一种腺相关病毒变体及其制备方法与应用与流程

本发明属于生物，具体涉及一种腺相关病毒变体及其制备方法与应用。

背景技术：

1、腺相关病毒(aav)是一种广泛应用于基因治疗的递送载体，其原理是通过基因工程方法将aav基因组itr之间序列替换成目的基因序列，经细胞感染传递到靶细胞，达到基因治疗目的。基于重组aav具有安全性、高效性、稳定性、持续性、特异性、低整合性等特点，使得aav成为基因治疗领域主要递送手段之一。然而，在基因治疗应用过程中，活体动物往往需要注射高剂量、高纯度的aav病毒，与此同时，高剂量的aav用量会导致动物机体毒性，这成为aav基因治疗产品市场化的一大瓶颈。并且伴随着基因治疗下游研发技术的成熟，上游aav生产通量和使用剂量问题的限制变得越来越明显。为了解决这个问题，现有的策略集中在以下两个方面，一是优化现有的aav生产工艺，提高病毒生产通量；二是寻找包装能力更强和活体组织感染能力更强的变异病毒，提高生产通量的同时减少病毒的使用剂量。生产工艺上的开发，仅仅是提高病毒产量，并不能根本性的改善aav使用剂量的局限性。

技术实现思路

1、本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种腺相关病毒变体。

2、本发明还提出一种编码上述腺相关病毒变体的核酸分子。

3、本发明还提出一种包含上述核酸分子的表达盒、重组载体或转基因细胞。

4、本发明还提出一种上述腺相关病毒变体的制备方法。

5、本发明还提出一种包括上述腺相关病毒变体、核酸分子、表达盒、重组载体或转基因细胞的药物组合物。

6、本发明还提出一种上述腺相关病毒变体、核酸分子、表达盒、重组载体、转基因细胞或药物组合物的应用。

7、根据本发明的第一方面，提出了一种腺相关病毒变体，所述腺相关病毒变体相对于seq id no.1所示的野生型aav2衣壳蛋白包含一个或多个氨基酸取代。

8、在本发明的一些实施方式中，所述一个或多个氨基酸置换位于选自以下的一个或多个位置：

9、(1)在第561位氨基酸处的丝氨酸；

10、(2)在第575位氨基酸处的苯丙氨酸；

11、(3)在第581位氨基酸处的谷氨酸；

12、(4)在第588位氨基酸处的组氨酸。

13、根据本发明的第二方面，提出了一种编码上述变体的核酸分子。

14、在本发明的一些实施方式中，所述核酸分子的编码序列如seq id no.2所示。

15、根据本发明的第三方面，提出了包含核酸分子的表达盒、重组载体或转基因细胞。

16、一种重组aav载体，所述重组aav载体包括插入有上述的核酸分子的野生型腺相关病毒载体。

17、在本发明的一些实施方式中，所述野生型腺相关病毒载体包括aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9或aav10中的任意一种，优选为aav2。

18、根据本发明的第四方面，提出了一种腺相关病毒变体的制备方法，所述方法包括以下步骤：采用上述重组aav载体与辅助质粒共转染哺乳细胞；培养后裂解哺乳细胞，得到所述腺相关病毒变体。

19、根据本发明的第五方面，提出了一种药物组合物，所述药物组合物包括上述腺相关病毒变体、核酸分子、表达盒、重组载体或转基因细胞中的至少一种。

20、在本发明的一些实施方式中，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的任意一种或至少两种的组合。

21、根据本发明的第六方面，提出了上述腺相关病毒变体、核酸分子、表达盒、重组载体、转基因细胞或药物组合物在制备将编码功能性基因产物的核酸分子递送到细胞和/或组织的产品的应用。

22、用于产生体细胞转基因动物模型的方法，其包括向非人动物施用上述的腺相关病毒变体，其中所述腺相关病毒变体包含至少一种转基因，并且其中所述腺相关病毒变体感染所述非人动物靶组织的细胞。

23、根据本发明实施方式腺相关病毒变体，至少具有如下有益效果：通过本发明方案将野生型aav2衣壳蛋白序列用s561，f575，e581和h588 4个氨基酸进行取代，制备得到的腺相关病毒变体，能显著提高aav2病毒包装能力和活体组织感染能力，从根本上解决aav2生产通量和使用剂量的问题。

技术特征：

1.一种腺相关病毒变体，其特征在于，所述腺相关病毒变体相对于seq id no.1所示的野生型aav2衣壳蛋白包含一个或多个氨基酸取代。

2.根据权利要求1所述的腺相关病毒变体，其特征在于，

3.编码权利要求1或2所述的变体的核酸分子。

4.包含如权利要求3所述的核酸分子的表达盒、重组载体或转基因细胞。

5.一种重组aav载体，其特征在于，所述重组aav载体包括插入有如权利要求3所述的的核酸分子的野生型腺相关病毒载体。

6.根据权利要求5所述的重组aav载体，其特征在于，所述野生型腺相关病毒载体包括aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9或aav10中的任意一种，优选为aav2。

7.一种腺相关病毒变体的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：采用如权利要求5所述的重组aav载体与辅助质粒共转染哺乳细胞；培养后裂解哺乳细胞，得到所述腺相关病毒变体。

8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如权利要求1或2所述的腺相关病毒变体、权利要求3所述的核酸分子、权利要求4所述的表达盒、重组载体或转基因细胞中或权利要求5所述的重组aav载体的至少一种。

9.用于产生体细胞转基因动物模型的方法，其包括向非人动物施用权利要求1或2的腺相关病毒变体，其中所述腺相关病毒变体包含至少一种转基因，并且其中所述腺相关病毒变体感染所述非人动物靶组织的细胞。

10.如权利要求1或2所述的腺相关病毒变体、权利要求3所述的核酸分子、权利要求4所述的表达盒、重组载体或转基因细胞、权利要求5所述的重组aav载体、权利要求8所述的药物组合物在制备将编码功能性基因产物的核酸分子递送到细胞和/或组织的产品的应用。

技术总结
本发明公开了一种腺相关病毒变体及其制备方法与应用，所述腺相关病毒变体相对于SEQ ID NO.1所示的野生型AAV2衣壳蛋白包含一个或多个氨基酸取代。通过本发明方案制备得到的腺相关病毒变体，能显著提高AAV2病毒包装能力和活体组织感染能力，从根本上解决AAV2生产通量和使用剂量的问题。

技术研发人员：韩蓝青,周顺,任盛,秦珂,邓唯珂,张启星,刘华清
受保护的技术使用者：赛业（广州）生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13