小分子活性肽及在促进皮肤细胞代谢和生物合成中的用途的制作方法

1.本发明公开了一种小分子活性肽，为一种新的小分子肽，同时还公开了该小分子活性肽在促进皮肤细胞代谢和生物合成中的用途；属于美容护肤生物制品技术领域。


背景技术：

2.美容的目的就是要使皮肤保持年轻，但是传统的对皮肤的物理性覆盖、补充水分或补充营养等美容手段是无法达到这个目的的。
3.要想使皮肤细胞真正保持年轻，是使皮肤从生理上年轻。为此就要增强皮肤细胞的活力，促进皮肤细胞的代谢和生物合成，使新生的皮肤细胞多于老化的皮肤细胞，这样就可以使皮肤保持生理年轻状态，从而起到良好的美容作用。
4.因为只有促进了皮肤细胞的代谢，才能促进皮肤细胞内各种活性成分和功效成分的生物合成，细胞的更新才能加快，细胞的更新加快了，皮肤自然就会保持良好的年轻状态。
5.虽然目前已经有一些可促进皮肤细胞代谢和生物合成的技术，但是却难以实际应用于美容领域，其主要原因是其采用的生物活性成分（如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子等）分子量过大，难以被透皮吸收，虽然在体外细胞实验时有较好的促进皮肤细胞代谢和生物合成的作用，但是当涂抹于皮肤时，由于难于透皮吸收，故几乎没有美容效果。


技术实现要素：

6.本发明提供了小分子活性肽及在促进皮肤细胞代谢和生物合成中的用途，具有良好的促进皮肤细胞代谢、生物合成和生长的作用。
7.本发明公开的一种小分子生物活性肽，命名为三肽-c（tripeptide-c），是由丝氨酸、精氨酸和谷氨酸通过缩合反应人工合成的一种寡肽，其氨基酸序列为：丝氨酸-精氨酸-谷氨酸（ser-arg-glu），其分子结构式为：其分子式为：c
13h24
o7n6；分子量为：390.40d。
8.本发明所述的小分子生物活性肽在制备促进皮肤细胞代谢和生物合成化妆品中的用途，包括：面霜、化妆水、面膜、护肤蜜、眼霜、乳液、精华液、冻干粉、口红等化妆品制品。
9.经体外皮肤细胞促生长试验和体外完整皮肤促生长试验证明，本发明具有显著的促进皮肤细胞代谢、生物合成和生长的作用，实验组与对照组相差非常显著。
10.本发明公开的小分子生物活性肽，由于其分子量非常小，仅为390.40d，故易于被皮肤吸收。经人体皮肤涂抹试验，证明本发明可使皮肤年轻化，具有明显的皮肤美容作用，
虽仅含有0.1%的本发明，但眼观美容效果即非常显著。
11.本发明的积极效果在于：公开了一种新的小分子生物活性肽，其具有良好的促进皮肤细胞代谢、生物合成和生长的作用；用于化妆品，美容效果明显；且可产业化，具有广阔的应用前景，必将产生巨大的经济效益。
附图说明
12.图1为本发明典型案例1人体皮肤涂抹试验眼观对比照片；图2为本发明典型案例2人体皮肤涂抹试验眼观对比照片；图3为本发明典型案例3人体皮肤涂抹试验眼观对比照片；图4为本发明典型案例4人体皮肤涂抹试验眼观对比照片。
具体实施方式
13.通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。
14.实施例1本发明一种小分子生物活性肽（命名为三肽-c（tripeptide-c）），是由丝氨酸、精氨酸和谷氨酸通过缩合反应人工合成的一种寡肽，其氨基酸序列为：丝氨酸-精氨酸-谷氨酸（ser-arg-glu），其分子结构式为：其分子式为：c
13h24
o7n6；分子量为：390.40d。
15.实验例1实验目的本发明小分子生物活性肽在促进皮肤细胞代谢和生物合成中的作用。
16.2材料细胞培养皿：采用10cm玻璃培养皿，用前置强酸洗液中浸泡过夜，用蒸馏水洗至中性，250℃干热灭菌1.5小时；二氧化碳培养箱：长沙华曦电子科技有限公司；细胞培养基：dmem-h完全培养基（含10%fbs）。河南北纳创联生物科技有限公司产品，批号20210601。使用前，用双馏水按说明书配置成细胞培养液，用0.1微米的微孔滤膜滤过除菌，置冰箱冷藏曾保存，限3日内使用；乳鼠：购于吉林大学白求恩医学院实验动物室；倒置显微镜：日本奥林巴斯；三肽-c：以丝氨酸、精氨酸和谷氨酸为原料，委托吉林省媚蒂斯生物科技有限公司
采用固态缩合反应法人工合成，纯度99.6%。使用前，用细胞培养液配制成0.1%的溶液，用0.1微米的微孔滤膜滤过除菌，限3小时内使用；胰蛋白酶：上海化学试剂有限公司，批号20210206；使用前，用0.01mph7.2pbs配制成0.1%的使用液；恒温水浴箱：上海善志仪器设备有限公司；透明质酸钠：华熙生物科技股份有限公司，批号21013151；其他材料、器材：略3方法3.1 体外皮肤细胞促生长试验3.1.1 皮肤细胞的制备取活乳鼠，置0.1%苯扎溴铵溶液中浸泡40分钟，用无菌双馏水冲洗干净，用无菌操作法取其皮肤，剪碎，置于玻璃研磨器中研磨至均匀糊状；按1：10比例加入细胞培养液，混匀，移入细胞培养皿中，每个培养皿10ml。置于二氧化碳培养箱中，37℃恒温培养。
17.每隔8-10小时用倒置显微镜检查细胞生长情况，待细胞生长成单层后，倒去培养液，每个培养皿加入胰蛋白酶溶液2ml，置37℃恒温水浴中进行消化，期间可用吸管反复吸打培养皿内壁的细胞单层，以促进消化；待细胞单层被消化为单个细胞后，每个培养皿内加入细胞培养液20ml，即为皮肤细胞悬液，待用。
18.3.1.2 皮肤细胞促生长试验对照组：取上述皮肤细胞悬液10ml，加入培养皿中；实验组：取上述皮肤细胞悬液9ml，加入培养皿中，再加入含0.1%三肽-c的细胞培养液1ml，混匀。此时三肽-c的浓度为0.01%；将对照组和实验组一起放入二氧化碳培养箱内37℃恒温培养，分别在6、12、18、24、30小时用倒置显微镜观察细胞生长密度。
19.3.2 体外完整皮肤促生长试验取乳鼠，置0.1%苯扎溴铵溶液中浸泡40分钟，用无菌双馏水冲洗干净，用无菌操作法取其皮肤，剪成1cmx1cm的小块；对照组：将皮肤小块放入培养皿中，每个培养皿中放2块，加入细胞培养液10ml；共5个培养皿；实验组：将皮肤小块放入培养皿中，每个培养皿中放2块，加入细胞培养液9ml，加入含0.1%本发明（三肽-c）的细胞培养液1ml，混匀；共5个培养皿；将对照组和实验组一起放入二氧化碳培养箱内37℃恒温培养，分别在24、48、72小时观察和测定皮肤生长情况，并计算出生长率。
20.3.3 人体皮肤涂抹试验对照组：年龄45-55岁皮肤老化有皱纹者30人，每天早晚各涂抹0.2%透明质酸钠水溶液1次；实验组：年龄45-55岁皮肤老化有皱纹者30人，每天早晚各涂抹含0.1%三肽-c的0.2%透明质酸钠水溶液1次；对照组和实验组均分别在3、6、9、12、15天观察皮肤改善情况，主要观察皮肤嫩化和皱纹淡化情况；
4 结果4.1体外皮肤细胞促生长试验结果表1.体外皮肤细胞促生长试验结果注：实验组细胞生长密度明显高于对照组4.2体外完整皮肤促生长试验结果：表2.体外完整皮肤促生长试验结果注：实验组皮肤生长率明显高于对照组4.3人体皮肤涂抹试验结果4.3.1人体皮肤涂抹试验统计结果 表3.人体皮肤涂抹试验统计结果注：实验组皮肤改善率明显高于对照组4.3.2人体皮肤涂抹试验眼观结果典型案例1：在使用15天后，皮肤皱纹基本消失，皮肤变细嫩变白（见图1）；典型案例2：在使用15天后，皮肤皱纹基本消失，皮肤变细嫩（见图2）；典型案例3：在使用15天后，皮肤皱纹显著减轻，皮肤变细嫩（见图3）；典型案例4：在使用15天后，皮肤皱纹基本消失，皮肤变细嫩（见图4）。
21.5 结论通过体外皮肤细胞促生长试验和体外完整皮肤促生长试验的结果可以看出，在细胞培养液中加入了0.01%的本发明之后，体外皮肤细胞的生长率和体外完整皮肤的生长率均明显高于对照组。此结果表明，本发明可促进皮肤细胞的代谢和生物合成，因而促进了皮肤细胞的生长。皮肤细胞生长加快，就促进了皮肤细胞的更新，使皮肤细胞保持年轻态，从而就解决了皮肤衰老的问题，因此，从生理上具有美容作用。
22.但是，体外试验具有良好美容效果，不完全等于用于人体时就一定会具有明显美容效果。因为要在用于人体时也具有明显美容效果，就必须解决两个问题：一是有效成分要能透皮吸收，这就要求有效成分必须是小分子，而本发明恰恰是一个小分子生物活性肽，它的分子量只有390.40d，理论上讲单纯涂抹就可以透皮吸收；二是要有足够的量的本发明三肽-c进入皮肤，因为皮肤有屏障作用，即使是小分子成分，也只能吸收一小部分，这就要求产品中本发明三肽-c的含量要足够，但是成本又不能太高。
23.为验证上述两个问题，本发明进行了人体皮肤涂抹试验，证明具有显著的皮肤美容作用。采用的本发明浓度为0.1%，即体外皮肤细胞促生长试验和体外完整皮肤促生长试验所用浓度的10倍，此时成本低廉，是产品产业化完全可以承受的成本。