1.本发明属于微生物除臭技术领域，尤其涉及一种复合微生物除臭菌剂及其制备方法和应用。
背景技术：
2.微生物除臭是利用能够转化或者降解恶臭物质的特殊微生物的高效吸附、吸收和降解作用，对生活和生产过程中产生或散发的含硫、含氮等恶臭气体进行净化，将硫化氢、硫醇和氨气等恶臭成分转化为无害无臭的物质，达到改善环境空气质量和保护健康的目标。
3.近年来，国内外在除臭领域均有一定的研究，报道的除臭制剂有多聚甲醛、沸石、有机酸、酶制剂、尿酶抑制剂、微生物、中草药等，特别是 20世纪80年代以来，由日本硫球大学比嘉照夫根据微生态平衡原理研制的 em菌剂，对臭源环境的净化有明显效果，但存在性价比低，应用面小的突出问题。目前，市场上已存在多种微生物除臭剂，但是主要都是单一或复配的乳酸菌类，除臭效果不佳，急需开发高效安全的新型复合微生物除臭消毒类产品，以适应农牧业绿色发展和福利化养殖的市场需求。
技术实现要素：
4.有鉴于此，本发明的目的在于提供一种复合微生物除臭菌剂及其制备方法和应用，本发明提供的复合微生物除臭菌剂不但能对畜禽圈舍和粪水除臭，而且微生物无毒、无污染，对环境、人体、畜禽、植物和土壤友好，不产生危害。
5.为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
6.本发明提供了一种复合微生物除臭菌剂，包括长孢洛德酵母、玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌，所述长孢洛德酵母、玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌的活菌总数为130～170亿/ml。
7.优选的，所述复合微生物除臭菌剂中长孢洛德酵母的活菌数为40～50 亿/ml。
8.优选的，所述复合微生物除臭菌剂中玉米乳杆菌的活菌数为30～40亿 /ml。
9.优选的，所述复合微生物除臭菌剂中植物乳杆菌的活菌数为30～40亿 /ml。
10.优选的，所述复合微生物除臭菌剂中副干酪乳杆菌的活菌数为30～40 亿/ml。
11.本发明还提供了上述技术方案所述的复合微生物除臭菌剂的制备方法，包括以下步骤：
12.1)将所述长孢洛德酵母接种于pdb培养基中培养，得到长孢洛德酵母种子液；
13.2)将所述玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌分别接种于mrs 培养基中培养，分别得到玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液；
14.3)将所述步骤1)得到的长孢洛德酵母种子液接种于发酵料中发酵 2～3d，再接种步骤2)得到的玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液后发酵2～3d，得到复合微生物除臭菌剂；
15.所述步骤1)和2)无时间顺序限定。
16.优选的，所述长孢洛德酵母种子液中长孢洛德酵母的活菌数为40～50 亿/ml；
17.所述玉米乳杆菌种子液中玉米乳杆菌的活菌数为30～40亿/ml；
18.所述植物乳杆菌种子液中植物乳杆菌的活菌量为30～40亿/ml；
19.所述副干酪乳杆菌种子液中副干酪乳杆菌的活菌量为30～40亿/ml。
20.优选的，所述长孢洛德酵母种子液、玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液的接种量分别为1％～1.5％。
21.本发明还提供了上述技术方案所述的复合微生物除臭菌剂在除臭中的应用。
22.优选的，当对畜禽圈舍除臭时，将所述复合微生物除臭菌剂稀释 15～20倍后喷雾于畜禽圈舍，每100m2的畜禽圈舍喷雾0.5～1.5l复合微生物除臭菌剂；
23.当对粪水除臭时，将所述复合微生物除臭菌剂接种于粪水中自然发酵 7d以上，所述复合微生物除臭菌剂的接种量为2％～4％。
24.本发明提供了一种复合微生物除臭菌剂，包括长孢洛德酵母、玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌，所述长孢洛德酵母、玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌的活菌总数为130～170亿/ml。
25.在本发明中，所述复合微生物除臭菌剂的除臭机理为：长孢洛德酵母可有效抑制含氮和含硫有机物分解转化为氨气和硫化氢，玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌可利用底物产生有机酸，有效分解氨气、硫化氢、硫醇和甲硫醇等主要的异味气体，同时因有机酸类快速降低环境的ph值，从而高效抑制了产臭源气体的微生物的增殖，从根本上解除了恶臭气体物质的产生，实现恶臭原位源头控制，达到持久消除臭源，另外，玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌均为环境友好的乳酸菌，有利于增加益生菌多样性，尤其在畜禽养殖场推测可能比单一乳酸菌株能发挥更好的生物安全防控效果。
26.本发明提供的复合微生物除臭菌剂中的微生物无毒、无污染、无残留，对环境、人体、畜禽、植物和土壌友好，没有任何二次危害，且能有效预防畜禽圈舍内的蚊蝇滋生，可为畜禽提供更好的福利化养殖环境。
具体实施方式
27.本发明提供了一种复合微生物除臭菌剂，包括长孢洛德酵母、玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌(cgmcc 1.9089)，所述长孢洛德酵母、玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌的活菌总数为130～170亿/ml。在本发明中，所述复合微生物除臭菌剂中长孢洛德酵母的活菌数优选为 40～50亿/ml；所述长孢洛德酵母优选的包括accc 20322；所述复合微生物除臭菌剂中玉米乳杆菌的活菌数优选为30～40亿/ml；所述玉米乳杆菌优选为玉米乳杆菌cgmcc 1.2442；所述复合微生物除臭菌剂中植物乳杆菌的活菌数优选为30～40亿/ml；所述植物乳杆菌优选为植物乳杆菌accc 11016；所述复合微生物除臭菌剂中副干酪乳杆菌的活菌数优选为30～40亿 /ml；所述副干酪乳杆菌优选为副干酪乳杆菌cgmcc 1.9089。
28.本发明还提供了上述技术方案所述的复合微生物除臭菌剂的制备方法，包括以下步骤：
29.1)将所述长孢洛德酵母接种于pdb培养基中培养，得到长孢洛德酵母种子液；
30.2)将所述玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌分别接种于mrs 培养基中培养，分别得到玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液；
31.3)将所述步骤1)得到的长孢洛德酵母种子液接种于发酵料中发酵 2～3d，再接种步骤2)得到的玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液后发酵2～3d，得到复合微生物除臭菌剂；
32.所述步骤1)和2)无时间顺序限定。
33.本发明将所述长孢洛德酵母接种于pdb培养基中培养，得到长孢洛德酵母种子液。本发明对所述长孢洛德酵母接种于pdb培养基的接种量没有特殊限定，采用常规长孢洛德酵母接种于液体培养基中的接种量即可。在本发明中，所述长孢洛德酵母优选在28～35℃下静置培养，得到长孢洛德酵母种子液，所述培养的温度更优选为30℃，本发明对所述培养的时间无特殊限定，达到目标活菌含量即可。在本发明中，所述长孢洛德酵母种子液中长孢洛德酵母的活菌数优选为40～50亿/ml。
34.本发明将所述玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌分别接种于 mrs培养基中培养，分别得到玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液。
35.在本发明中，所述mrs培养基以水为溶剂，每升优选包括：蛋白胨 10g、牛肉膏5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、乙酸钠5g、柠檬酸三铵2g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g和吐温801ml；所述mrs 培养基的ph值优选为6.0～6.5。
36.本发明对所述玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌分别接种于 mrs培养基中的接种量没有特殊限定，采用常规乳酸菌接种液体培养基的接种量即可。在本发明中，所述玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌分别优选在35～40℃下静置培养得到种子液，所述培养的温度更优选为37 ℃，本发明对所述培养的时间无特殊限定，达到目标活菌含量即可。在本发明中，所述玉米乳杆菌种子液中玉米乳杆菌的活菌数优选为30～40亿/ml；所述植物乳杆菌种子液中植物乳杆菌的活菌量优选为30～40亿/ml；所述副干酪乳杆菌种子液中副干酪乳杆菌的活菌量优选为30～40亿/ml。
37.本发明将得到的长孢洛德酵母种子液先接种于发酵料发酵2～3d，避免乳酸菌混合发酵降低ph，待长孢洛德酵母生物量达到od
600nm 3.0左右时，再接种得到的玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液后发酵2～3d，得到复合微生物除臭菌剂。
38.在本发明中，所述长孢洛德酵母、玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌优选经过菌种斜面活化培养后，再接种于培养基中制备种子液，本发明对斜面活化培养的条件没有特殊限定，采用上述菌种常规斜面活化的培养方法即可。
39.在本发明中，所述发酵料优选的以水为溶剂，每升包括：葡萄糖 10～20g、大豆粉3～8g、磷酸氢二钾0.5～1.5g、柠檬酸三铵0.5～1.5g、乙酸钠0.5～1.5g、硫酸镁0.1～0.3g和硫酸锰0.05g；更优选包括葡萄糖15g、大豆粉5g、磷酸氢二钾1g、柠檬酸三铵1g、乙酸钠1g、硫酸镁0.2g和硫酸锰0.05g；所述发酵料的ph值优选为6.5～7.0。本发明的发酵料对酵母菌、复合乳酸菌株都能够快速增殖的培养基。
40.在本发明中，所述发酵的温度优选为35～42℃，更优选为37℃；所述发酵的ph值优选为6.5，若在发酵过程中，ph值下降到5.0以下时，优选添加碳酸钠将ph值调回6.5，回调2次后，复合微生物除臭菌剂中长孢洛德酵母、玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌的活菌总数控制在150 亿/ml。
41.本发明根据各个微生物的代谢特性，采用上述的接种顺序和ph值回调措施保证每种菌种都能达到高密度培养。
42.在本发明中，所述长孢洛德酵母种子液、玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液的接种量的体积比优选为(3～5)：(1～2)：(1～2)：(1～2)。
43.本发明还提供了上述技术方案所述的复合微生物除臭菌剂在除臭中的应用。
44.在本发明中，当对畜禽圈舍除臭时，将所述复合微生物除臭菌剂优选稀释15～20倍后喷雾于畜禽圈舍，每100m2的畜禽圈舍喷雾0.5～1.5l复合微生物除臭菌剂。在本发明中，所述复合微生物除臭菌剂优选使用水进行稀释。
45.在本发明中，当优选对粪水除臭时，将所述复合微生物除臭菌剂接种于粪水中自然发酵7d以上；所述复合微生物除臭菌剂的接种量优选为 2～4％，更优选为3％。在本发明中，所述粪水优选为粪污干湿分离后的粪水，所述粪污优选为猪粪污。
46.下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
47.实施例1
48.复合微生物除臭菌剂的制备方法：
49.1)将斜面活化的长孢洛德酵母接种于pdb培养基中在28℃下静置培养，得到长孢洛德酵母种子液，长孢洛德酵母种子液中长孢洛德酵母的活菌量为50亿/ml；
50.2)将斜面活化的玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌分别接种于mrs培养基中在37℃下静置培养，分别得到玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液；玉米乳杆菌种子液中玉米乳杆菌的活菌量为40亿/ml；植物乳杆菌种子液中植物乳杆菌的活菌量为40亿/ml；副干酪乳杆菌种子液中副干酪乳杆菌的活菌量为40亿/ml；
51.3)将所述步骤1)得到的长孢洛德酵母种子液以1％接种量接种于发酵料中在28℃下发酵2d，再接种步骤2)得到的玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液后在37℃下发酵2d，得到复合微生物除臭菌剂；
52.玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液的接种量分别为1％；在发酵过程中，若发酵物料的ph值下降到5.0时，添加碳酸钠，将ph值调回到6.5，总共回调2次；
53.发酵料以水为溶剂，每升包括：葡萄糖15g、大豆粉5g、磷酸氢二钾 1g、柠檬酸三铵1g、乙酸钠1g、硫酸镁0.2g和硫酸锰0.05g；发酵料的 ph值为6.5。
54.经活菌检测，复合微生物除臭菌剂中长孢洛德酵母、玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌的活菌总数为130亿/ml，其中长孢洛德酵母的活菌数为40亿/ml，玉米乳杆菌的活菌数为30亿/ml，植物乳杆菌的活菌数为30亿/ml，副干酪乳杆菌的活菌数为30亿/ml。
55.实施例2
56.复合微生物除臭菌剂的制备方法：
57.1)将斜面活化的长孢洛德酵母接种于pdb培养基中在28℃下静置培养，得到长孢洛德酵母种子液，长孢洛德酵母种子液中长孢洛德酵母的活菌量为50亿/ml；
58.2)将斜面活化的玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌分别接种于 mrs培养基中在37℃下静置培养，分别得到玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液；玉米乳杆菌种子液中玉米乳杆菌的活菌量为40亿/ml；植物乳杆菌种子液中植物乳杆
菌的活菌量为40亿/ml；副干酪乳杆菌种子液中副干酪乳杆菌的活菌量为40亿/ml
59.3)将所述步骤1)得到的长孢洛德酵母种子液以2％接种量接种于发酵料中在28℃下发酵3d，再接种步骤2)得到的玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液后在37℃下发酵3d，得到复合微生物除臭菌剂；
60.玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液的接种量分别为2％；在发酵过程中，若发酵物料的ph值下降到5.0时，添加碳酸钠，将ph值调回到6.5，总共回调2次；
61.发酵料以水为溶剂，每升包括：葡萄糖10g、大豆粉3g、磷酸氢二钾 0.5g、柠檬酸三铵0.5g、乙酸钠0.5g、硫酸镁0.1g和硫酸锰0.05g；发酵料的ph值为6.5。
62.经活菌检测，复合微生物除臭菌剂中长孢洛德酵母、玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌的活菌总数为150亿/ml，其中长孢洛德酵母的活菌数为50亿/ml，玉米乳杆菌的活菌数为40亿/ml，植物乳杆菌的活菌数为30亿/ml，副干酪乳杆菌的活菌数为30亿/ml。
63.实施例3
64.复合微生物除臭菌剂的制备方法：
65.1)将斜面活化的长孢洛德酵母接种于pdb培养基中在28℃下静置培养，得到长孢洛德酵母种子液，长孢洛德酵母种子液中长孢洛德酵母的活菌量为50亿/ml；
66.2)将斜面活化的玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌分别接种于 mrs培养基中在42℃下静置培养，分别得到玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液；玉米乳杆菌种子液中玉米乳杆菌的活菌量为40亿/ml；植物乳杆菌种子液中植物乳杆菌的活菌量为40亿/ml；副干酪乳杆菌种子液中副干酪乳杆菌的活菌量为40亿/ml；
67.3)将所述步骤1)得到的长孢洛德酵母种子液以3％接种量接种于发酵料中在28℃下发酵3d，再接种步骤2)得到的玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液后在37℃下发酵3d，得到复合微生物除臭菌剂；
68.玉米乳杆菌种子液、植物乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液的接种量分别为3％；在发酵过程中，若发酵物料的ph值下降到5.0时，添加碳酸钠，将ph值调回到6.5，总共回调2次；
69.发酵料以水为溶剂，每升包括：葡萄糖20g、大豆粉15g、磷酸氢二钾1.5g、柠檬酸三铵1.5g、乙酸钠1.5g、硫酸镁0.3g和硫酸锰0.05g；发酵料的ph值为6.5。
70.经活菌检测，复合微生物除臭菌剂中长孢洛德酵母、玉米乳杆菌、植物乳杆菌和副干酪乳杆菌的活菌总数为170亿/ml，其中长孢洛德酵母的活菌数为50亿/ml，玉米乳杆菌的活菌数为40亿/ml，植物乳杆菌的活菌数为40亿/ml，副干酪乳杆菌的活菌数为40亿/ml。
71.实施例4
72.畜禽圈舍除臭实验：将实施例1所得除臭菌剂稀释20倍后雾化喷雾于猪场圈舍，平均1升除臭原液处理100平方米，作用7天后，感官结果表明，本除臭消毒菌剂可使猪舍内的臭味减轻。经测试分析，该除臭菌剂处理后，猪舍内的氨和硫化氢浓度有所降低，氨气、硫化氢、甲硫醇和甲硫醚的清除效率分别达到47.3％、68.7％、73.3％和73.3％。
73.实施例5
74.将实施例2所得除臭菌剂稀释20倍后雾化喷雾于猪场圈舍，平均1升除臭原液处理100平方米，作用7天后，感官结果表明，本除臭消毒菌剂可使猪舍内的臭味明显减轻。经测
试分析，该除臭菌剂处理后，猪舍内的氨和硫化氢浓度降低，氨气、硫化氢、甲硫醇和甲硫醚的清除效率分别达到52.6％、73.5％、80.3％和83.4％。
75.实施例6
76.将实施例3所得除臭菌剂稀释20倍后雾化喷雾于猪场圈舍，平均1升除臭原液处理100平方米，作用7天后，感官结果表明，本除臭消毒菌剂可使猪舍内的臭味消失。经测试分析，该除臭菌剂处理后，猪舍内的氨和硫化氢浓度显著降低，氨气、硫化氢、甲硫醇和甲硫醚的清除效率分别达到63.5％、80.7％、90.2％和93.4％。
77.以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。