预测细胞因子释放综合征的生物标志物的制作方法

本发明涉及预测细胞因子释放综合征的生物标志物及其用途。

背景技术：

1、具有抗cd19特异性的car t细胞已经表现出针对高度难治性血液恶性肿瘤的可观前景。报道了在用ctl019治疗的复发/难治性all儿童中具有完全缓解率高达90％的显著临床反应。体内标记car t细胞增殖(100至100,000x)导致改善的功效，但可能与不良事件(包括细胞因子释放综合征(crs))相关联。crs是基于免疫细胞的疗法(例如car t细胞治疗)的严重且常见的不良副作用。严重的crs是潜在的危及生命的毒性。

2、因此，需要开发用于预测患者发展crs的风险的方法和生物标志物。

技术实现思路

1、本文的公开内容至少部分基于以下发现：在基于免疫细胞的疗法(例如car t细胞治疗)期间，若干生物标志物可以早期准确预测crs(例如，在受试者患crs变得危重病之前，例如在car t细胞施用的第一个10、9、8、7、6、5、4、3、2或1天或更少的范围内)。在一些实施方案中，两种细胞因子sgp130和ifnγ与严重crs的发展密切相关。在成人和儿科受试者的实施方案中，可以使用ifn，sgp130和il-1ra进行严重crs的准确早期预测。在儿科患者的实施方案中，可以使用ifnγ，il13和mip1α或使用sgp130，ifnγ和疾病负担评估进行严重crs的准确早期预测。因此，本文提供了用于评估受试者，例如预测受试者发展crs(例如，严重crs)的风险的方法，系统和试剂盒，以及治疗患有癌症的受试者的方法，包括评估受试者发展crs(例如严重crs)的风险。本文描述的方法有利地提供了用免疫细胞(例如t细胞或nk细胞)疗法(例如car t细胞)治疗的受试者具有很高的可能性从严重crs变为危重病的早期且准确识别(例如，预测)。由于可以在受试者生病之前进行预测，因此本文的方法允许可以降低发病率或死亡率的早期干预。因此，本文描述的使用少量细胞因子和细胞因子受体以高敏感性和特异性预测crs严重性的方法，系统和试剂盒在临床上是有用的，并且优于目前的治疗方式。

2、因此，一方面，本发明的特征在于评估，例如预测受试者发展crs(例如严重crs)的风险的方法。该方法包括例如响应基于免疫细胞的疗法(例如，car表达细胞疗法(例如car19表达细胞疗法)或cd19消耗疗法)获得受试者的crs风险状态，其中crs风险状态指示受试者发展crs(例如严重crs)的风险。在一些实施方案中，crs风险状态包括下述中的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十或更多(全部)量度：

3、(i)在受试者，例如在样品(例如血液样品)中，可溶性gp130(sgp130)或干扰素-γ(ifn-g)或其组合的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

4、(ii)在受试者，例如在样品(例如血液样品)中，sgp130，ifn-γ或il1ra或其组合(例如，sgp130，ifn-γ和il1ra中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

5、(iii)在样品(例如血液样品)中sgp130或ifn-γ或其组合的水平或活性，和受试者中骨髓疾病的水平，例如其中受试者是儿科受试者；

6、(iv)在样品(例如血液样品)中sgp130，ifn-γ或mip1-α或其组合(例如，sgp130，ifn-γ和mip1-α中任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

7、(v)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中sgp130，mcp1或嗜酸细胞活化趋化因子或其组合(例如，sgp130，mcp1或嗜酸细胞活化趋化因子中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

8、(vi)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，il-2，嗜酸细胞活化趋化因子或sgp130或其组合(例如，il-2，嗜酸细胞活化趋化因子或sgp130中的任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

9、(vii)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，ifn-γ，il2或嗜酸细胞活化趋化因子或其组合(例如，ifn-γ，il2或嗜酸细胞活化趋化因子中的任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

10、(viii)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，il10的水平或活性和在受试者中的疾病负担水平或其组合，例如其中受试者是儿科受试者；

11、(ix)在受试者中ifn-γ或il-13或其组合的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

12、(x)在样品(例如，血液样品)中ifn-γ，il-13或mip1-α或其组合(例如ifn-γ，il-13和mip1-α中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；或

13、(xi)在样品(例如，血液样品)中ifn-γ或mip1-α或其组合的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者。

14、另一方面，本发明的特征在于在治疗过程(例如，基于免疫细胞的疗法(例如，car表达细胞疗法(例如，car19表达细胞疗法)或cd19消耗疗法)期间，监控受试者发展crs(例如严重crs)的风险的方法。该方法包括例如响应于疗法(例如基于免疫细胞的疗法)获得受试者的crs风险状态，其中crs风险状态指示受试者在疗法期间发展crs(例如严重crs)的风险。在一些实施方案中，crs风险状态包括下述中的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十或更多(全部)量度：

15、(i)在受试者，例如在样品(例如血液样品)中，可溶性gp130(sgp130)或干扰素-γ(ifn-g)或其组合的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

16、(ii)在受试者，例如在样品(例如血液样品)中，sgp130，ifn-γ或il1ra或其组合(例如，sgp130，ifn-γ和il1ra中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

17、(iii)在样品(例如血液样品)中sgp130或ifn-γ或其组合的水平或活性，和受试者中骨髓疾病的水平，例如其中受试者是儿科受试者；或

18、(iv)在样品(例如血液样品)中sgp130，ifn-γ或mip1-α或其组合(例如，sgp130，ifn-γ和mip1-α中任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

19、(v)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中sgp130，mcp1或嗜酸细胞活化趋化因子或其组合(例如，sgp130，mcp1或嗜酸细胞活化趋化因子中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

20、(vi)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，il2，嗜酸细胞活化趋化因子或sgp130或其组合(例如，il2，嗜酸细胞活化趋化因子或sgp130中的任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

21、(vii)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，ifn-γ，il2或嗜酸细胞活化趋化因子或其组合(例如，ifn-γ，il2或嗜酸细胞活化趋化因子中的任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

22、(viii)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，il10的水平或活性和在受试者中的疾病负担水平或其组合，例如其中受试者是儿科受试者；

23、(ix)在受试者中ifn-γ或il-13或其组合的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

24、(x)在样品(例如，血液样品)中ifn-γ，il-13或mip1-α或其组合(例如ifn-γ，il-13和mip1-α中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；或

25、(xi)在样品(例如，血液样品)中ifn-γ或mip1-α或其组合的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者。

26、又一方面，本发明的特征在于用于治疗患有癌症例如血液癌症的受试者的方法。该方法包括：

27、向受试者施用治疗有效剂量的car表达细胞疗法，例如car19疗法；和

28、获取受试者的crs风险状态，其中所述crs风险状态包括以下中的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十或更多(全部)量度：

29、(i)在受试者，例如在样品(例如血液样品)中，sgp130或ifn-γ或其组合的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

30、(ii)在受试者，例如样品(例如血液样品)中，sgp130，ifn-γ或il1ra或其组合(例如，sgp130，ifn-γ和il1ra中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

31、(iii)在受试者中，例如在样品(例如血液样品)中sgp130或ifn-γ或其组合的水平或活性，和受试者中骨髓疾病的水平，例如其中受试者是儿科受试者；

32、(iv)在受试者中，例如在样品(例如血液样品)中sgp130，ifn-γ或mip1-α或其组合(例如，sgp130，ifn-γ和mip1-α中任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

33、(v)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中sgp130，mcp1或嗜酸细胞活化趋化因子或其组合(例如，sgp130，mcp1或嗜酸细胞活化趋化因子中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

34、(vi)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，il-2，嗜酸细胞活化趋化因子或sgp130或其组合(例如，il-2，嗜酸细胞活化趋化因子或sgp130中的任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

35、(vii)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，ifn-γ，il-2或嗜酸细胞活化趋化因子或其组合(例如，ifn-γ，il-2或嗜酸细胞活化趋化因子中的任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

36、(viii)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，il-10的水平或活性和在受试者中的疾病负担水平或其组合，例如其中受试者是儿科受试者；

37、(ix)在受试者中ifn-γ或il-13或其组合的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；或

38、(x)在样品(例如，血液样品)中ifn-γ，il-13或mip1-α或其组合(例如ifn-γ，il-13和mip1-α中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；或

39、(xi)在样品(例如，血液样品)中ifn-γ或mip1-α或其组合的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

40、其中crs风险状态指示受试者发展crs(例如严重crs)的风险。

41、在又一个方面，本发明的特征在于car表达细胞疗法，例如car19疗法，用于患有癌症例如血液癌症的受试者的用途，其中所述受试者被鉴定为具有指示所述受试者发展crs如严重crs的风险的crs风险状态，其中所述crs风险状态包括以下中的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十或更多(全部)量度：

42、(i)在受试者，例如在样品(例如血液样品)中，sgp130或ifn-γ或其组合的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

43、(ii)在受试者，例如样品(例如血液样品)中，sgp130，ifn-γ或il1ra或其组合(例如，sgp130，ifn-γ和il1ra中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

44、(iii)在受试者中，例如在样品(例如血液样品)中sgp130或ifn-γ或其组合的水平或活性，和受试者中骨髓疾病的水平，例如其中受试者是儿科受试者；

45、(iv)在受试者中，例如在样品(例如血液样品)中sgp130，ifn-γ或mip1-α或其组合(例如，sgp130，ifn-γ和mip1-α中任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

46、(v)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中sgp130，mcp1或嗜酸细胞活化趋化因子或其组合(例如，sgp130，mcp1或嗜酸细胞活化趋化因子中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

47、(vi)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，il2，嗜酸细胞活化趋化因子或sgp130或其组合(例如，il2，嗜酸细胞活化趋化因子或sgp130中的任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

48、(vii)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，ifn-γ，il2或嗜酸细胞活化趋化因子或其组合(例如，ifn-γ，il2或嗜酸细胞活化趋化因子中的任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

49、(viii)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，il10的水平或活性和在受试者中的疾病负担水平或其组合，例如其中受试者是儿科受试者；

50、(ix)在受试者中ifn-γ或il-13或其组合的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

51、(x)在样品(例如，血液样品)中ifn-γ，il-13或mip1-α或其组合(例如ifn-γ，il-13和mip1-α中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；或

52、(xi)在样品(例如，血液样品)中ifn-γ或mip1-α或其组合的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者。

53、在又一方面，本发明的特征在于用于评估(例如预测)受试者发展crs(例如，严重crs)的风险的系统或方法。该系统包括可操作地连接至内存(memory)的至少一个处理器，其中该至少一个处理器在执行时被配置为获取受试者的crs风险状态，例如响应于基于免疫细胞的疗法(例如car表达细胞疗法(例如car19表达细胞疗法))，其中所述crs风险状态包括以下(i)-(vii)。该方法包括：

54、例如响应基于免疫细胞的疗法(例如，car表达细胞疗法(例如，car19表达细胞疗法))获取受试者的crs风险状态，其中所述crs风险状态由以下确定：

55、(i)获取sgp130水平或活性；

56、(ii)如果获取的sgp130水平或活性低于例如约218,000pg/ml的参照sgp130水平或活性，则将crs风险状态鉴定为低；

57、(iii)任选地(例如，如果获取的sgp130水平或活性高于参照sgp130水平或活性)，获取ifn-γ水平或活性；

58、(iv)任选地(例如，如果获取的sgp130水平或活性高于参照sgp130水平或活性)如果获取的ifn-γ水平或活性低于例如约10pg/ml的参照ifn-γ水平或活性，则将crs风险状态鉴定为低；

59、(v)任选地(例如，如果获取的ifn-γ水平或活性高于参照ifn-γ水平或活性)获取il1ra水平或活性；

60、(vi)任选地，(例如，如果获取的ifn-γ水平或活性高于参照ifn-γ水平或活性)如果获取的il1ra水平或活性低于例如约658pg/ml的参照il1ra水平或活性，则将crs风险状态鉴定为高；和

61、(vii)任选地，(例如，如果获取的ifn-γ水平或活性高于参照ifn-γ水平或活性)如果获取的il1ra水平或活性高于例如约658pg/ml的参照il1ra水平或活性，则将crs风险状态鉴定为低；

62、从而评估，例如预测受试者发展crs(例如严重crs)的风险。

63、在又一方面，本发明的特征在于用于评估(例如预测)受试者发展crs(例如，严重crs)的风险的系统或方法。该系统包括可操作地连接至内存(memory)的至少一个处理器，其中该至少一个处理器在执行时被配置为获取受试者的crs风险状态，例如响应于基于免疫细胞的疗法(例如car表达细胞疗法(例如car19表达细胞疗法))，其中所述crs风险状态包括以下(i)-(vii)。该方法包括：

64、例如响应基于免疫细胞的疗法(例如，car表达细胞疗法(例如，car19表达细胞疗法))获取受试者的crs风险状态，其中所述crs风险状态由以下确定：

65、(i)获取sgp130水平或活性；

66、(ii)如果获取的sgp130水平或活性低于例如约218,000pg/ml的参照sgp130水平或活性，则将crs风险状态鉴定为低；

67、(iii)任选地(例如，如果获取的sgp130水平或活性高于参照sgp130水平或活性)，获取mcp1水平或活性；

68、(iv)任选地(例如，如果获取的sgp130水平或活性高于参照sgp130水平或活性)如果获取的mcp1水平或活性高于例如约4600pg/ml的参照mcp1水平或活性，则将crs风险状态鉴定为高；

69、(v)任选地(例如，如果获取的mcp1水平或活性低于参照mcp1水平或活性)获取嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性；

70、(vi)任选地，(例如，如果获取的mcp1水平或活性低于参照mcp1水平或活性)如果获取的嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性低于例如约29pg/ml的参照嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性，则将crs风险状态鉴定为高；和

71、(vii)任选地，(例如，如果获取的mcp1水平或活性低于参照mcp1水平或活性)如果获取的嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性高于例如约29pg/ml的参照嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性，则将crs风险状态鉴定为低；

72、从而评估，例如预测受试者发展crs(例如严重crs)的风险。

73、在又一方面，本发明的特征在于用于评估(例如预测)受试者发展crs(例如，严重crs)的风险的系统或方法。该系统包括可操作地连接至内存(memory)的至少一个处理器，其中该至少一个处理器在执行时被配置为获取受试者的crs风险状态，例如响应于基于免疫细胞的疗法(例如car表达细胞疗法(例如car19表达细胞疗法))，其中所述crs风险状态包括以下(i)-(vii)。该方法包括：

74、例如响应基于免疫细胞的疗法(例如，car表达细胞疗法(例如，car19表达细胞疗法))获取受试者的crs风险状态，其中所述crs风险状态由以下确定：

75、(i)获取第一ifn-γ水平或活性；

76、(ii)如果第一获取的ifn-γ水平或活性低于例如约28pg/ml的第一参照ifn-γ水平或活性，则将crs风险状态鉴定为低；

77、(iii)任选地(例如，如果第一获取的ifn-γ水平或活性高于第一参照ifn-γ水平或活性)获取mip1a水平或活性；

78、(iv)任选地(例如，如果第一获取的ifn-γ水平或活性高于第一参照ifn-γ水平或活性)，如果获取的mip1a水平或活性低于例如约30pg/ml的参照mip1a水平或活性，则将crs风险状态鉴定为高；

79、(v)任选地(例如，如果获取的mip1a水平或活性高于参照mip1a水平或活性，或者如果步骤(i)在高值下不产生准确读数)获取第二ifn-γ水平或活性；

80、(vi)任选地(例如如果获取的mip1a水平或活性高于参照mip1a水平或活性)，如果第一获取的ifn-γ水平或活性低于参照ifn-γ水平或活性，或任选地如果第二获取的ifn-γ水平或活性低于例如约95pg/ml的参照ifn-γ水平或活性，则将crs风险状态鉴定为低；和

81、(vii)任选地(例如如果获取的mip1a水平或活性高于参照mip1a水平或活性)，如果第一获取的ifn-γ水平或活性高于参照ifn-γ水平或活性，或任选地，如果第二获取的ifn-γ水平或活性高于例如约95pg/ml的参照ifn-γ水平或活性，则将crs风险状态鉴定为高；

82、从而评估，例如预测受试者发展crs(例如严重crs)的风险。

83、在又一方面，本发明的特征在于用于评估(例如预测)受试者发展crs(例如，严重crs)的风险的系统或方法。该系统包括可操作地连接至内存(memory)的至少一个处理器，其中该至少一个处理器在执行时被配置为获取受试者的crs风险状态，例如响应于基于免疫细胞的疗法(例如car表达细胞疗法(例如car19表达细胞疗法))，其中所述crs风险状态包括以下(i)-(vii)。该方法包括：

84、例如响应基于免疫细胞的疗法(例如，car表达细胞疗法(例如，car19表达细胞疗法))获取受试者的crs风险状态，其中所述crs风险状态由以下确定：

85、(i)获取第一生物标志物(例如细胞因子或细胞因子受体，例如本文所述的细胞因子或细胞因子受体)水平或活性；

86、(ii)确定第一生物标志物水平或活性是高于还是低于第一参照水平或活性，

87、(iii)任选地获取第二生物标志物(例如细胞因子或细胞因子受体，例如本文所述的细胞因子或细胞因子受体)水平或活性；

88、(iv)任选地确定第二生物标志物水平或活性是高于还是低于第二参照水平或活性，

89、(v)任选地获取第三生物标志物(例如细胞因子或细胞因子受体，例如本文所述的细胞因子或细胞因子受体)水平或活性；和

90、(vi)任选地确定第三生物标志物水平或活性是高于还是低于第三参照水平或活性，

91、从而评估，例如预测受试者发展crs(例如严重crs)的风险。

92、在又一方面，本发明的特征在于用于评估(例如预测)受试者发展crs(例如，严重crs)的风险的系统或方法。该系统包括可操作地连接至内存(memory)的至少一个处理器，其中该至少一个处理器在执行时被配置为获取受试者的crs风险状态，例如响应于基于免疫细胞的疗法(例如car表达细胞疗法(例如car19表达细胞疗法))，其中所述crs风险状态包括以下(i)-(vii)。该方法包括：

93、例如响应基于免疫细胞的疗法(例如，car表达细胞疗法(例如，car19表达细胞疗法))获取受试者的crs风险状态，其中所述crs风险状态由以下确定：

94、(i)获取il-10水平或活性；

95、(ii)如果获取的il-10水平或活性低于例如约12pg/ml的参照il-10水平或活性，则将crs风险状态鉴定为低；

96、(iii)任选地(例如，如果获取的il-10水平或活性高于参照ifn-il-10水平或活性)获取肿瘤负担水平；

97、(iv)任选地(例如，如果获取的il-10水平或活性高于参照il-10水平或活性)如果获取的肿瘤负担水平低于例如约51％的参照肿瘤负担水平，则将crs风险状态鉴定为低；

98、(v)任选地(例如，如果获取的il-10水平或活性高于参照il-10水平或活性)如果获取的肿瘤负担水平高于例如约51％的参照肿瘤负担水平，则将crs风险状态鉴定为高；

99、从而评估，例如预测受试者发展crs(例如严重crs)的风险。

100、任何上述方法可以进一步包括，响应于crs风险状态的确定，执行以下中的一个，两个或更多个(全部)：

101、将受试者鉴定为处于发展严重crs的高风险或处于发展严重crs的低风险；

102、施用改变剂量的car表达细胞疗法；

103、改变car表达细胞疗法的方案或时程；或

104、施用疗法以治疗crs，例如选自以下一种或多种的疗法：il-6抑制剂(例如抗il-6受体抑制剂，例如托珠单抗)，血管活性药物，免疫抑制剂，皮质类固醇或机械通气；或

105、例如，对于处于发展严重crs的高风险的受试者，施用替代疗法，例如特定癌症类型的标准护理。

106、在用于本文的用途的组合物实施方案中，一、二或更多(例如全部)：

107、响应于crs风险状态的确定，将受试者鉴定为处于发展严重crs的高风险或处于发展严重crs的低风险中；

108、响应于crs风险状态的确定，向受试者施用改变剂量的car表达细胞疗法；

109、响应于crs风险状态的确定，改变car表达细胞疗法的方案或时程；

110、响应于crs风险状态的确定，向受试者施用疗法以治疗crs，例如选自以下一种或多种的疗法：il-6抑制剂(例如托珠单抗)，血管活性药物，免疫抑制剂，皮质类固醇或机械通气；或

111、响应于crs风险状态的确定，向受试者施用替代疗法，例如，用于具有发展严重crs的高风险的受试者，例如特定癌症类型的标准护理。

112、另一方面，本发明的特征在于用于评估(例如预测)受试者发展crs(例如严重crs)的风险的试剂盒。试剂盒包括一组试剂，其特异性检测本文所述的一种或多种基因或蛋白质的水平或活性，例如选自：sgp130和ifn-γ；sgp130，ifn-γ和il1ra；sgp130，ifn-γ和mip1-α；sgp130，ifn-γ，mip1-α，嗜酸细胞活化趋化因子，il-2，il-10或il-13或其组合；和使用所述试剂盒的说明书；

113、其中所述使用说明书规定，如果所检测的水平或活性中的一个或多个大于参照值，则受试者比具有在参照值处检测的水平或活性的受试者更可能发展crs(例如，严重crs)。

114、在又一方面，本发明的特征在于用于评估(例如预测)受试者发展细胞因子释放综合征(crs)，例如严重crs的风险的系统。该系统包括可操作地连接至内存(memory)的至少一个处理器，其中该至少一个处理器在执行时被配置为获取受试者的crs风险状态，例如响应于基于免疫细胞的疗法(例如car表达细胞疗法(例如，car19表达细胞疗法))。在一些实施方案中，所述crs风险状态包括本文所述的一、二、三、四、五、六、七或更多种(全部)生物标志物的量度。

115、在一些实施例中，响应于crs风险状态的确定，系统执行以下中的一、二、三、四或更多个：

116、鉴定受试者处于发展严重crs的高风险或发展严重crs的低风险；

117、推荐选择或改变car表达细胞疗法的剂量(dosing)；

118、推荐选择或改变car表达细胞疗法的方案或时程；

119、推荐施用疗法以治疗crs，例如il-6抑制剂，如托珠单抗，血管活性药物，免疫抑制剂，皮质类固醇或机械通气；

120、推荐选择替代疗法，例如，用于严重crs受试者，例如特定癌症类型的标准护理。

121、本文公开的前述方法的附加特征或实施方案，用于用途的组合物，试剂盒和系统包括以下中的一个或多个。

122、在方法，组合物用途，试剂盒和系统的一些实施方案中，crs风险状态包括在受试者中(例如在样品(例如血液样品)中sgp130，ifn-γ或il-13或其组合(例如sgp130，ifn-γ和il-13的任何两种或全部三种的组合)的水平或活性的量度，例如其中受试者是成人或儿科受试者。

123、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，crs风险状态指示受试者是处于发展严重crs的高风险还是低风险。例如，crs可以是临床1-3级的crs，或者可以是临床4-5级的严重crs。

124、在一些实施方案中，所述方法在没有crs症状(例如临床症状)例如低血压或发热中的一项或多项；或严重crs，例如一种或多种器官毒性(例如4级器官毒性)或需要机械通气，的受试者上进行。

125、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，高的ifn-γ，sgp130，mcp1，il-10的水平或活性，或疾病负担，或其任何组合指示高风险的严重crs。在一些实施方案中，低的il13，il1ra，mip1a或嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性或其任何组合指示高风险的严重crs。

126、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，患有严重crs高风险的受试者具有或被鉴定为(例如，在样品，例如血液样品中)具有例如相对于参照例如与处于严重crs的低风险的受试者相比较或与对照水平或活性相比较具有更高水平或活性的sgp130或ifn-γ或其组合。

127、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的其他实施方案中，处于严重crs的高风险的受试者具有或被鉴定为具有(例如，在样品例如血液样品中)例如相对于参照，更高的sgp130水平或活性，更高的ifn-γ水平或活性，或更低的il1ra水平或活性或其组合。在一个实施方案中，处于严重crs的高风险的受试者被鉴定为具有更高的sgp130水平或活性和更高的ifn-γ水平或活性；更高的sgp130水平或活性和更低的il1ra水平或活性；更高的ifn-γ水平或活性和更低的il1ra水平或活性；或更高的sgp130水平或活性，更高的ifn-γ水平或活性，以及更低的il1ra水平或活性，例如相比于参照，例如处于严重crs的低风险的受试者或对照水平或活性。在一些实施方案中，参照是处于严重crs的低风险的受试者或对照水平或活性。受试者可以是人，例如成人或儿科受试者。

128、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，处于严重crs的高风险的受试者具有或被鉴定为具有在受试者中(例如在样品，例如血液样品中)更高的sgp130或ifn-γ水平或活性或其组合，以及更高的骨髓疾病水平，例如相对于参照，例如与处于严重crs的低风险的受试者相比或与对照水平或活性相比。在一个实施方案中，处于严重crs高风险的受试者被鉴定为具有更高水平的sgp130和ifn-γ；sgp130和骨髓疾病；ifn-γ和骨髓疾病；或sgp130，ifn-γ和骨髓疾病，例如与参照例如处于严重crs的低风险的受试者或对照水平或活性相比较。受试者可以是人，例如儿科受试者。

129、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，处于严重crs的高风险的受试者(例如儿科受试者)被鉴定为具有(例如在样品，例如血液样品中)更高的sgp130的水平或活性、更高的ifn-γ的水平或活性，或更低的mip1-α的水平或活性，或其组合，与参照，例如处于严重crs的低风险的受试者相比或与对照水平或活性相比。在一个实施方案中，具有严重crs高风险的受试者被鉴定为具有更高的sgp130水平或活性和更高的ifn-γ水平或活性；更高的sgp130的水平或活性和更低的mip1-α水平或活性；更高的ifn-γ水平或活性和更低的mip1-α水平或活性；或更高的sgp130水平或活性，更高的ifn-γ水平或活性，以及更低的mip1-α水平或活性，例如与参照例如处于严重crs的低风险的受试者相比或与对照水平或活性相比。

130、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，处于严重crs的高风险的受试者具有或被鉴定为与参照例如处于严重crs的低风险的受试者相比或与对照水平或活性相比，(例如在样品，例如血液样品中)具有更高的sgp130水平或活性，更高的mcp1水平或活性，或更低的嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性或它们的组合。在一些实施方案中，处于严重crs的高风险中的受试者被鉴定为具有：更高的sgp130水平或活性和更高的mcp1水平或活性；更高的sgp130水平或活性以及更低的嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性；更高的mcp1水平或活性以及更低的嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性；或更高的sgp130水平或活性，更高的mcp1水平或活性以及更低的嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性；与参照例如与严重crs的低风险的受试者相比或与对照水平或活性相比较。

131、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，处于严重crs的高风险的受试者被鉴定为与参照例如处于严重crs的低风险的受试者相比或与对照水平或活性相比，(例如在样品，例如血液样品中)具有改变的(例如更高的)il-2水平或活性，更低的嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性，或更高的sgp130水平或活性或其组合。在一些实施方案中，处于严重crs的高风险的受试者被鉴定为具有：改变的(例如，更高的)il-2的水平或活性和更低的嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性；改变的(例如更高的)il-2水平或活性和更高的sgp130水平或活性；更低的嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性以及更高的sgp130水平或活性；或改变的(例如更高的)il-2水平或活性，更低的嗜酸细胞活化趋化因子的水平或活性，以及更高的sgp130水平或活性；相比于参照例如严重crs的低风险的受试者或与对照水平或活性相比较。

132、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，处于严重crs的高风险的受试者被鉴定为与参照例如处于严重crs的低风险的受试者相比或与对照水平或活性相比，(例如在样品，例如血液样品中)具有更高的ifn-γ水平或活性，改变(例如更高)的il-2的水平或活性，或更低的嗜酸细胞活化趋化因子的水平或活性，或其组合。在一些实施方案中，受试者是儿科受试者。在一些实施方案中，处于严重crs高风险的受试者被鉴定为具有：更高的ifn-γ水平或活性，和改变的(例如更高的)il-2水平或活性；更高的ifn-γ水平或活性，以及更低的嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性；改变的(例如更高的)il-2的水平或活性和更低的嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性；或更高的ifn-γ水平或活性，改变的(例如更高的)il-2的水平或活性，以及更低的嗜酸细胞活化趋化因子水平或活性；相比于参照例如严重crs的低风险的受试者或与对照水平或活性相比较。

133、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，处于严重crs的高风险的受试者被鉴定为与参照例如处于严重crs的低风险的受试者相比或与对照水平或活性相比，(例如在样品，例如血液样品中)具有更高的il-10水平或活性或更高水平的疾病负担或其组合。在一些实施方案中，受试者是儿科受试者。

134、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，处于严重crs的高风险的受试者被鉴定为与参照例如处于严重crs的低风险的受试者相比或与对照水平或活性相比，(例如在样品，例如血液样品中)具有更高的ifn-γ水平或活性或更低的il-13水平或活性或其组合。在一些实施方案中，受试者是儿科受试者。

135、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，处于严重crs的高风险的受试者被鉴定为与参照例如处于严重crs的低风险的受试者相比或与对照水平或活性相比，(例如在样品，例如血液样品中)具有更高的ifn-γ水平或活性，更低的il-13水平或活性，更低的mip1-α水平或活性或其组合。在一些实施方案中，受试者是儿科受试者。在一些实施方案中，处于严重crs的高风险的受试者被鉴定为具有：更高的ifn-γ水平或活性，或更低的il-13水平或活性；更高的ifn-γ水平或活性，或更低的mip1-α水平或活性；更低的il-13水平或活性或更低的mip1-α水平或活性；或更高的ifn-γ水平或活性，更低的il-13水平或活性，和更低的mip1-α水平或活性；相比于参照例如严重crs的低风险的受试者或与对照水平或活性相比较。在一些实施方案中，处于严重crs的高风险中的受试者被鉴定为具有：更高的ifn-γ水平或活性和更低的il-13水平或活性；更高的ifn-γ水平或活性和更低的mip1-α水平或活性；更低的il-13水平或活性和更低的mip1-α水平或活性；或更高的ifn-γ水平或活性，更低的il-13水平或活性，和更低的mip1-α水平或活性；相比于参照例如严重crs的低风险的受试者或与对照水平或活性相比较。

136、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，处于严重crs的高风险的受试者被鉴定为与参照例如处于严重crs的低风险的受试者相比或与对照水平或活性相比，(例如在样品，例如血液样品中)具有更高的ifn-γ水平或活性或更低的mip1-α水平或活性，或其组合。在一些实施方案中，受试者是儿科受试者。

137、在一些实施方案中，例如在含有il2，嗜酸细胞活化趋化因子和sgp130的3-生物标志物组中，或在含有ifn-γ，il2和嗜酸细胞活化趋化因子的3-生物标志物组中(例如，在儿科患者中)，更高的il2水平或活性指示受试者处于严重crs的高风险中。在其他实施方案中，例如在2-生物标志物组中，例如对于儿科患者，更高的il2水平或活性指示受试者处于严重crs的低风险中。

138、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，本文所述的更高水平的标志物是大于或等于1,2,5,10,20,50,100,200,500,1000,2000,5000,10,000,20,000,50,000,100,000,200,000,或500,000pg/ml。在一些实施方案中，更高水平的sgp130是大于或等于150,000,200,000,210,000,215,000,218,000,218,179,220,000,225,000,230,000,或250,000pg/ml。在一些实施方案中，更高水平的ifn-γ是大于或等于6,7,8,9,10,10.4272,10.5,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,27.6732,28,29,30,31,32,33,34,35,40,50,60,70,75,80,85,90,91,92,93,94,94.8873,95,96,97,98,99,100,105,110,115,或120pg/ml。在一些实施方案中，更高水平的il-10是大于或等于5,6,7,8,9,10,11,11.7457,12,13,14,15,16,17,18,19,或20pg/ml。在一些实施方案中，更大的肿瘤负荷大于或等于25，30，35，40，45，50，51.9，55，60，65，70或75％。在一些实施方案中，更低水平的sgp130，ifn-γ，il-10或肿瘤负荷是小于或等于本段中任何值的水平。

139、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，本文所述的标志物的更低水平是大于或等于1,2,5,10,20,50,100,200,500,1000,2000,5000,10,000,20,000,50,000,100,000,200,000,或500,000pg/ml。在一些实施方案中，更低水平的il1rα小于或等于550,575,600,625,650,657.987,675,700,720,或750pg/ml。在一些实施方案中，更低水平的mcp1小于或等于3500,4000,4100,4200,4300,4400,4500,4600,4636.52,4700,4800,4900,5000,或5500pg/ml。在一些实施方案中，更低水平的嗜酸细胞活化趋化因子小于或等于0,21,22,23,24,25,26,27,28,29,29.0902,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,或40pg/ml。在某些实施方案中，更低水平的mip1a小于或等于20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,30.1591,31,32,33,34,35,36,37,38,39或40pg/ml。在一些实施方案中，更高水平的il1rα，mcp1，嗜酸细胞活化趋化因子或mip1a是大于或等于本段中任何值的水平。

140、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，灵敏度为至少.75,0.79,0.80,0.82,0.85,0.86,0.90,0.91,0.93,0.95,0.96,0.97,0.98,0.99,或1.0。在一些实施方案中，特异性为至少0.75,0.77,0.80,0.85,0.86,0.89,0.90,0.92,0.94,0.95,0.96,0.97,0.98,0.99或1.0。在一些实施方案中，ppv为至少0.62,0.65,0.70,0.71,0.75,0.80,0.82,0.83,0.85,0.90,0.91,0.92,0.95,0.96,0.97,0.98,0.99或1.0。在一些实施方案中，npv为至少0.80,0.85,0.90,0.92,0.94,0.95,0.96,0.97,0.98,0.99或1.0。

141、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，嗜酸细胞活化趋化因子的量度包括嗜酸细胞活化趋化因子-1，嗜酸细胞活化趋化因子-2和嗜酸细胞活化趋化因子-3中的一种或多种(例如，两种或全部)的量度。在一些实施方案中，嗜酸细胞活化趋化因子的量度包括嗜酸细胞活化趋化因子-1和嗜酸细胞活化趋化因子-2，嗜酸细胞活化趋化因子-1和嗜酸细胞活化趋化因子-3或嗜酸细胞活化趋化因子-2和嗜酸细胞活化趋化因子-3的量度。

142、在方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的一些实施方案中，生物标志物在输注car表达细胞疗法的3天内测量，例如在输注后1、2或3天。在一些实施方案中，生物标志物包含ifn-γ和/或sgp130。

143、本文公开的任何方法可以进一步包括获得受试者中例如在来自受试者的样品(例如，血液样品)中一、二、三、四、五、十、二十种或更多种选自stnfr2,ip10,sil1r2,stnfr1,m1g,vegf,silr1,tnfα,ifnα,gcsf,srage,il4,il10,il1r1,ifn-γ,il6,il8,sil2rα,sgp130,sil6r,mcp1,mip1α,mip1β,或gm-csf或其组合的细胞因子或细胞因子受体的水平或活性的量度的步骤。在一些实施方案中，患有严重crs或具有严重crs的高风险的受试者具有或被鉴定为具有相比于参照例如严重crs的低风险的受试者或与对照水平或活性相比较，更高的水平或活性的一种或多种(例如二、三、四、五、十、十五、二十种或更多种)选自下述的细胞因子或细胞因子受体：stnfr2,ip10,sil1r2,stnfr1,m1g,vegf,silr1,tnfα,ifnα,gcsf,srage,il4,il10,il1r1,ifn-γ,il6,il8,sil2rα,sgp130,sil6r,mcp1,mip1α,mip1β,或gm-csf或其组合。

144、本文公开的任何方法可进一步包括获取受试者中，例如在来自受试者的样品(例如血液样品)中选自以下的一种，两种，三种，四种，五种，六种，七种，八种或全部细胞因子或细胞因子受体的水平或活性的量度的步骤：ifn-γ,il10,il6,il8,ip10,mcp1,m1g,sil2rα,gm-csf,或tnfα或其组合。在一些实施方案中，患有严重crs或具有严重crs的高风险的受试者具有或被鉴定为具有相比于参照例如严重crs的低风险的受试者或与对照水平或活性相比较，更高的水平或活性的一种或多种(例如两种，三种，四种，五种，六种，七种，八种或全部)选自下述的细胞因子或细胞因子受体：ifn-γ，il10，il6，il8，ip10，mcp1，m1g，sil2rα，gm-csf或tnfα或其组合。

145、本文公开的任何方法可进一步包括获取受试者中，例如在来自受试者的样品(例如血液样品)中选自以下的一种，两种，三种，四种，五种，六种或全部细胞因子或细胞因子受体的水平或活性的量度的步骤：ifn-γ，il10，il6，il8，ip10，mcp1，m1g或sil2rα或其组合。在一些实施方案中，具有严重crs或具有严重crs的高风险的受试者具有或被鉴定为具有相比于参照例如严重crs的低风险的受试者或与对照水平或活性相比较，更高的水平或活性的一种或多种(例如两种，三种，四种，五种，六种或全部)选自下述的细胞因子或细胞因子受体：ifn-γ，il10，il6，il8，ip10，mcp1，m1g或sil2rα或其组合。

146、在一些实施方案中，本文公开的任何方法可以进一步包括确定来自受试者的样品(例如血液样品)中c-反应蛋白(crp)水平的步骤。在一个实施方案中，处于严重crs的低风险中的受试者具有或被鉴定为具有小于7mg/dl(例如7、6.8、6、5、4、3、2、1mg/dl或更少)的crp水平。在一个实施方案中，处于严重crs的高风险的受试者具有或被鉴定为具有与处于严重crs的低风险的受试者相比或与对照水平或活性相比更高水平的crp。在一个实施方案中，与处于严重crs的低风险的受试者相比或与对照水平或活性相比，更高的水平或活性至少高2倍(例如至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，15，20，25，30，40，50，100，500，1000倍或更高)。

147、在其他实施方案中，本文公开的方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统进一步包括基于获取的crs风险状态选择或改变用于受试者的疗法例如car表达细胞疗法的步骤。在获取的crs风险状态是受试者处于严重crs的高风险的实施方案中，治疗被改变以使其停止，或者疗法(例如，car表达细胞)的后续(例如，第二，第三或第四)剂量的剂量低于先前的剂量，或者比如果患者没有处于严重crs的高风险中施用的剂量低的剂量。在其他实施方案中，后续的(例如，第二，第三或第四)剂量的car表达细胞包含与施用于受试者的先前的car表达细胞疗法不同的car或不同的细胞类型。

148、在本文公开的方法，用于用途的组合物，试剂盒或系统的实施方案中，所述疗法是单独或与其他疗法组合的car表达细胞疗法。在实施方案中，疗法包含多种car表达免疫效应细胞(例如t细胞或nk细胞)。在一些实施方案中，car表达细胞疗法包含car19疗法(例如，如本文所述的ctl019疗法)或由其组成。

149、在其他实施方案中，疗法是cd19抑制性或消耗性治疗，例如包括cd19抑制剂的疗法。在实施方案中，cd19-抑制或消耗治疗与crs相关。在一些实施方案中，cd19抑制剂是cd19抗体，例如cd19双特异性抗体(例如靶向cd19的双特异性t细胞衔接物，例如blinatumomab)。在一些实施方案中，双特异性t细胞衔接物抗体分子是bargou等人，“tumorregression in cancer patients by very low doses of a t cell-engagingantibody”2008年8月15日；321(5891)：974-7.doi：10.1126/science.11 58545中描述的抗体分子。

150、在一些实施方案中，疗法包括表达cd19 car的细胞，例如cd19 cart细胞或抗cd19抗体(例如抗cd19单或双特异性抗体)或其片段或缀合物。在一个实施方案中，抗cd19抗体是如wo2014/153270(例如wo2014/153270的表3)中所述的人源化抗原结合结构域，其通过引用并入本文，或其缀合物。其它示例性抗cd19抗体或其片段或缀合物包括但不限于blinatumomab、sar3419(sanofi)、medi-551(medimmune llc)、combotox、dt2219arl(masonic cancer center)、mor-208(也称为xmab-5574；morphosys)、xmab-5871(xencor)、mdx-1342(bristol-myers squibb)、sgn-cd19a(seattle genetics)和afm11(affimedtherapeutics)。参见，例如，hammer.mabs.4.5(2012):571–77。博纳吐单抗是双特异性抗体，其由两个scfv组成，一个scfv结合cd19和一个scfv结合cd3。博纳吐单抗指导t细胞攻击癌细胞。参见，例如，hammer等人；clinical trial identifier no.nct00274742和nct01209286。medi-551是人源化抗cd19抗体，其具有被改造的fc以具有增强的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)。参见，例如，hammer等人；和clinical trial identifierno.nct01957579。combotox是结合cd19和cd22的免疫毒素的混合物。免疫毒素由scfv抗体片段融合至去糖基化的蓖麻毒蛋白a链组成。参见，例如，hammer等人；和herrera等人j.pediatr.hematol.oncol.31.12(2009):936-41；schindler等人br.j.haematol.154.4(2011):471-6。dt2219arl是靶向cd19和cd22的双特异性免疫毒素，其包含两个scfv和截短的白喉毒素。参见，例如，hammer等人；和clinical trial identifier no.nct00889408。sgn-cd19a是抗体-药物缀合物(adc)，其由抗cd19人源化单克隆抗体连接合成的细胞毒性细胞杀伤物质，单甲基auristatin f(mmaf)组成。参见，例如，hammer等人；和clinicaltrial identifier nos.nct01786096和nct01786135。sar3419是抗cd19抗体-药物缀合物(adc)，其包含通过可切割接头与美登素衍生物缀合的抗cd19人源化单克隆抗体。参见，例如，younes等人j.clin.oncol.30.2(2012):2776-82；hammer等人；clinical trialidentifier no.nct00549185；和blanc等人clin cancer res.2011；17:6448-58。xmab-5871是fc工程化的、人源化的抗cd19抗体。参见，例如，hammer等人。mdx-1342是具有增强的adcc的人fc-工程化的抗cd19抗体。参见，例如，hammer等人。在实施方案中，抗体分子是双特异性抗cd19和抗cd3分子。例如，afm11是靶向cd19和cd3的双特异性抗体。参见，例如，hammer等人；和clinical trial identifier no.nct02106091。在一些实施方案中，本文所述的抗cd19抗体与治疗剂缀合或以其它方式结合，所述治疗剂，例如化疗剂、肽疫苗(如在izumoto等人2008j neurosurg 108：963-971中所述的)、免疫抑制剂、或免疫消融剂，例如环孢菌素、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、霉酚酸酯、fk506、campath、抗cd3抗体、细胞毒素、氟达拉滨、雷帕霉素、麦考酚酸、类固醇、fr901228或细胞因子。

151、在本文公开的方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的实施方案中，癌症例如血液学癌症与cd19表达相关。示例性癌症例如血液癌症包括但不限于b细胞急性淋巴细胞白血病(b-all)，t细胞急性淋巴细胞白血病(t-all)，急性淋巴细胞白血病(all)，慢性骨髓性白血病(cml)，慢性淋巴细胞性白血病(cll)，b细胞早幼粒细胞白血病，胚细胞性浆细胞样树突状细胞瘤，伯基特淋巴瘤，弥漫性大b细胞淋巴瘤，gc(生发中心)-dlbcl，ngc(非生发中心)-dlbcl，转化fl，双重打击dlbcl(double hit dlbcl)，滤泡淋巴瘤，毛细胞白血病，小细胞或大细胞滤泡淋巴瘤，恶性淋巴细胞增生症，malt淋巴瘤，外套细胞淋巴瘤，边缘区淋巴瘤，多发性骨髓瘤，骨髓发育不良和骨髓增生异常综合征，非霍奇金淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，浆胚细胞淋巴瘤，浆细胞样树突状细胞肿瘤和瓦尔登斯特隆巨球蛋白血症。在一个实施方案中，癌症选自cll，all或b-all中的一种或多种。在一个实施例中，受试者具有cll。在另一个实施方案中，受试者具有all。在另一个实施方案中，受试者具有b细胞all。

152、在本文公开的方法，用于用途的组合物，试剂盒和系统的其他实施方案中，从受试者的样品(例如血液样品)获取一种或多种生物标志物(例如(i)-(xi)的一种或多种生物标志物)的测量。在一些实施方案中，受试者，例如来自受试者的样品在接受car表达细胞疗法的同时评估。在其他实施方案中，受试者，例如来自受试者的样品，在接受car表达细胞疗法后进行评估。例如，受试者，例如来自受试者的样品，在用car表达细胞疗法输注后10天或更短时间(例如1-10天，1-9天，1-8天，1-7天，1-6天，1-5天，1-4天，1-3天，1-2天，5天或更少，4天或更少，3天或更少，2天或更少，1天或更少，例如1，3，5，10，12，15，20小时)后进行评估。在一些实施方案中，受试者在5天或更少，4天或更少，3天或更少，2天或更少，1天或更少(例如但不早于car表达疗法输注后1，3，5，10，12，15，20小时)评估。在其他实施方案中，一种或多种生物标志物的量度包括一种或多种核酸(例如mrna)水平或蛋白水平的检测。

153、在本文所述的任何方法或用于用途的组合物中，在一些实施方案中，car表达细胞(例如cd19 car-表达细胞或bcma car-表达细胞)的剂量包含约104至约109个细胞/kg，例如约104至约105细胞/kg，约105至约106细胞/kg，约106至约107细胞/kg，约107至约108细胞/kg或约108至约109细胞/kg；或者至少大约以下之一：1x107，1.5x107，2x107，2.5x107，3x107，3.5x107，4x107，5x107，1x108，1.5x108，2x108，2.5x108，3x108，3.5x108，4x108，5x108，1x109，2x109或5x109细胞。在一些实施方案中，car表达细胞(例如cd19 car-表达细胞)的剂量包含至少约1-5x107至1-5x108个car表达细胞。在一些实施方案中，向受试者施用大约1-5×107car-表达细胞(例如cd19 car-表达细胞)。在其他实施方案中，向受试者施用约1-5×108car表达细胞(例如cd19 car表达细胞)。

154、在实施方案中，根据给药方案将car表达细胞(例如cd19 car-表达细胞或bcmacar-表达细胞)施用受试者，所述给药方案包含通过剂量分级施用受试者的总细胞剂量，例如一次，两次，三次或更多次分开施用部分剂量。在实施方案中，在治疗的第一天施用总剂量的第一百分比，在治疗的后续(例如第二，第三，第四，第五，第六或第七或更晚)日施用总剂量的第二百分比，并且任选地，在治疗的后续(例如，第三，第四，第五，第六，第七，第八，第九，第十，更晚)日施用总剂量的第三百分比(例如，剩余百分比)。例如，在治疗的第一天递送10％的细胞总剂量，第二天递送30％的细胞总剂量，并且第三天递送总剂量的剩余60％的细胞总剂量。例如，总细胞剂量包括1至5×107或1至5×108car表达细胞(例如cd19car表达细胞或bcma car表达细胞)。

155、另一方面，本发明的特征在于确定受试者是否具有严重crs的方法。该方法包括例如响应于基于免疫细胞的疗法(例如，car表达细胞疗法(例如car19表达细胞疗法))来获取受试者的crs风险状态，其中所述crs风险状态包括测量以下的一个，两个或更多(全部)：

156、(i)样品(例如血液样品)中选自stnfr2，ip10，sil1r2，stnfr1，m1g，vegf，silr1，tnfα，ifnα，gcsf，srage，il4，il10，il1r1，ifn-γ，il6，il8，sil2rα，sgp130，sil6r，mcp1，mip1α，mip1β或gm-csf的一种或多种(例如，3，4，5，10，15，20种或更多种)细胞因子或细胞因子受体，或选自c反应蛋白(crp)，铁蛋白，乳酸脱氢酶(ldh)，天冬氨酸转氨酶(ast)或血液尿素氮(bun)，丙氨酸转氨酶(alt)，肌酸酐(cr)或纤维蛋白原或其组合的分析物的水平或活性；

157、(ii)样品(例如血液样品)中il6，il6r或sgp130或其组合(例如，il6，il6r和sgp130中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性；或

158、(iii)样品(例如血液样品)中的il6，ifn-γ或il2r或其组合(例如，il6，ifn-γ和il2r中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性；

159、其中该值指示受试者的严重crs状态。

160、在实施方案中，细胞因子或细胞因子受体(i)-(iii)或除纤维蛋白原之外的所有分析物的升高水平指示严重的crs。在实施方案中，低纤维蛋白原指示严重的crs。

161、另一方面，本发明的特征在于用于评估(例如预测)受试者发展细胞因子释放综合征(crs)例如严重crs的风险的试剂盒。该试剂盒包括一组特异性检测选自以下的一种或多种基因或蛋白质的水平或活性的试剂：sgp130和ifn-γ；sgp130，ifn-γ和il1ra；或sgp130，ifn-γ和mip1-α；sgp130，mcp1和嗜酸细胞活化趋化因子；il2，嗜酸细胞活化趋化因子和sgp130；ifn-γ，il2和嗜酸细胞活化趋化因子；ifn-γ和il-13；或ifn-γ，il-13和mip1-α；或其组合；和使用所述试剂盒的说明书。在实施方案中，使用说明书提供，如果检测到的ifn-γ，sgp130或mcp1的水平或活性中的一种或多种大于参照值，和/或如果检测到的il-13，il1rα，mip1α或嗜酸细胞活化趋化因子的水平或活性中的一种或多种小于参照值时，受试者比具有在参照值处检测到的水平或活性的受试者更可能发展crs(例如，严重crs)。

162、在一些实施方案中，所述一种或多种基因还包含stnfr2，ip10，sil1r2，stnfr1，m1g，vegf，silr1，tnfα，ifnα，gcsf，srage，il4，il10，il1r1，il6，il8，sil2rα，sil6r，mcp1，mip1β或gm-csf中的一种或多种。试剂盒可以包括反应混合物，其包括提取缓冲液/试剂，扩增缓冲液/试剂，杂交缓冲液/试剂或标记缓冲液/试剂中的一种或多种。

163、在上述试剂盒的一些实施方案中，该组试剂检测来自所述基因组的基因产物(例如，表达的mrna)的水平。例如，该组试剂包括与从所述基因组表达的mrna互补的核酸探针(例如cdna或寡核苷酸)。与mrna互补的核酸探针可以固定在基底表面上。

164、在上述试剂盒的其他实施方案中，该组试剂检测由所述基因组编码的多肽的表达。在一些实施方案中，试剂包含抗体分子，例如非人抗体分子。非人抗体分子可以识别人蛋白质，例如sgp130和ifn-γ；sgp130，ifn-γ和il1ra；或sgp130，ifn-γ和mip1-α；sgp130，mcp1和嗜酸细胞活化趋化因子；il2，嗜酸细胞活化趋化因子和sgp130；ifn-γ，il2和嗜酸细胞活化趋化因子；ifn-γ和il-13；或ifn-γ，il-13和mip1-α中的一种或多种；或其任何组合。

165、在某些实施方案中，例如涉及决策树的系统和方法，例如具有生物标志物的决策树，该方法在crs风险状态首先被识别为例如高或低crs风险状态时结束。在实施方案中，该方法包括按以下顺序执行以下步骤：(i)和(ii)；(i)，(ii)和(iii)；(i)，(ii)，(iii)和(iv)；(i)，(ii)，(iii)，(iv)和(v)；(i)，(ii)，(iii)，(iv)，(v)和(vi)；(i)，(ii)，(iii)，(iv)，(v)和(vii)；或(i)，(ii)，(iii)，(iv)，(v)，(vi)和(vii)。在实施方案中，执行步骤(i)，(iii)和(v)。在一个实施方案中，同时执行步骤(i)，(iii)和(v)。在一个实施例中，基本上同时执行步骤(i)，(iii)和(v)。在一个实施方案中，步骤(i)，(iii)和(v)在同一天或彼此的1，2，3，4，6，12或24小时内执行。在实施方案中，该方法包括在执行步骤(i)，(iii)和(v)之后，按以下顺序执行以下步骤：(ii)；(ii)和(iv)；(ii)，(iv)和(vi)；(ii)，(iv)和(vii)；或(ii)，(iv)，(vi)和(vii)。

166、在某些实施方案中，例如涉及决策树(例如具有两个生物标志物的决策树)的系统和方法，该方法在crs风险状态首先被识别为例如高或低crs风险状态时结束。在实施方案中，该方法包括按以下顺序执行以下步骤：(i)和(ii)；(i)，(ii)和(iii)；(i)，(ii)，(iii)和(iv)；(i)，(ii)，(iii)和(v)；或(i)，(ii)，(iii)，(iv)和(v)。在实施方案中，执行步骤(i)和(iii)。在实施方案中，同时执行步骤(i)和(iii)。在一个实施方案中，基本上同时执行步骤(i)和(iii)。在一个实施方案中，步骤(i)和(iii)在同一天进行，或者在彼此的1，2，3，4，6，12或24小时内进行。在实施方案中，所述方法包括在执行步骤(i)和(iii)之后，按以下顺序执行以下步骤：(ii)；(ii)和(iv)；(ii)和(v)；或(ii)，(iv)和(vi)。

167、在一些实施方案中，本文的系统和方法包括执行回归分析。在一些实施方案中，本文的系统和方法包括执行决策树分析。在一些实施方案中，本文的系统和方法包括获得细胞因子或细胞因子受体水平(而不是活性)。

168、另一方面，本发明的特征在于用于评估(例如预测)受试者发展细胞因子释放综合征(crs)，例如严重crs的风险的系统。该系统包括可操作地连接至内存的至少一个处理器，其中该至少一个处理器在执行时被配置为获取受试者的crs风险状态，例如响应于基于免疫细胞的疗法(例如car表达细胞疗法(例如car19表达细胞疗法))，其中所述crs风险状态包括以下中的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十或更多(全部)量度：

169、(i)在受试者，例如在样品(例如血液样品)中，可溶性gp130(sgp130)或干扰素-γ(ifn-γ)或其组合的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

170、(ii)在受试者，例如在样品(例如血液样品)中，sgp130，ifn-γ或il1ra或其组合(例如，sgp130，ifn-γ和il1ra中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

171、(iii)在样品(例如血液样品)中sgp130或ifn-γ或其组合的水平或活性，和受试者中骨髓疾病的水平，例如其中受试者是儿科受试者；

172、(iv)在样品(例如血液样品)中sgp130，ifn-γ或mip1-α或其组合(例如，sgp130，ifn-γ和mip1-α中任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

173、(v)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中sgp130，mcp1或嗜酸细胞活化趋化因子或其组合(例如，sgp130，mcp1或嗜酸细胞活化趋化因子中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

174、(vi)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，il-2，嗜酸细胞活化趋化因子或sgp130或其组合(例如，i-l2，嗜酸细胞活化趋化因子或sgp130中的任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是成人或儿科受试者；

175、(vii)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，ifn-γ，il2或嗜酸细胞活化趋化因子或其组合(例如，ifn-γ，il2或嗜酸细胞活化趋化因子中的任意两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

176、(viii)在受试者中，例如在样品(例如，血液样品)中，il10的水平或活性和在受试者中的疾病负担水平或其组合，例如其中受试者是儿科受试者；

177、(ix)在受试者中ifn-γ或il-13或其组合的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；

178、(x)在样品(例如，血液样品)中ifn-γ，il-13或mip1-α或其组合(例如ifn-γ，il-13和mip1-α中任何两种或全部三种的组合)的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者；或(xi)在样品(例如，血液样品)中ifn-γ或mip1-α或其组合的水平或活性，例如其中受试者是儿科受试者。

179、在一些实施方案中，响应于crs风险状态的确定，执行以下中的一个，两个，三个，四个或更多个：

180、将受试者鉴定为处于发展严重crs的高风险或发展严重crs的低风险；

181、推荐选择或改变car表达细胞疗法的剂量；

182、推荐选择或改变car表达细胞疗法的方案或时程；

183、推荐施用疗法以治疗crs，例如il-6抑制剂，如托珠单抗，血管活性药物，免疫抑制剂，皮质类固醇或机械通气；

184、推荐选择替代疗法，例如，用于严重crs受试者，例如特定癌症类型的标准护理。

185、在一些实施方案中，该系统用于评估受试者中的癌症，例如本文所述的血液癌症。在一些实施方案中，癌症与cd19表达相关。例如，癌症可以选自cll，all或b-all。

186、在本文所述系统的实施方案中，car表达细胞疗法包含多个car表达免疫效应细胞，例如如本文所述。例如，car表达细胞疗法包含car19疗法(例如，ctl019疗法)或由其组成。

187、在一些方面，本公开提供了一种用于评估受试者中的癌症例如血液癌症的系统，该系统包括可操作地连接至内存的至少一个处理器，所述至少一个处理器在执行时被配置为执行任何一个或多个例如上面列举的本文所述的步骤。

188、在一些方面，本公开内容提供了治疗gc(生发中心)-dlbcl，ngc(非生发中心)-dlbcl，转化的fl或双重打击dlbcl的方法，其包括向需要其的患者施用cd19 car-表达细胞从而治疗gc-dlbcl，ngc-dlbcl，转化的fl或双重打击dlbcl。

189、在一些实施方案中，cd19 car(或编码它的核酸)包含表3，表4，表5，表6或表7中任一个中提出的序列。在实施方案中，cd19 car是ctl019。在实施方案中，双重打击dlbcl是具有影响myc/8q24基因座的染色体断点和第二癌基因基因座并由滤泡淋巴瘤的转化或从头发生的dlbcl。在实施方案中，dlbcl是cd19+dlbcl。在实施方案中，dlbcl是i，ii，iii或iv期。在实施方案中，dlbcl具有骨髓受累。在实施方案中，dlbcl是gc-dlbcl或ngc-dlbcl。在实施方案中，第二癌基因座是bcl2或bcl6。在实施方案中，患者在施用cd19 car-表达细胞之前接受淋巴消耗化疗。在实施方案中，施用单剂量的cd19 car表达细胞。在实施方案中，患者经历crs。在实施方案中，患者经历应答，例如完全应答。在实施方案中，cd19 car表达细胞(例如ctl019细胞)以约5×108个细胞的剂量施用，例如约4-6×108个细胞。在实施方案中，cd19 car表达细胞(例如ctl019细胞)以约5-7x106个细胞/kg的剂量施用。在实施方案中，cd19 car表达细胞(例如ctl019细胞)以约2×108个细胞的剂量施用，例如约1-3×108个细胞。在实施方案中，cd19 car表达细胞(例如ctl019细胞)以约3x106个细胞/kg，例如约2-4x106个细胞/kg的剂量施用。

190、在一些方面，本公开内容提供了区分受试者中的crs和脓毒症的方法，包括获取以下中的一个或多个的量度：

191、(i)gm-csf，hgf，ifn-γ，ifn-α，il-10，il-15，il-5，il-6，il-8，ip-10，mcp1，mig，mip-1β，sil-2rα，stnfri和stnfrii中一种或多种(例如2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15或全部)的水平或活性，其中高于参照的水平或活性指示crs；或

192、(ii)cd163，il-1β，scd30，sil-4r，srage，svegfr-1和svegfr-2的一种或多种(例如2，3，4，5，6种或全部)的水平或活性，其中高于参照的水平或活性指示脓毒症。

193、在实施方案中，该方法包括如果该量度指示crs则施用治疗crs的疗法。在实施方案中，所述方法包括如果量度指示脓毒症，则施用治疗脓毒症的疗法。

194、在一些方面，本公开还提供了用于区分患者中的crs和脓毒症的试剂盒，所述试剂盒包含一组试剂，其特异性检测一种或多种(例如2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22或全部)选自以下的基因或蛋白质的水平或活性：

195、gm-csf，hgf，ifn-γ，ifn-α，il-10，il-15，il-5，il-6，il-8，ip-10，mcp1，mig，mip-1β，sil-2rα，stnfri，stnfrii，cd163，il-1β，scd30，sil-4r，srage，svegfr-1和svegfr-2；和

196、使用所述试剂盒的说明书；

197、其中所述使用说明书提供，如果检测到的gm-csf，hgf，ifn-γ，ifn-α，il-10，il-15，il-5，il-6，il-8，ip-10，mcp1，mig，mip-1β，sil-2rα，stnfri或stnfrii的水平或活性中的一个或多个(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15或全部)大于参照值时，受试者可能具有crs，

198、和/或如果检测到的cd163，il-1β，scd30，sil-4r，srage，svegfr-1或svegfr-2的水平或活性中的一个或多个(例如2，3，4，5，6或全部)大于参照值时，受试者可能具有脓毒症。

199、在一些方面中，本公开还提供了一种反应混合物，包含：

200、一组试剂，其特异性检测一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23或全部)选自以下的基因或蛋白质的水平或活性：gm-csf，hgf，ifn-γ，ifn-α，il-10，il-15，il-5，il-6，il-8，ip-10，mcp1，mig，mip-1β，sil-2rα，stnfri，stnfrii，cd163，il-1β，scd30，sil-4r，srage，svegfr-1和svegfr-2，和

201、生物样品，例如血液样品。

202、在实施方案中，生物样品来自用car表达细胞疗法治疗和/或具有crs和/或脓毒症症状的受试者。

203、在某些方面，本公开内容还提供了鉴定受试者脓毒症的方法，包括获取以下一种或多种的量度：

204、(i)一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22或全部)ang2，gcsf，ifnα，il1ra，il4，il6，mig，mip1α，ptx3，tnfα，scd163，scd30，sil-1ri，sil-1rii，sil-2rα，sil-4r，srage，stnfri，stnfrii，svegfr1，svegfr2，svegfr3和vegf的水平或活性，其中相对于参照更大的水平或活性指示脓毒症；

205、(ii)一种或多种(例如，两种)il13和rantes的水平或活性，其中相对于参照更低的水平或活性指示脓毒症。

206、在一些方面，本公开提供治疗神经毒性，crs或后可逆性脑病综合征(pres)中的一种或多种的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的环磷酰胺。在相关方面，本公开内容提供了环磷酰胺用于治疗神经毒性，crs或后部可逆性脑病综合征(pres)。在实施方案中，环磷酰胺的施用在基于细胞的疗法之后进行，例如基于细胞的癌症疗法，cd19抑制疗法或cd19消耗疗法，或者受试者先前已经用基于细胞的疗法治疗，例如基于细胞的癌症疗法，cd19-抑制疗法或cd19-消耗疗法。在实施方案中，环磷酰胺的施用在基于细胞的疗法之前，同时或之后。

207、在实施方案中，患者具有或被鉴定为具有crs，pres或两者。在一些实施方案中，受试者已经用cd19抑制或消耗疗法治疗。在一些实施方案中，cd19抑制剂是cd19抗体，例如cd19双特异性抗体(例如靶向cd19的双特异性t细胞衔接物，例如blinatumomab)。在一些实施方案中，疗法包含car表达细胞，例如抗bcma car或抗cd19 car。在实施方案中，患者患有神经毒性，例如局灶缺陷(例如，脑神经麻痹或轻偏瘫)或全身异常(例如全身性癫痫发作，混乱)或癫痫持续状态。在实施方案中，受试者不具有crs的任何临床症状。在实施方案中，受试者具有crs的一种或多种临床症状。在实施方案中，受试者具有或被鉴定为具有相对于参照，例如比用car表达细胞治疗之前受试者的il-6水平升高的il-6。在实施方案中，受试者具有或被鉴定为具有相对于参照与crs(例如il-6和/或il-8)相关的细胞因子或细胞因子受体的升高的血清水平。在实施方案中，受试者具有或被鉴定为具有相对于参照与crs相关的细胞因子或细胞因子受体(例如csf il-6和/或il-8)的升高的水平。在实施方案中，受试者被治疗或已经用crs的疗法如托珠单抗或皮质类固醇(例如(甲基泼尼松龙，氢化可的松或二者)治疗。在实施方案中，受试者具有或被鉴定为具有循环的，活化的car表达细胞的增加。在实施方案中，受试者具有或被鉴定为具有csf中的car表达细胞。在实施方案中，与环磷酰胺治疗之前相比，在环磷酰胺治疗后，受试者具有在循环中减少数量的car表达细胞。在实施方案中，减少数量的car表达细胞是非零数字，例如可检测数量。

208、在一些方面，本公开提供评估(例如预测)受试者对il6受体抑制剂(例如托珠单抗)的反应性的方法，包括评估受试者的il-6r基因型，其中与低sil-6r水平相关的基因型指示对il6受体抑制剂(例如托珠单抗)的敏感性。在一些方面，本公开内容还提供评估(例如预测)受试者对il6受体抑制剂(例如托珠单抗)的反应性的方法，包括评估受试者的sil-6r水平，其中sil-6r水平低于参照水平指示对il6受体抑制剂(例如托珠单抗)的敏感性。

209、在一些实施方案中，受试者处于患有或预计发展crs的风险中(例如，具有如本文所述的改变的生物标志物水平)。

210、在一些实施方案中，受试者已经用cd19抑制或消耗疗法进行治疗。

211、在一些实施方案中，该方法进一步包括用cd19抑制或消耗疗法来治疗受试者。在一些实施方案中，cd19抑制剂是cd19抗体，例如cd19双特异性抗体(例如靶向cd19的双特异性t细胞衔接物，例如blinatumomab)。在一些实施方案中，治疗剂包含cd19 car表达细胞，例如本文所述的cd19 car表达细胞。

212、在一些实施方案中，在施用cd19抑制剂或消耗疗法之前或之后测试受试者的il-6r基因型或sil-6r水平。在一些实施方案中，在受试者发展crs之前或之后或在被鉴定为具有crs之前或之后，测试il-6r基因型或sil-6r水平。

213、在一些实施方案中，评估受试者的il-6r基因型包括确定受试者在rs2228145处的基因型。在实施方案中，在rs2228145处具有a/a单元型的受试者被鉴定为对il6受体抑制剂(例如托珠单抗)敏感。

214、在实施方案中，受试者(例如，被鉴定为对il6受体抑制剂如托珠单抗敏感的受试者)用il6受体抑制剂如托珠单抗治疗。在实施方案中，受试者(例如被鉴定为具有降低的对il6受体抑制剂如托珠单抗的敏感性的受试者)用除il6受体抑制剂以外(例如除托珠单抗之外)的crs疗法治疗。在实施方案中，除了il6受体抑制剂以外的crs疗法包含巴多昔芬，sgp130阻断剂，血管活性药物，皮质类固醇，免疫抑制剂或机械通气。在实施方案中，与对于被鉴定为对il6受体抑制剂敏感的受试者的正常治疗过程相比，受试者(例如，被鉴定为对il6受体抑制剂如托珠单抗具有降低的敏感性的受试者)用一种或多种另外的剂量或较高剂量的il6受体抑制剂(例如托珠单抗)治疗。在一些实施方案中，被鉴定为对il6受体抑制剂的敏感性降低的受试者用至少2，3或4个剂量的il6受体抑制剂例如托珠单抗治疗。

215、除非另外限定，否则本文中所用的全部技术与科学术语具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管与本文所述的那些方法和材料相似或等同的方法和材料可以用于实施或检验本发明，然而现在描述合适的方法和材料。本文所提及的全部出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用的方式完整地并入。此外，所述材料、方法和例子仅是说明性的并且不意在是限制性的。标题、副标题或编号或字母编号的要素，例如，(a)、b)、(i)等，仅为了易于阅读而展示。使用本文件中的标题或编号或字母编号的要素不要求步骤或要素按字母顺序进行并且该步骤或要素必然地彼此独立。本发明的其他特征、目的和优点将从本说明书及附图并且从权利要求书中显而易见。