[0107]
表6实施例c1～c3和对比例c1～c3测试结果
[0108][0109]
由实施例c1～c3和对比例c1～c3可知，当对比例c1～c3使用产朊假丝酵 母时，对比例c1～c3的菌体在发酵培养完成时的湿重较低，菌体湿重在150g/l 以下，影响产量，且对比例c1～c3制得的饲料用硒酵母中的有机硒含量也明显 低于实施例c1～c3制得的饲料用硒酵母中的有机硒含量。
[0110]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对 上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技 术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0111]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详 细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领 域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形 和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所 附权利要求为准。