4”,11-O-(1,2,3-三氮唑)克拉霉素类衍生物及其制备方法、应用与流程

4”,11-o-(1,2,3-三氮唑)克拉霉素类衍生物及其制备方法、应用
技术领域
1.本发明属于药物化学技术领域，具体涉及4”,11-o-(1,2,3-三氮唑)克拉霉素类衍生物及其制备方法、应用。


背景技术：

2.大环内酯类抗生素是继β-内酰胺类和氨基糖苷类之后发现的第三类抗生素，它们的结构特征是含有一个14、15或16元内酯环。大环内酯类抗生素可有效的治疗由大多数革兰氏阳性菌、一些革兰氏阴性菌(如流感嗜血杆菌)和非典型病原体(如衣原体和支原体)引起的感染。值得注意的是，许多可以用头孢菌素治疗的感染也可以用大环内酯类抗生素进行治疗。因此，大环内酯类药物为青霉素过敏患者提供了一种替代疗法。大环内酯类抗生素的作用部位是细菌的70s核糖体，其由30s和50s亚基组成。前者可以将遗传信息转化为氨基酸序列，而后者负责肽键的形成。大环内酯类抗生素可选择性结合肽基转移酶中心附近50s亚单位的23s rrna，阻断细菌多肽的延长，从而抑制细菌蛋白质的合成，最终产生抗菌作用。
3.不幸的是，抗生素的广泛使用不可避免地导致临床上耐药菌株的出现，使细菌耐药性问题变得越来越严重。自20世纪90年代以来，大环内酯类抗生素在临床上的广泛应用导致细菌耐药性迅速增加。因此，克服细菌耐药性问题是药物化学家当前面临的挑战之一。这些耐药菌通常通过细菌核糖体修饰或获得性外排泵机制改变大环内酯类抗生素的结合位点，从而对大环内酯类抗生素产生耐药性。一个常见的结合位点变化是erm基因编码的甲基化酶，可以使细菌23s rrna中的特定核苷酸残基发生甲基化。例如，肺炎链球菌中的erm基因通常组成性表达，并对大环内酯类、林可酰胺类和链霉素b产生交叉耐药性，这种表型称为mlsb耐药。这种机制可以导致细菌对大环内酯类抗生素产生高水平的耐药。对大环内酯类抗生素产生耐药的另一个常见机制是外排泵耐药，这通常需要一个由mef基因编码的能量依赖性外排泵。具有这种机制的耐药菌可以将大环内酯类抗生素从细菌细胞内转移到细胞外，导致细胞内的药物浓度显著降低，使大环内酯类抗生素无法发挥抗菌作用。外排泵机制的耐药通常会导致耐药菌对大环内酯类药物表现出中等程度的耐药性。
4.第一代大环内酯类抗生素，如红霉素在临床应用的一个不可避免的缺点是其体内固有的酸不稳定性，使其不适合口服；第二代大环内酯类抗生素，如克拉霉素和阿奇霉素对耐药菌的疗效并不显著；第三代大环内酯类抗生素，如泰利霉素、索立霉素和喹红霉素对mlsb型耐药肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌的抗菌活性较差。此外，随着大环内酯类抗生素在临床上的广泛使用，导致一些细菌逐渐对大环内酯类抗生素产生了耐药性，这极大的降低了大环内酯类抗生素在临床上的疗效。


技术实现要素：

5.为了解决上述问题，本发明提供4”,11-o-(1,2,3-三氮唑)克拉霉素类衍生物及其
制备方法、应用，在克拉霉素的4
”‑
oh和11-oh位引入1,2,3-三氮唑部分，通过静电、氢键、疏水或π-π堆积作用与细菌核糖体23s rrna结构域ii中的核苷酸残基a752或u790发生结合，重新恢复并加强大环内酯类抗生素与细菌核糖体之间的结合力，制备的4”,11-o-(1,2,3-三氮唑)取代的克拉霉素类衍生物对耐药菌表现出优异的抗菌活性。
6.本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的。
7.本发明提供了4”,11-o-(1,2,3-三氮唑)克拉霉素类衍生物，具有如式i或ⅱ所示的化学结构通式：
[0008][0009]
其中r1为苯基、取代苯基；r2为取代苯基。
[0010]
优选的，当r1为取代苯基时，所述取代苯基含有1或多个取代基时，所述取代基为烷基、苯基、烷氧基、卤素、氰基、甲氧甲酰基或硝基；当r2为取代苯基时，所述取代苯基含有1或多个取代基时，所述取代基为烷基、卤素或烷氧基。
[0011]
优选的，当r1为取代苯基时，这些取代基为c
1-6
烷基、c
1-5
烷氧基、氟、氯、溴、苯基、氰基、甲氧甲酰基或硝基；当r2为取代苯基时，这些取代基为c
2-5
烷基、c
1-3
烷氧基、氟、氯或溴。
[0012]
优选的，所述c
1-6
烷基为甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基或正己基；所述c
1-5
烷氧基为甲氧基、乙氧基、正丙氧基或正戊氧基；所述c
2-5
烷基为乙基、正丙基、叔丁基或正戊基；所述c
1-3
烷氧基为甲氧基或正丙氧基。
[0013]
优选的，当r1为取代苯基时，所述取代苯基为4-正丙基苯基、4-正丁基苯基、4-正戊基苯基、4-正己基苯基、联苯基、4-正戊氧基苯基、4-氯苯基、4-溴苯基或3,5-二(三氟甲基)苯基；
[0014]
当r2为取代苯基时，所述取代苯基为4-正戊基苯基。
[0015]
优选的，所述化合物i是下列之一：
[0016]
[0017]
[0018][0019]
所述化合物ⅱ是下列之一：
[0020][0021]
上述4”,11-o-(1,2,3-三氮唑)克拉霉素类衍生物的制备方法，所述的具有通式i的化合物的制备方法，包括如下步骤：
[0022]
s1、将克拉霉素在碱的催化下，加入脱水剂反应得到中间体2；
[0023]
s2、将中间体2溶于溶剂中，加入乙酸酐或苯甲酸酐反应得到中间体3；
[0024]
s3、将中间体3、n,n'-羰基二咪唑和三乙胺在溶剂中反应得到中间体4；
[0025]
s4、将中间体4和水合肼在溶剂中反应得到中间体5；
[0026]
s5、将中间体5和中间体6溶于溶剂中，在碱存在的条件下，加入缩合剂催化，反应生成中间体7；
[0027]
s6、将中间体7溶于溶剂中反应得到具有通式i的化合物；
[0028]
所述中间体6的化合物的结构为：
[0029][0030]
优选的，s1中，所述碱为三乙胺、二异丙基乙胺、碳酸钠或碳酸钾，优选三乙胺；所述脱水剂为浓硫酸、碳酸乙烯酯、无水硫酸钠、无水硫酸镁、三氯氧磷或n,n'-二环己基碳酰亚胺，优选碳酸乙烯酯；克拉霉素与碳酸乙烯酯的摩尔比为1:5～10，进一步优选1:8.5；反应温度为0～100℃，时间为24～72h，进一步优选90℃下反应48h。
[0031]
优选的，s2中，所述溶剂为丙酮；中间体2与酸酐的摩尔比为1:1.1～3，进一步优选1:2；反应温度为0～60℃，时间为12～36h，进一步优选室温下反应24h。
[0032]
优选的，s3中，所述溶剂为无水甲苯或二氯甲烷，优选无水二氯甲烷；中间体3与n,n
′‑
二羰基咪唑的摩尔比为1:1.5～3，进一步优选1:2；中间体3与三乙胺的摩尔比为1:2～3，进一步优选1:2.3；反应温度为0～40℃，时间为30～60h，进一步优选室温下反应48h。
[0033]
优选的，s4中，所述溶剂为n,n-二甲基甲酰胺；中间体4与水合肼的摩尔比为1:1.5～3，进一步优选1:2；反应温度为10～100℃，时间为0.5～1h，进一步优选室温下反应0.5h。
[0034]
优选的，s5中，所述溶剂为无水二氯甲烷；所述碱为三乙胺、二异丙基乙胺、碳酸钠或碳酸钾，进一步优选二异丙基乙胺；中间体5与二异丙基乙胺的摩尔比为1:10～30，进一步优选1:22.6。
[0035]
优选的，s5中，缩合剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑，n,n'-二环己基碳酰亚胺和1-羟基苯并三唑，或2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯和1-羟基苯并三唑，优选1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑；中间体5与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:2～4，进一步优选1:3.6；中间体5与1-羟基苯并三唑的摩尔比为1:2～4，进一步优选1:3.6；反应温度为0～40℃，时间为15～24h，进一步优选室温下反应18h。
[0036]
优选的，s6中，所述溶剂为甲醇；反应温度为30～65℃，时间为18～36h，进一步优选60℃反应24h。
[0037]
优选的，所述中间体6的制备方法，包括如下步骤：
[0038]
s1、将溴乙酸9和叠氮化钠溶解于水中搅拌反应得到中间体10；
[0039]
s2、将中间体10和苯乙炔或取代苯乙炔类化合物溶于溶剂中，然后加入硫酸铜和l-抗坏血酸钠盐，搅拌反应得到中间体6。
[0040]
优选的，s1中，溴乙酸9与叠氮化钠的摩尔比为1:1～3，进一步优选1:2；反应温度为50～100℃，时间为20～40h，进一步优选80℃反应24h。
[0041]
优选的，s2中，所述溶剂为75％甲醇；中间体10与苯乙炔或取代苯乙炔类化合物的摩尔比为1:1～1.5，进一步优选1:1；反应温度为40～70℃，时间为20～40h，进一步优选60℃反应24h。
[0042]
优选的，所述的具有通式ⅱ的化合物的制备方法，包括如下步骤：
[0043]
s1、将克拉霉素加至水中形成悬浮液，加入稀盐酸反应得到中间体12；
[0044]
s2、将中间体12溶于溶剂中，在三乙胺的催化下，加入苯甲酸酐或乙酸酐，反应生成中间体13；
rrna结构域ii中的核苷酸残基a752或u790发生结合，重新恢复并加强大环内酯类抗生素与细菌核糖体之间的结合力，制备的4”,11-o-(1,2,3-三氮唑)取代的克拉霉素类衍生物对耐药菌表现出优异的抗菌活性，作为活性成分在制备抗菌药物中的应用。
附图说明
[0064]
图1为本发明化合物8f对金黄色葡萄球菌atcc43300的时间-杀菌曲线。
具体实施方式
[0065]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0066]
实施例1
[0067]
(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素2的制备
[0068]
将克拉霉素(30g,40.13mmol)、碳酸乙烯酯(30g,0.34mol)和三乙胺(300ml)置于三口瓶中，加热回流48h。反应液经减压浓缩掉约四分之三的溶剂，接着加入水(30ml)得混悬液，在50℃下搅拌0.5h。混悬液趁热抽滤，以水洗涤滤饼得粗品。粗品经重结晶(乙醇/水＝1:1,v/v)得白色固体15.3g，收率52％。
[0069]
white solid,mp:250
–
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–
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–
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–
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–
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–
1.94(m,6h),1.92
–
1.88(m,2h),1.64
–
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–
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–
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–
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38h68
no
12
[m+h]
+
:730.4742,found:730.4745.
[0070]
实施例2
[0071]
2'-o-乙酰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素3的制备
[0072]
将中间体2(9.6g,13.16mmol)溶解于丙酮(100ml)中，然后加入乙酸酐(2.68g,26.27mmol)，室温下搅拌反应24h。反应液经减压浓缩得残留物，然后将其溶解于饱和碳酸氢钠溶液(100ml)和二氯甲烷(100ml)中。静置分液，水相以二氯甲烷(50ml
×
2)洗涤，合并有机相。有机相经无水硫酸钠干燥，抽滤和减压浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析法(二氯甲烷/甲醇/氨水＝10:1:0.1,v/v/v)纯化得白色泡沫状固体7.8g，收率77％。
[0073]
white foam solid,mp:85
–
88℃.1h nmr(400mhz,cdcl3,δppm):6.53(s,1h),5.00(dd,j＝10.3,2.1hz,1h),4.84
–
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–
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–
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–
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–
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–
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–
2.00(m,10h),1.95
–
1.87(m,3h),1.82
–
1.78(m,1h),1.61
–
1.56(m,1h),1.53
–
1.47(m,1h),1.41(s,3h),1.30
–
1.29(m,3h),1.27
–
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–
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40h70
no
13
[m+h]
+
:772.4847,found:772.4849.
[0074]
实施例3
[0075]
2'-o-乙酰基-4
”‑
o-(1h-咪唑-1-基)羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素4的制备
[0076]
将中间体3(7.6g,9.85mmol)溶解于无水二氯甲烷(100ml)中，然后加入n,n
′‑
羰基二咪唑(3.19g,19.69mmol)和三乙胺(2.29g,22.65mmol)，室温下搅拌反应48h。向反应液中加入水(100ml)，搅拌均匀。静置分液，水相以二氯甲烷(50ml
×
2)洗涤，合并有机相。有机相经无水硫酸钠干燥，抽滤和减压浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析法(二氯甲烷/甲醇＝10:1,v/v)纯化得白色泡沫状固体6.1g，收率72％。
[0077]
实施例4
[0078]
2'-o-乙酰基-4
”‑
o-肼基甲酰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素5的制备
[0079]
将中间体4(3g,3.47mmol)和80％的水合肼(434mg,6.94mmol)溶解于n,n-二甲基甲酰胺(20ml)中，室温下搅拌反应0.5h。反应液经减压浓缩得粗品，再经硅胶柱层析法(二氯甲烷/甲醇/氨水＝10:1:0.1,v/v/v)纯化得白色泡沫状固体1.2g，收率42％。
[0080]
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–
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–
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–
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–
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–
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–
2.74(m,2h),2.58(s,1h),2.43
–
2.39(m,1h),2.29(s,6h),2.02
–
2.00(m,6h),1.93
–
1.87(m,3h),1.75
–
1.72(m,1h),1.67
–
1.62(m,1h),1.54
–
1.48(m,1h),1.40(s,3h),1.38
–
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–
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–
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41h72
n3o
14
[m+h]
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[0081]
实施例5
[0082]4”‑
o-[2-(4-苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素，通式i的化合物8a的制备
[0083]
将中间体5(200mg,0.24mmol)溶于无水二氯甲烷(20ml)中，然后加入中间体6a(147mg,0.72mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(165mg,0.87mmol)、1-羟基苯并三唑(117mg,0.87mmol)和二异丙基乙胺(701mg,5.43mmol)，室温下搅拌反应18h。向反应液中加入水(20ml)，搅拌均匀。静置分液，以水(20ml
×
2)洗涤有机相。有机相经减压浓缩得中间体7a，将其溶于甲醇(30ml)中，于60℃下搅拌反应24h。反应液经减压浓缩得粗品，再经硅胶柱层析法(二氯甲烷/甲醇/氨水＝10:1:0.1,v/v/v)纯化得白色固体35mg，收率15％(以中间体5为起始原料，以两步计)。
[0084]
化合物8b-8w的合成方法同实施例5。
[0085]
通式i的化合物8a-8w的合成路线如下所示：
[0086][0087]4”‑
o-[2-(4-苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8a
[0088]
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–
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–
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–
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–
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–
5.21(m,2h),5.02
–
4.99(m,1h),4.89(s,1h),4.59
–
4.52(m,1h),4.40
–
4.29(m,2h),3.90(s,1h),3.60(s,2h),3.34
–
3.22(m,8h),2.95
–
2.88(m,4h),2.68(s,2h),2.42(s,4h),2.25
–
2.18(m,1h),2.00
–
1.78(m,8h),1.67
–
1.53(m,3h),1.41
–
1.38(m,6h),1.33(s,3h),1.25(s,6h),1.19
–
1.18(m,3h),1.11
–
1.10(m,3h),1.06
–
1.05(m,3h),0.89
–
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49h77
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[m+h]
+
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[0089]4”‑
o-[2-(4-对甲基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8b
[0090]
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–
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–
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–
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–
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–
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–
3.19(m,8h),2.96
–
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–
2.51(m,3h),2.45
–
2.32(m,8h),2.00(s,4h),1.97
–
1.90(m,2h),1.84
–
1.73(m,2h),1.65
–
1.60(m,1h),1.56
–
1.47(m,2h),1.41
–
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[0091]4”‑
o-[2-(4-对乙基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8c
[0092]
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51h81
n6o
14
[m+h]
+
:1001.5811,found:1001.5810.
[0093]4”‑
o-[2-(4-对正丙基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8d
[0094]
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52h83
n6o
14
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+
:1015.5967,found:1015.5966.
[0095]4”‑
o-[2-(4-对正丁基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8e
[0096]
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14
[m+h]
+
:1029.6124,found:1029.6122.
[0097]4”‑
o-[2-(4-对正戊基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8f
[0098]
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14
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[0099]4”‑
o-[2-(4-对正己基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8g
[0100]
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–
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–
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–
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14
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+
:1057.6437,found:1057.6443.
[0101]4”‑
o-[2-(4-联苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8h
[0102]
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–
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–
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–
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n6o
14
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+
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[0103]4”‑
o-[2-(4-对甲氧基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8i
[0104]
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–
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–
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+
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[0105]4”‑
o-[2-(4-对乙氧基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8j
[0106]
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[0107]4”‑
o-[2-(4-对正丙氧基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8k
[0108]
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3.83(m,1h),3.61
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–
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o-[2-(4-对正戊氧基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8l
[0110]
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1.91(m,7h),1.83
–
1.71(m,3h),1.63
–
1.58(m,1h),1.51
–
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o-[2-(4-对氟苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8m
[0112]
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–
1.79(m,1h),1.75
–
1.71(m,1h),1.65
–
1.60(m,1h),1.54
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1.50(m,1h),1.41
–
1.38(m,6h),1.33(s,1h),1.28(s,2h),1.25(s,6h),1.19
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o-[2-(4-对氯苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8n
[0114]
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3.04(m,1h),2.96
–
2.88(m,2h),2.78
–
2.55(m,3h),2.40(s,5h),2.00
–
1.89(m,7h),1.83
–
1.71(m,2h),1.64
–
1.59(m,1h),1.54
–
1.51(m,1h),1.41
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[0115]4”‑
o-[2-(4-对溴苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8o
[0116]
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–
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–
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–
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brn6o
14
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:1051.4603,found:1051.4608.
[0117]4”‑
o-[2-(4-对腈基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8p
[0118]
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–
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–
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–
3.21(m,5h),2.95(s,3h),2.87(s,3h),2.78
–
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–
2.51(m,1h),2.38(s,5h),1.99
–
1.91(m,7h),1.77
–
1.71(m,1h),1.63
–
1.59(m,1h),1.55
–
1.45(m,2h),1.40
–
1.36(m,6h),1.32(s,1h),1.27(s,2h),1.24
–
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n7o
14
[m+h]
+
:998.5450,found:998.5453.
[0119]4”‑
o-[2-(4-对甲氧甲酰基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8q
[0120]
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–
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–
2.60(m,1h),2.52(s,1h),2.44
–
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–
1.91(m,8h),1.73
–
1.69(m,1h),1.64
–
1.60(m,1h),1.54
–
1.49(m,1h),1.41
–
1.37(m,6h),1.33(s,1h),1.28(s,2h),1.25
–
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–
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n6o
16
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+
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[0121]4”‑
o-[2-(4-邻甲氧基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8r
[0122]
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–
4.36(m,2h),3.91
(s,3h),3.62(d,j＝6.3hz,1h),3.56(s,1h),3.35
–
3.18(m,9h),2.95
–
2.88(m,4h),2.56(s,1h),2.41(d,j＝15.0hz,1h),2.29(s,5h),2.03
–
1.91(m,7h),1.68
–
1.59(m,2h),1.55
–
1.47(m,2h),1.40
–
1.37(m,6h),1.25
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n6o
15
[m+h]
+
:1003.5603,found:1003.5599.
[0123]4”‑
o-[2-(4-间甲基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8s
[0124]
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1.89(m,8h),1.79
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–
1.51(m,1h),1.40
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n6o
14
[m+h]
+
:987.5654,found:987.5651.
[0125]4”‑
o-[2-(4-间氟苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8t
[0126]
white solid,mp:182
–
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–
4.30(m,2h),3.93(s,1h),3.61
–
3.57(m,2h),3.33
–
3.22(m,8h),2.96
–
2.88(m,2h),2.63(s,1h),2.50(s,1h),2.34(s,6h),2.00
–
1.89(m,7h),1.86
–
1.81(m,1h),1.75
–
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–
1.60(m,1h),1.54
–
1.50(m,1h),1.41(s,6h),1.33(s,1h),1.28(s,2h),1.25(s,6h),1.19
–
1.18(m,3h),1.12(d,j＝4.7hz,3h),1.08
–
1.06(m,3h),0.89
–
0.88(m,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
49h76
fn6o
14
[m+h]
+
:991.5404,found:991.5403.
[0127]4”‑
o-[2-(4-间硝基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酰肼基]羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8u
[0128]
white solid,mp:176
–
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–
4.31(m,2h),3.91(s,1h),3.62
–
3.56(m,2h),3.31(s,1h),3.24
–
3.22(m,3h),3.20(s,3h),2.95(s,3h),2.87(s,3h),2.70
–
2.61(m,1h),2.45(s,1h),2.40(s,1h),2.33(s,4h),1.99
–
1.91(m,7h),1.72
–
1.67(m,1h),1.63
–
1.58(m,1h),1.55
–
1.45(m,2h),1.40
–
1.36(m,6h),1.32
–
1.27(m,3h),1.24
–
1.21(m,6h),1.18
–
1.16(m,3h),1.10(d,j＝6.3hz,3h),1.06(d,j＝7.4hz,3h),0.88(t,j＝7.2hz,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
49h76
n7o
16
[m+h]
+
:1018.5349,found:1018.5346.
[0129]4”‑
o-{2-[4-(3,5-双三氟甲基苯基)-1h-1,2,3-三氮唑-1-基]乙酰肼基}羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8v
[0130]
white solid,mp:141
–
144℃.1h nmr(400mhz,cdcl3,δppm):8.26
–
8.21(m,3h),
7.80(s,1h),6.59(s,1h),5.27(s,1h),5.00(d,j＝9.4hz,1h),4.93
–
4.88(m,1h),4.55(d,j＝9.7hz,1h),4.39
–
4.28(m,2h),3.91(s,1h),3.62(d,j＝6.9hz,1h),3.55(s,1h),3.32(s,1h),3.24(s,2h),3.21(s,4h),2.96(s,2h),2.88(s,3h),2.61(s,1h),2.45
–
2.33(m,7h),2.04
–
1.92(m,7h),1.73
–
1.68(m,1h),1.64
–
1.59(m,1h),1.55
–
1.47(m,2h),1.40
–
1.37(m,6h),1.32(s,1h),1.28(s,2h),1.25
–
1.22(m,6h),1.17(d,j＝5.6hz,3h),1.11(d,j＝6.3hz,3h),1.08(d,j＝7.4hz,3h),0.89(t,j＝7.1hz,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
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f6n6o
14
[m+h]
+
:1109.5245,found:1109.5243.
[0131]4”‑
o-{2-[4-(3,5-二甲氧基苯基)-1h-1,2,3-三氮唑-1-基]乙酰肼基}羰基-(10e)-10,11-烯-11-脱氧-克拉霉素8w
[0132]
white solid,mp:137
–
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–
4.28(m,2h),3.94
–
3.90(m,1h),3.83(s,6h),3.62(d,j＝7.2hz,1h),3.58
–
3.54(m,1h),3.33
–
3.22(m,8h),2.96
–
2.88(m,4h),2.66
–
2.59(m,1h),2.49(s,1h),2.40(d,j＝15.4hz,1h),2.33(s,4h),2.03
–
1.90(m,7h),1.73
–
1.68(m,1h),1.64
–
1.60(m,1h),1.55
–
1.45(m,2h),1.40
–
1.37(m,6h),1.33
–
1.28(m,2h),1.25
–
1.22(m,6h),1.18
–
1.16(m,4h),1.11(d,j＝6.4hz,3h),1.07(d,j＝7.1hz,3h),0.89(t,j＝7.2hz,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
51h81
n6o
16
[m+h]
+
:1033.5709,found:1033.5712.
[0133]
实施例6
[0134]
2-叠氮基乙酸10的制备
[0135]
将溴乙酸9(30g,0.22mmol)和叠氮化钠(28.28g,0.44mmol)溶解于水(150ml)中，于80℃下搅拌反应24h。以浓盐酸调节反应液的ph约为1，再以二氯甲烷(750ml
×
4)洗涤，合并有机相。有机相经减压浓缩得淡黄色油状物14.1g，收率64％。
[0136]
实施例7
[0137]
2-(4-苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酸6a的的制备
[0138]
将中间体10(0.5g，4.95mmol)和苯乙炔11a(0.51g，5mmol)溶于75％甲醇(20ml)中，然后依次加入硫酸铜(49mg)和l-抗坏血酸钠盐(147mg)，于60℃下搅拌反应24h。以浓盐酸调节反应液的ph约为1，然后经减压浓缩得残留物。向残留物中加入水(60ml)，搅拌均匀得悬浮液。悬浮液经抽滤得淡黄色固体0.75g，收率75％；取少量产物经硅胶柱层析法(二氯甲烷/甲醇＝10:1,v/v)纯化得到纯品，用于结构鉴定。
[0139]
化合物6b-6w的合成方法同实施例7。
[0140]
具体的化合物6a-6w的合成路线如下所示：
[0141][0142]
2-(4-苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)乙酸6a
[0143]
white solid,mp:193
–
196℃.1h nmr(400mhz,dmso-d6,δppm):8.56(s,1h),7.85
(d,j＝7.8hz,2h),7.46(t,j＝7.6hz,2h),7.34(t,j＝7.4hz,1h),5.33(s,2h).
[0144]
实施例8
[0145]
3-o-脱克拉定糖-克拉霉素12的制备
[0146]
将稀盐酸(1m,18ml)逐滴加至含有克拉霉素(3.00g,4.01mmol)的水(50ml)溶液中。反应液在室温下搅拌，直到其完全澄清(约5h)。以氢氧化钠溶液(2m)调节反应液的ph为10。抽滤得滤饼，以冷水洗涤，最后干燥得白色固体1.91g，收率81％。
[0147]
实施例9
[0148]
2'-o-乙酰基-3-o-脱克拉定糖-克拉霉素13的制备
[0149]
将中间体12(1.91g,3.24mmol)溶于无水二氯甲烷(30ml)中，然后在0℃下加入三乙胺(0.82g,8.11mmol)和乙酸酐(0.40g,3.92mmol)。反应液在0℃下搅拌反应24h，然后在室温下搅拌反应12h。将饱和碳酸氢钠溶液(30ml)加至反应液中，然后以二氯甲烷(30ml
×
2)洗涤水相，合并有机相。有机相经饱和氯化钠溶液(90ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤和减压浓缩得白色泡沫状固体1.89g，收率92％。
[0150]
实施例10
[0151]
2'-o-乙酰基-3-o-脱克拉定糖-11,12-环状碳酸酯-克拉霉素14的制备
[0152]
将中间体13(1.89g,2.99mmol)溶于二氯甲烷(20ml)中，然后在0℃下加入吡啶(2.37g,29.98mmol)，溶液在0℃下搅拌20min。将三光气(1.76g,5.99mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液缓慢滴加到上述溶液中。反应液在0℃下搅拌反应4h，然后在室温下搅拌反应16h。将水(40ml)加至反应液中，然后以二氯甲烷(40ml
×
2)洗涤水相，合并有机相。有机相以饱和碳酸氢钠溶液(100ml
×
2)和饱和氯化钠溶液(100ml)洗涤，然后经无水硫酸钠干燥，过滤和减压浓缩得淡黄色泡沫状固体1.91g，收率97％。
[0153]
实施例11
[0154]
2'-o-乙酰基-3-氧代-11,12-环状碳酸酯-克拉霉素15的制备
[0155]
将氯铬酸吡啶盐(1.56g,7.26mmol)、硅藻土(1.56g)和硅胶(1.56g)加至二氯甲烷(25ml)中，室温下将中间体14(1.91g,2.91mmol)的二氯甲烷(25ml)溶液缓慢滴加至上述溶液中。反应液在室温下搅拌反应24h。反应液经过滤，然后以饱和碳酸氢钠溶液(50ml)和饱和氯化钠溶液(50ml)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤和减压浓缩得残留物。残留物经硅胶柱层析法(二氯甲烷/甲醇＝30:1,v/v)纯化得白色泡沫状固体1.62g，收率85％。
[0156]
实施例12
[0157]
2'-o-乙酰基-3-氧代-11-o-(4-羟基丁胺基)羰基-克拉霉素16的制备
[0158]
在15℃下将盐酸吡啶(0.20g)和4-氨基-1-丁醇(10ml)加至中间体15(1.62g,2.47mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中。反应液在15℃下搅拌反应2h。向反应溶液中加入二氯甲烷(20ml)和水(20ml)，然后以二氯甲烷(20ml
×
2)洗涤水相，合并有机相。有机相以饱和氯化铵溶液(60ml)和饱和氯化钠溶液(60ml)洗涤，然后经无水硫酸钠干燥，过滤和减压浓缩得残留物。残留物经硅胶柱层析法(二氯甲烷/甲醇/氨水＝15:1:0.1,v/v/v)纯化得白色泡沫状固体0.66g，收率36％。
[0159]
实施例13
[0160]
2'-o-乙酰基-3-氧代-11-o-(4-甲磺酰氧基丁胺基)羰基-克拉霉素17的制备
[0161]
将中间体16(0.66g,0.89mmol)溶于无水二氯甲烷(20ml)中，在0℃下加入三乙胺
(0.23g,2.27mmol)和甲磺酰氯(0.11g,0.97mmol)。反应液在0℃下搅拌反应1h，然后在室温下搅拌反应1h。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(20ml)，然后以二氯甲烷(20ml
×
2)洗涤水相，合并有机相。有机相经饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤和减压浓缩得残留物。残留物经硅胶柱层析法(二氯甲烷/甲醇＝30:1,v/v)纯化得白色泡沫状固体0.64g，收率88％。
[0162]
实施例14
[0163]
2'-o-乙酰基-3-氧代-11-o-(4-叠氮基丁胺基)羰基-克拉霉素18的制备
[0164]
中间体17(0.64g,0.78mmol)和叠氮化钠(0.25g,3.85mmol)加至n,n-二甲基甲酰胺(12ml)和水(3ml)中。反应液在60℃下搅拌反应12h。向反应溶液中加入乙酸乙酯(30ml)和水(30ml)，并用乙酸乙酯(30ml
×
3)洗涤水相，合并有机相。有机相经无水硫酸钠干燥，过滤和减压浓缩得残留物。残留物经硅胶柱层析法(二氯甲烷/甲醇＝40:1,v/v)纯化得白色泡沫状固体0.43g，收率72％。
[0165]
实施例15
[0166]
3-氧代-11-o-[4-(4-对乙基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)丁胺基]羰基-克拉霉素，通式ⅱ的化合物19a的制备
[0167]
将碘化亚铜(0.25g,1.3mmol)和4-乙基苯乙炔(43mg,0.33mmol)加至中间体18(0.10g,0.13mmol)的甲苯(10ml)溶液中。反应溶液在90℃下搅拌反应24h。将反应溶液冷却至室温，然后过滤以获得滤液，滤液经减压浓缩得粗品。将上述粗品溶于甲醇(20ml)中，反应液在55℃下搅拌反应24h。反应液经减压浓缩得残留物，再经硅胶柱层析法(二氯甲烷/甲醇/氨水＝30:1:0.1,v/v/v)纯化得白色泡沫状固体57mg，收率51％。
[0168]
化合物19b-19l的合成方法同实施例15。
[0169]
通式ⅱ的化合物19a-19l的合成路线如下所示：
[0170][0171]
3-氧代-11-o-[4-(4-对乙基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)丁胺基]羰基-克拉霉素19a
[0172]
white foam solid,mp:123-126℃.1h nmr(600mhz,cdcl3,δppm):7.77(s,1h),7.73(d,j＝8.0hz,2h),7.24(s,2h),4.99(d,j＝10.5hz,1h),4.88
–
4.86(m,1h),4.80
–
4.76(m,1h),4.45(t,j＝7.0hz,2h),4.31(d,j＝7.0hz,1h),4.06(d,j＝10.1hz,1h),3.73
–
3.70(m,1h),3.49(s,2h),3.32
–
3.28(m,2h),3.20
–
3.19(m,1h),2.81(s,3h),2.68
–
2.65(m,2h),2.31(s,6h),2.23
–
2.20(m,1h),2.02
–
1.98(m,3h),1.88
–
1.87(m,1h),1.64
–
1.60(m,4h),1.49(s,3h),1.27
–
1.20(m,24h),0.96(d,j＝7.0hz,3h),0.85(t,j＝7.3hz,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
45h72
n5o
11
[m+h]
+
:858.5228,found:858.5229.
[0173]
3-氧代-11-o-[4-(4-对正丙基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)丁胺基]羰基-克拉霉素19b
[0174]
white solid,mp:119-122℃.1h nmr(600mhz,cdcl3,δppm):7.80
–
7.77(m,1h),7.72(d,j＝8.0hz,2h),7.23(d,j＝8.0hz,2h),5.03
–
4.98(m,1h),4.88
–
4.86(m,1h),4.78
–
4.72(m,1h),4.46(t,j＝7.0hz,2h),4.33
–
4.31(m,1h),4.07
–
4.02(m,1h),3.73
–
3.70(m,1h),3.52
–
3.46(m,2h),3.32
–
3.27(m,2h),3.19(s,1h),2.81(d,j＝3.4hz,3h),2.61(t,j＝7.6hz,2h),2.33(s,6h),2.23
–
2.20(m,1h),2.03
–
1.98(m,3h),1.88
–
1.86(m,1h),1.67
–
1.62(m,6h),1.49(s,3h),1.28
–
1.10(m,21h),0.97
–
0.93(m,6h),0.86
–
0.84(m,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
46h74
n5o
11
[m+h]
+
:872.5385,found:872.5379.
[0175]
3-氧代-11-o-[4-(4-对叔丁基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)丁胺基]羰基-克拉霉素19c
[0176]
white solid,mp:138-141℃.1h nmr(600mhz,cdcl3,δppm):7.77
–
7.74(m,3h),7.44(d,j＝8.3hz,2h),5.00(d,j＝10.8hz,1h),4.86(s,1h),4.76(t,j＝5.5hz,1h),4.45(t,j＝7.0hz,2h),4.31(d,j＝7.3hz,1h),4.06(d,j＝10.3hz,1h),3.73
–
3.70(m,1h),3.51
–
3.47(m,2h),3.31
–
3.29(m,2h),3.19
–
3.18(m,1h),2.80(s,3h),2.28(s,6h),2.03
–
1.98(m,4h),1.91
–
1.85(m,2h),1.68
–
1.65(m,3h),1.49(s,3h),1.34(s,9h),1.26
–
1.21(m,21h),0.96(d,j＝7.0hz,3h),0.85(t,j＝7.3hz,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
47h76
n5o
11
[m+h]
+
:886.5541,found:886.5544.
[0177]
3-氧代-11-o-[4-(4-对正戊基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)丁胺基]羰基-克拉霉素19d
[0178]
white solid,mp:125-128℃.1h nmr(600mhz,cdcl3,δppm):7.76(s,1h),7.72(d,j＝8.1hz,2h),7.23(d,j＝8.0hz,2h),5.00(d,j＝10.6hz,1h),4.86(s,1h),4.77(t,j＝5.6hz,1h),4.45(t,j＝7.0hz,2h),4.31(d,j＝7.5hz,1h),4.06(d,j＝10.3hz,1h),3.73
–
3.70(m,1h),3.51
–
3.48(m,2h),3.32
–
3.28(m,2h),3.19(s,1h),2.81(s,3h),2.63
–
2.61(m,2h),2.28(s,6h),2.03
–
1.99(m,3h),1.90
–
1.86(m,2h),1.64
–
1.62(m,6h),1.49(s,3h),1.34
–
1.32(m,4h),1.28
–
1.21(m,21h),0.96(d,j＝7.0hz,3h),0.90(d,j＝6.8hz,3h),0.85(t,j＝7.3hz,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
48h78
n5o
11
[m+h]
+
:900.5698,found:900.5693.
[0179]
3-氧代-11-o-[4-(4-对甲氧基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)丁胺基]羰基-克拉霉素19e
[0180]
white solid,mp:124-127℃.1h nmr(600mhz,cdcl3,δppm):7.74(d,j＝8.7hz,2h),7.71(s,1h),6.95(d,j＝8.7hz,2h),5.03
–
4.99(m,1h),4.89
–
4.86(m,1h),4.80
–
4.76(m,1h),4.44(t,j＝7.0hz,2h),4.32(t,j＝7.3hz,1h),4.07
–
4.03(m,1h),3.84(s,3h),3.73
–
3.70(m,1h),3.51
–
3.47(m,2h),3.32
–
3.28(m,2h),3.19(s,1h),2.80(s,3h),2.28(s,6h),2.02
–
1.98(m,3h),1.90
–
1.86(m,1h),1.68
–
1.65(m,3h),1.63
–
1.61(m,2h),1.49(s,3h),1.29
–
1.21(m,21h),1.02
–
0.96(m,3h),0.85(t,j＝7.3hz,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
44h70
n5o
12
[m+h]
+
:860.5021,found:860.5020.
[0181]
3-氧代-11-o-[4-(4-对正丙氧基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)丁胺基]羰基-克拉霉素19f
[0182]
white solid,mp:128-131℃.1h nmr(600mhz,cdcl3,δppm):7.73
–
7.72(m,3h),6.94(d,j＝8.7hz,2h),5.03
–
4.98(m,1h),4.88
–
4.86(m,1h),4.79
–
4.73(m,1h),4.45(t,j＝7.0hz,2h),4.32(d,j＝7.0hz,1h),4.06(d,j＝10.0hz,1h),3.95(t,j＝6.6hz,2h),3.73
–
3.70(m,1h),3.52
–
3.46(m,2h),3.33
–
3.26(m,2h),3.23
–
3.18(m,1h),2.81(s,3h),2.35(s,6h),2.23
–
2.20(m,1h),2.04
–
1.98(m,4h),1.85
–
1.79(m,3h),1.63
–
1.60(m,3h),1.49(s,3h),1.32
–
1.14(m,21h),1.05(t,j＝7.4hz,3h),0.96(d,j＝7.0hz,3h),0.85(t,j＝7.4hz,3h).hrms(esi)m/zcalcd for c
46h74
n5o
12
[m+h]
+
:888.5334,found:888.5333.
[0183]
3-氧代-11-o-[4-(4-邻甲氧基苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)丁胺基]羰基-克拉霉素19g
[0184]
white solid,mp:118-121℃.1h nmr(600mhz,cdcl3,δppm):8.32(dd,j＝7.7,1.6hz,1h),8.03(s,1h),7.33
–
7.30(m,1h),7.07(t,j＝7.4hz,1h),6.98(d,j＝8.2hz,1h),
5.00(d,j＝10.7hz,1h),4.87(s,1h),4.79(t,j＝5.9hz,1h),4.45(t,j＝7.0hz,2h),4.31(d,j＝7.2hz,1h),4.06(d,j＝10.3hz,1h),3.94(s,3h),3.74
–
3.71(m,1h),3.52
–
3.46(m,2h),3.33
–
3.28(m,2h),3.19
–
3.16(m,1h),2.80(s,3h),2.46(s,1h),2.27(s,6h),2.04
–
1.97(m,4h),1.90
–
1.88(m,1h),1.67
–
1.62(m,3h),1.49(s,3h),1.29
–
1.20(m,21h),0.97
–
0.96(m,3h),0.85(t,j＝7.3hz,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
44h70
n5o
12
[m+h]
+
:860.5021,found:860.5022.
[0185]
3-氧代-11-o-[4-(4-间氟苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)丁胺基]羰基-克拉霉素19h
[0186]
white solid,mp:121-124℃.1h nmr(600mhz,cdcl3,δppm):7.87(d,j＝9.1hz,1h),7.60(d,j＝7.8hz,1h),7.56
–
7.54(m,1h),7.40
–
7.37(m,1h),7.04
–
7.00(m,1h),5.03
–
4.98(m,1h),4.88
–
4.86(m,1h),4.78
–
4.74(m,1h),4.49
–
4.46(m,2h),4.34
–
4.32(m,1h),4.07
–
4.03(m,1h),3.72
–
3.69(m,1h),3.53
–
3.46(m,2h),3.33
–
3.27(m,2h),3.19(s,1h),2.81(d,j＝3.1hz,3h),2.35
–
2.33(m,6h),2.22
–
2.19(m,1h),2.04
–
1.97(m,4h),1.88
–
1.86(m,1h),1.64
–
1.61(m,3h),1.49(s,3h),1.29
–
1.20(m,21h),1.01
–
0.95(m,3h),0.85(t,j＝7.4hz,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
43h67
fn5o
11
[m+h]
+
:848.4821,found:848.4828.
[0187]
3-氧代-11-o-[4-(4-邻氯苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)丁胺基]羰基-克拉霉素19i
[0188]
white solid,mp:129-132℃.1h nmr(600mhz,cdcl3,δppm):8.23
–
8.21(m,2h),7.45(dd,j＝8.0,1.0hz,1h),7.38
–
7.36(m,1h),7.28(dd,j＝7.7,1.4hz,1h),4.99(d,j＝10.5hz,1h),4.88
–
4.87(m,1h),4.74(s,1h),4.49(t,j＝6.9hz,2h),4.33
–
4.32(m,1h),4.06(d,j＝10.0hz,1h),3.74
–
3.70(m,1h),3.52
–
3.47(m,2h),3.33
–
3.31(m,2h),3.22
–
3.19(m,1h),2.81(s,3h),2.33(s,6h),2.22(d,j＝7.5hz,1h),2.06
–
2.01(m,3h),1.88
–
1.86(m,1h),1.63
–
1.60(m,4h),1.49(s,3h),1.31
–
1.20(m,21h),0.96(d,j＝6.8hz,3h),0.85(t,j＝7.3hz,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
43h67
cln5o
11
[m+h]
+
:864.4526,found:864.4520.
[0189]
3-氧代-11-o-[4-(4-间氯苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)丁胺基]羰基-克拉霉素19j
[0190]
white solid,mp:131-134℃.1h nmr(600mhz,cdcl3,δppm):7.88(s,1h),7.81(s,1h),7.73(d,j＝7.7hz,1h),7.35(t,j＝7.8hz,1h),7.31
–
7.29(m,1h),4.99(d,j＝10.3hz,1h),4.86(s,1h),4.75
–
4.74(m,1h),4.48(t,j＝6.9hz,2h),4.32(d,j＝7.1hz,1h),4.06(d,j＝10.2hz,1h),3.72
–
3.69(m,1h),3.53
–
3.45(m,2h),3.34
–
3.27(m,2h),3.23
–
3.18(m,1h),2.80(s,3h),2.35(s,6h),2.22
–
2.19(m,1h),2.04
–
1.97(m,4h),1.88
–
1.87(m,1h),1.63
–
1.58(m,3h),1.49(s,3h),1.29
–
1.20(m,21h),0.96(d,j＝6.9hz,3h),0.85(t,j＝7.3hz,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
43h67
cln5o
11
[m+h]
+
:864.4526,found:864.4522.
[0191]
3-氧代-11-o-[4-(4-间溴苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)丁胺基]羰基-克拉霉素19k
[0192]
white solid,mp:121-124℃.1h nmr(600mhz,cdcl3,δppm):7.97(s,1h),7.86
–
7.85(m,1h),7.78(d,j＝7.8hz,1h),7.46
–
7.44(m,1h),7.29(t,j＝7.9hz,1h),5.00(d,j＝10.7hz,1h),4.89
–
4.86(m,1h),4.79
–
4.75(m,1h),4.47(t,j＝7.0hz,2h),4.32(d,j＝
6.8hz,1h),4.06(d,j＝10.3hz,1h),3.72
–
3.69(m,1h),3.52
–
3.47(m,2h),3.33
–
3.29(m,2h),3.19(s,1h),2.80(s,3h),2.31(s,6h),2.23
–
2.19(m,1h),2.04
–
1.99(m,4h),1.90
–
1.87(m,1h),1.64
–
1.60(m,3h),1.49(s,3h),1.28
–
1.21(m,21h),0.96(d,j＝7.0hz,3h),0.85(t,j＝7.3hz,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
43h67
brn5o
11
[m+h]
+
:908.4020,found:908.4027.
[0193]
3-氧代-11-o-[4-(4-对溴苯基-1h-1,2,3-三氮唑-1-基)丁胺基]羰基-克拉霉素(19l)
[0194]
white solid,mp:138-141℃.1h nmr(600mhz,cdcl3,δppm):7.86
–
7.85(m,1h),7.70(d,j＝8.4hz,2h),7.54(d,j＝8.5hz,2h),4.99(d,j＝10.3hz,1h),4.86(s,1h),4.77
–
4.74(m,1h),4.50
–
4.46(m,2h),4.33(d,j＝7.0hz,1h),4.06(d,j＝9.9hz,1h),3.73
–
3.70(m,1h),3.53
–
3.45(m,2h),3.34
–
3.28(m,2h),3.19(s,1h),2.81(s,3h),2.38(s,6h),2.23
–
2.19(m,1h),2.04
–
1.96(m,4h),1.88
–
1.86(m,1h),1.63
–
1.61(m,3h),1.49(s,3h),1.30
–
1.18(m,21h),0.96(d,j＝6.9hz,3h),0.85(t,j＝7.5hz,3h).hrms(esi)m/z calcd for c
43h67
brn5o
11
[m+h]
+
:908.4020,found:908.4025.
[0195]
体外抗菌活性
[0196]
为了确定目标化合物的潜在抗菌活性，测定具有化合物8a-8w和化合物19a-19l对多种细菌的体外抗菌活性，同时以克拉霉素(cam)和阿奇霉素(azm)为阳性对照药。试验中包括各种敏感菌(金黄色葡萄球菌atcc25923、表皮葡萄球菌atcc12228、粪肠球菌atcc29212、枯草芽孢杆菌atcc9372和鲍曼不动杆菌atcc19606)和耐药菌(金黄色葡萄球菌atcc43300和金黄色葡萄球菌pr)。抗菌活性的结果以最小抑菌浓度(mic)表示，并采用肉汤微量稀释法测定目标化合物的mic值。
[0197]
采用肉汤微量稀释法测定目标化合物的mic值。首先将目标化合物和阳性对照药(azm和cam)添加到96孔板中，使用二倍肉汤稀释法，调节它们在阳离子调节mueller-hinton(camh)肉汤中的浓度范围为0.25至128μg/ml或0.5至256μg/ml。将细菌复苏并传代培养以制备细菌溶液，将其添加到上述每个孔中，然后在37℃下培养24h。通过观察每一个目标化合物的所有孔的浊度，所有澄清孔对应的最低浓度即确定为此目标化合物的mic值。
[0198]
将上述目标化合物的每个澄清孔中的20μl液体取出，均匀的涂布在大豆酪蛋白琼脂培养基(tsa)平板上，然后在37℃下培养24h。观察每一个目标化合物在tsa平板上的菌落形成情况，没有菌落生长所对应的最低浓度即确定为此目标化合物的最小杀菌浓度(mbc)值。
[0199]
表1.通式ⅰ的化合物8a-8w的体外抗菌活性
[0200][0201][0202]
从表1的结果可以看出，其中化合物8e、8f、8g、8h、8l、8m、8n、8o和8v对粪肠球菌atcc29212的抑制作用与azm相当。化合物8c、8d、8n和8o对鲍曼不动杆菌atcc19606的抗菌活性比azm和cam提高了2倍。化合物8e、8f、8h、8l和8v对金黄色葡萄球菌atcc43300和金黄色葡萄球菌pr表现出优异的抗菌活性，它们的活性比azm和cam提高了64-128倍。化合物8d、8g、8n和8o对金黄色葡萄球菌atcc43300和金黄色葡萄球菌pr表现优良的抗菌活性，它们的活性比azm和cam提高了16-32倍。
[0203]
表2.通式ii的化合物19a-19l的体外抗菌活性
[0204][0205][0206]
从表2的结果可以看出，化合物19d对粪肠球菌atcc29212具有强烈的抑制作用，其抑制作用与azm相当。化合物19d对金黄色葡萄球菌atcc43300和金黄色葡萄球菌pr表现出最有效的抗菌活性，其抗菌活性比azm和cam提高了8倍。
[0207]
表3.目标化合物的mbc测定结果及与mic的比较
[0208][0209]
从表3的结果可以看出，这些结果表明化合物8c、8f、8h、8l、8n和8v通过抑制细菌
增殖对金黄色葡萄球菌atcc25923表现出抗菌活性，而化合物8e和19d则通过它们自身的杀菌作用对金黄色葡萄球菌atcc25923表现出抗菌活性。化合物8e、8f、8h、8l和8v对金黄色葡萄球菌atcc43300是通过抑菌机制发挥抗菌活性，而化合物19d对金黄色葡萄球菌atcc43300则是通过杀菌机制发挥抗菌活性。
[0210]
杀菌动力学研究
[0211]
待测细菌经复苏和传代培养，然后再以camh肉汤为溶剂配制得到菌落密度为106cfu/ml的细菌溶液。以上述细菌溶液为溶剂，配制出一系列具有不同浓度(1
×
mic、2
×
mic、4
×
mic和8
×
mic)的待测目标化合物溶液。将这些目标化合物溶液在37℃培养，在0、3、6、9、12和24h分别取样，样品以camh肉汤为溶剂，采用10倍肉汤稀释法得到10个浓度梯度的测试溶液。将上述测试溶液均匀的涂布在tsa平板上，在37℃下培养24h。最后观察和计数菌落形成单位，记录数据并绘制时间-杀菌曲线以完成杀菌动力学研究。
[0212]
图1为化合物8f对金黄色葡萄球菌atcc43300的时间-杀菌曲线，从图1可以看出，当化合物8f的浓度为0时，细菌的增殖和生长现象非常明显，表明它对细菌既无杀菌作用，也无抑菌作用。当化合物8f的浓度为1和2mic(mic＝4μg/ml)时，它在0-6h内表现出一定程度的杀菌活性，但在6-24h内表现出优异的抑菌活性。当化合物8f的浓度为4和8mic时，它们分别在0-9h和0-6h内表现出显著的杀菌效果，表明它对金黄色葡萄球菌atcc43300具有快速、强力和稳定的杀菌作用。上述结果说明化合物8f对金黄色葡萄球菌atcc43300具有剂量和时间依赖性的生长抑制作用。
[0213]
需要说明的是，本发明中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，由于采用的步骤方法与实施例相同，为了防止赘述，本发明描述了优选的实施例。尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
[0214]
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。