抗CNTN4特异性抗体及其用途的制作方法

本发明涉及抗cntn4特异性抗体或其抗原结合片段、含有其的治疗组合物及其用于激活t细胞的用途，例如用于治疗癌症。

背景技术：

1、人体有一个防御系统，其保护自身免受外部侵入物(病毒、毒素等)和内部有害变化(癌细胞突变)的侵害。与正常细胞不同，癌细胞在其表面上具有特异性抗原，并在癌症发展的早期阶段被免疫系统破坏。然后，当想要无限增殖的癌细胞和想要攻击癌细胞的免疫细胞的力量平衡崩溃时，癌细胞开始大量增殖。当癌细胞进一步生长时，它们会扰乱体内的免疫系统，并且一些癌细胞通过使用免疫细胞的免疫检查点来逃避免疫，而当免疫检查点抑制剂抑制免疫检查点时，免疫细胞的力量增加，从而杀伤癌细胞。

2、免疫检查点抑制剂是通过阻断参与t细胞抑制的免疫检查点蛋白的激活来激活t细胞来攻击癌细胞的药物，包括ctla-4、pd-1、pd-l1抑制剂等。目前可市售获得的代表性药物包括作为ctla-4单克隆抗体的伊匹单抗(产品名称：)，作为pd-1单克隆抗体的纳武单抗(产品名称：)和派姆单抗(产品名称：)，以及作为pd-l1单克隆抗体的阿特朱单抗(产品名称：)和德瓦鲁单抗(产品名称：)。

3、然而，仍然存在无法用现有免疫检查点抑制剂治疗的癌，因此需要开发新的抗癌治疗。

4、韩国专利申请公开号10-2019-0116930公开了cntn4可以用作使用人免疫系统的癌症治疗的新靶点。以上韩国专利申请公开了cntn4抑制t细胞活性。

5、[现有技术文献]

6、[专利文献]

7、韩国专利申请公开号10-2019-0116930。

技术实现思路

1、技术问题

2、本发明的目的是提供抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其与cntn4蛋白特异性结合。特别是，本发明旨在提供抗体或其抗原结合片段，其与cntn4蛋白结合以中和cntn4的免疫逃逸机制。

3、本发明还旨在提供组合物，其用于预防或治疗由t细胞活性降低引起的疾病，如癌症，通过使用所述抗体或其抗原结合片段以阻断cntn4的免疫逃逸机制并激活t细胞来进行。

4、本发明还旨在提供组合物，其使用所述抗体或抗原结合片段，用于分析或检测cntn4蛋白。

5、问题的解决方案

6、本发明提供一种抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其与cntn4蛋白特异性结合。所述抗体或抗原结合片段与cntn4蛋白(例如人或小鼠cntn4蛋白)特异性结合，以中和cntn4的免疫逃逸机制。因此，本发明的抗体或抗原结合片段可以增加已被cntn4抑制的t细胞(如cd4+t细胞或cd8+t细胞)的活性。

7、在实施方案中，本发明提供抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其包含：

8、轻链可变区，其包含seq id no：1的氨基酸序列；和

9、重链可变区，其包含seq id no：2的氨基酸序列。

10、在实施方案中，本发明的抗体可以是单克隆抗体。

11、在另一个实施方案中，本发明提供编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸分子和包含所述核酸分子的重组表达载体。

12、本发明还提供用于预防或治疗癌症的组合物，所述组合物包含所述抗体或其抗原结合片段作为活性成分。药物组合物可以与另外的抗癌剂组合使用，如免疫检查点抑制剂或化学治疗剂，或者可以与放射疗法组合使用。

13、本发明还提供用于分析或检测cntn4蛋白的组合物，所述组合物包含所述抗体或其抗原结合片段。

14、发明的有利效果

15、本发明的发明人已经证实，cntn4蛋白是一种免疫检查点蛋白，并且由于抑制t细胞活性而引起的免疫逃避程度比已知为常规免疫检查点蛋白的pd-l1更强。

16、另外，本发明的新型抗cntn4抗体或其抗原结合片段通过阻断cntn4的免疫逃逸机制来激活t细胞，因此可以有效地用于预防或治疗由t细胞活性降低引起的疾病，特别是癌症。因此，当使用本发明的抗cntn4抗体时，对于现有免疫疗法无法达到治疗效果的癌症，可以表现出优异的抗癌效果。

1.一种抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其包含：

2.根据权利要求1所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其与人或小鼠cntn4蛋白特异性结合。

3.根据权利要求1所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其与人cntn4蛋白结合的解离常数(kd)为1×10-7m或更小。

4.根据权利要求1所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其增加t细胞活性。

5.根据权利要求4所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其中所述t细胞是cd4+t细胞或cd8+t细胞。

6.根据权利要求1所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其增加细胞因子的分泌。

7.根据权利要求6所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞因子是il-2、tnfα、ifnγ或其组合。

8.根据权利要求1所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自fab、fab'、fab'-sh、fv、单链抗体scfv、(fab')2片段、单结构域抗体、双体抗体(dab)和线性抗体。

9.根据权利要求1所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是单克隆抗体。

10.根据权利要求1所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是嵌合抗体或人源化抗体。

11.根据权利要求1所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是多特异性抗体。

12.根据权利要求1所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体与药物缀合。

13.根据权利要求1所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是igg1、igg2、igg3或igg4。

14.一种核酸分子，其编码权利要求1至13中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

15.一种重组表达载体，其包含权利要求14所述的核酸分子。

16.一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，所述组合物包含权利要求1至13中任一项所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段作为活性成分。

17.根据权利要求16所述的药物组合物，其中所述癌症是表达cntn4的癌症。

18.一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，所述组合物包含根据权利要求1至13中任一项所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段；以及另外的抗癌剂。

19.根据权利要求18所述的药物组合物，其中所述另外的抗癌剂是免疫检查点抑制剂或化学治疗剂。

20.根据权利要求19所述的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂是选自抗ctla-4抗体、抗pd-1抗体和抗pd-l1抗体中的一种或多种。

21.根据权利要求18所述的药物组合物，其中所述抗cntn4抗体或其抗原结合片段以及所述另外的抗癌剂作为单一制剂同时施用，或作为分开的制剂同时或顺序施用。

22.一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至13中任一项所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段，并且与另外的抗癌疗法组合使用。

23.根据权利要求22所述的药物组合物，其中所述另外的抗癌疗法是选自免疫检查点抑制剂、化学治疗剂和放射疗法中的一种或多种。

24.一种用于诊断癌症的组合物，所述组合物包含权利要求1至13中任一项所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段。

25.一种用于检测样品中的cntn4蛋白的方法，其通过使用权利要求1至13中任一项所述的抗cntn4抗体或其抗原结合片段作为活性成分来进行。