用于培养细胞的方法和过程与流程

本公开一般涉及培养的细胞、食品和肉类，包含海鲜。

背景技术：

1、细胞农业/水产养殖是一个新兴产业，意图解决现代食物生产已经开始遇到并且随着全球人口的增长将变得更加急迫的困难，预计2050年全球人口将达到约100亿。该产业试图通过减少现代农业的环境影响和改善动物福利以更可持续的方式生产动物蛋白。

2、细胞农业/水产养殖不是使整个动物生长作为食物，而是使用在培养物中生长和扩增的干细胞(主要是卫星细胞或成肌细胞)作为原料来生产食用肉类。虽然在科学上这是一个可行的想法，但是存在一些技术和财政上的挑战。扩大规模、商品成本、能源消耗、建立在结构和质地上与天然肉类相似的3d构造以及保持风味是成功的细胞基食物产品或培养的肉类必须克服的一些主要挑战。

3、特别地，培养海鲜肉类仍然是主要挑战。

技术实现思路

1、在一个方面，提供了一种用于提高从样品细胞培养物中培养的肌祖细胞的产量的方法，所述样品细胞培养物包括培养基中的多种细胞类型，所述方法包括：(a)将所述样品细胞培养物铺板在第一表面上；(b)将所铺板的细胞培养物培养足够的时间以使所述肌祖细胞粘附到所述第一表面上；(c)收集所述培养基的包括未粘附的肌祖细胞的至少一部分；以及(d)将从(c)所收集的培养基再铺板到另一个表面上以使所述未粘附的肌祖细胞粘附到所述另一个表面上。

2、在另一个方面，提供了一种生产食物产品的方法，所述方法包括：a)从自死后生物体或死后生物体的身体部位获得的组织样品中提取细胞；以及b)从所述组织样品中分离，并且培养肌祖细胞成为食物产品。

3、在另一个方面，提供了一种用于从组织样品中分离肌祖细胞的方法，其包括使用至少一个密度梯度将所述肌祖细胞与至少一种其它细胞或细胞碎片分离。

4、在又一个方面，提供了一种由本文所述方法制备的食物产品，所述食物产品包括：a)第一鱼肌细胞；和b)海鲜细胞。在又一个方面，提供了一种由本文所述方法制备的食物产品，所述食物产品包括：a)培养的鱼肌细胞，其是单独的或与b)其它培养的细胞、c)动物源性成分和/或d)非动物源性成分组合。

5、对于本领域技术人员而言，在阅读本公开后，许多关于本文所述实施例的进一步特征及其组合将是显而易见的。

技术特征：

1.一种提高从样品细胞培养物中培养的肌祖细胞的产量的方法，所述样品细胞培养物包括培养基中的多种细胞类型，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其中重复步骤(c)和(d)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其进一步包括用洗涤培养基洗涤各铺板的细胞培养物，收集所述洗涤培养基，并且将所述洗涤培养基铺板到第二表面上。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其包括在(a)之前，从生物体获得组织样品，并且过滤所述组织样品，以获得所述样品细胞培养物。

5.根据权利要求4所述的方法，其中过滤所述组织样品包括以下的一项或多项：

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述分离培养基是ficoll-paque。

7.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其包括从死后生物体获得所述组织样品。

8.根据权利要求4至7中任一项所述的方法，其中所述组织样品是动物组织。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述组织样品是海鲜动物组织。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述组织样品是鱼组织。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述表面涂有含或不含聚赖氨酸的层粘连蛋白、含或不含聚赖氨酸的明胶、胶原蛋白i、胶原蛋白iv、matrigeltm或geltrextm。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述表面涂有鱼明胶。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述表面包括微载体表面。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述培养基根据所述培养基的胎牛血清(fbs)含量补充有成纤维细胞生长因子-2(fgf-2)。

15.根据权利要求14所述的方法，其中当所述培养基的fbs含量低于10％时，所述培养基包括至少5ng/ml的fgf-2。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其进一步包括将所粘附的肌祖细胞培养和增殖到目标细胞密度和/或量以制成食物产品。

17.一种生产食物产品的方法，所述方法包括：

18.根据权利要求17所述的方法，其包括根据权利要求1至15中任一项所述的方法提高来自所提取的细胞的肌祖细胞的产量。

19.根据权利要求17所述的方法，其包括将所述肌祖细胞培养到支架结构上。

20.根据权利要求17至19中任一项所述的方法，其包括从所述死后生物体或所述死后生物体的身体部位获得所述组织样品。

21.根据权利要求17至20中任一项所述的方法，其中a)提取细胞包括以下的一项或多项：

22.根据权利要求17至21中任一项所述的方法，其中培养所述肌祖细胞包括将所分离的肌祖细胞与至少一种能够分泌生长刺激信号的其它类型的细胞一起培养。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述至少一种其它类型的细胞是同种异体或自体细胞。

24.根据权利要求22所述的方法，其中所述至少一种其它类型的细胞是异种细胞。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述至少一种其它类型的细胞是植物细胞。

26.根据权利要求22至25中任一项所述的方法，其中所述至少一种其它类型的细胞包括非肌源细胞，如上皮细胞、神经细胞、脂肪细胞、骨细胞、血细胞、免疫细胞、干细胞、胰腺、肝和消化系统细胞、结缔组织细胞或它们的组合。

27.根据权利要求22至26中任一项所述的方法，其中肌祖细胞和所述至少一种其它类型的细胞是共同培养的，并且由微孔膜隔开。

28.根据权利要求22至26中任一项所述的方法，其中肌祖细胞和所述至少一种其它类型的细胞是分开培养的，并且将含有所述至少一种其它类型的细胞的来自培养的培养基添加到含有所述肌祖细胞的培养物中。

29.根据权利要求17至28中任一项所述的方法，其中所述组织样品是动物组织。

30.根据权利要求29所述的方法，其中所述组织样品是海鲜动物组织。

31.根据权利要求30所述的方法，其中所述组织样品是鱼组织。

32.根据权利要求26所述的方法，其中所述至少一种其它类型的细胞包括鳃上皮细胞和/或鳞片细胞，并且所述组织样品从鱼获得。

33.根据权利要求26所述的方法，其中所述至少一种其它类型的细胞包括肝细胞。

34.一种从组织样品中分离肌祖细胞的方法，其包括使用至少一个密度梯度将所述肌祖细胞与至少一种其它细胞或细胞碎片分离。

35.根据权利要求34所述的方法，其包括使用2个连续密度梯度来分离所述肌祖细胞。

36.根据权利要求34或35所述的方法，其中所述密度梯度是ficoll梯度。

37.根据权利要求34或35所述的方法，其中所述密度梯度是percoll梯度。

38.根据权利要求34或35所述的方法，其中所述密度梯度是optipreptm梯度。

39.根据权利要求34至38中任一项所述的方法，其中所述肌祖细胞被分离出来以生长成食物产品。

40.根据权利要求34至39中任一项所述的方法，其中所述组织样品从死后生物体或死后生物体的身体部位获得。

41.根据权利要求34至40中任一项所述的方法，其中所述组织样品是动物组织。

42.根据权利要求41所述的方法，其中所述组织样品是海鲜动物组织。

43.根据权利要求42所述的方法，其中所述组织样品是鱼组织。

44.一种由根据权利要求1至43中任一项所述的方法制备的食物产品，所述食物产品包括：

45.根据权利要求44所述的食物产品，其中所述其它细胞包括与所述第一培养的鱼肌细胞不同的第二培养的鱼肌细胞。

46.根据权利要求44所述的食物产品，其中所述其它细胞是培养的细胞。

47.根据权利要求44所述的食物产品，其中所述其它细胞包括培养的或未培养的海鲜细胞。

48.根据权利要求44所述的食物产品，其中所述海鲜细胞包括藻类细胞。

49.根据权利要求44至48中任一项所述的食物产品，其进一步包括动物或非动物源性成分。

50.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其进一步包括将所粘附的肌祖细胞培养和增殖到目标细胞密度和/或量以用于：

51.一种用于分化肌细胞的方法，所述方法包括：

52.根据权利要求51所述的方法，其中所述表面涂有含或不含聚赖氨酸的层粘连蛋白、含或不含聚赖氨酸的明胶、胶原蛋白i、胶原蛋白iv、matrigeltm或geltrextm。

技术总结
培养的海鲜肌细胞通过以下过程生产：首先使用机械和酶促手段从组织中分离培养起始细胞，然后在培养中随时间的推移扩增其数量。用于提高海鲜肌细胞产量的方法用于制造海鲜产品。

技术研发人员：瓦伦丁·富尔加,西蒙·比布尼克,伊丽莎白·约翰斯顿,刘海顿,乔舒亚·波利亚克,彼得·柯里,马希德·易卜拉希米
受保护的技术使用者：细胞农业科技公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15