一种可特异性结合非洲猪瘟p30蛋白的核酸适配体及其应用的制作方法

本发明属于分子免疫，具体涉及一种可特异性结合非洲猪瘟p30蛋白的核酸适配体及其应用。

背景技术：

1、非洲猪瘟(asf)的病原是非洲猪瘟病毒(asfv)，asfv主要以家猪/猪、家猪/软蜱/野猪、家猪/软蜱三种方式循环传播；病毒主要的靶细胞是单核细胞和肺泡巨噬细胞；软蜱(钝缘蜱)是该病毒主要的传播媒介和贮藏宿主。asfv是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员；其基因组编码151～167种蛋白质，成熟的病毒粒子包含54种结构蛋白。其中p30蛋白是病毒感染早期产生的蛋白，是由cp204l基因编码的大小约为30kd的蛋白，由于其较强的免疫原性，而且p30能够诱导机体产生很强的免疫应答，通常被用做诊断抗原。

2、由于现有检测asfv的方法存在成本高，特异性与敏感性低，不易商品化和批量检测等不同的缺陷。尤其是一些基于抗体建立的检测方法，由于抗体的不稳定性，且制备过程复杂、周期长，影响和限制了相关检测方法的临床应用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种可特异性结合非洲猪瘟p30蛋白的核酸适配体及其应用，从而弥补现有技术的不足。

2、本发明首先提供一种核酸适配体，所提供的核酸适配体的序列如下：5′-aaccgcccaaatccctaagagtc-(n)42-tgtgcgtgtgtagtgtgtctgtg-3′；其中(n)42的序列为seqid no：1(cgtgccgccgtactgcccccgactagagacacacaccaaccc)或seq id no：2(cgtgcccgcctcaataccgcaccattacacacacagcgccac)所示。

3、进一步的，所述核酸适配体上结合有氨基酸及其衍生物、多肽、蛋白质、维生素、激素、核苷酸、生物素、地高辛、荧光物质、纳米发光材料、酶或胶体金。

4、进一步的，本发明提供所述的核酸适配体在制备抗asfv药物中的应用。

5、进一步的，本发明提供所述的核酸适配体在制备结合asfv试剂中的应用。

6、进一步的，本发明还提供含有所述的核酸适配体的药物。

7、本发明利用selex技术，以asfv p30蛋白作为结合抗原从核酸文库中筛选出核酸适配体，后续通过适配体二级结构预测、适配体亲和力测定、适配体特异性检测等鉴定出两条结合力最高、特异性良好的核酸适配体，其核心序列分别如seq id no：1和seq id no：2所示。本发明筛选和制备的asfv p30蛋白特异性核酸适配体具有极好的特异性和亲和力，为asfv抗原检测技术的进一步研究提供了重要技术支撑。

技术特征：

1.一种核酸适配体，其特征在于，所述的核酸适配体的序列如下：5′-aaccgcccaaatccctaagagtc-(n)42-tgtgcgtgtgtagtgtgtctgtg-3′；其中(n)42的序列为seqid no：1或seq id no：2。

2.如权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，所述的核酸适配体上结合有氨基酸及其衍生物、多肽、蛋白质、维生素、激素、核苷酸、生物素、地高辛、荧光物质、纳米发光材料、酶或胶体金。

3.权利要求1或2所述的核酸适配体在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的应用。

4.权利要求1或2所述的核酸适配体在制备用于结合非洲猪瘟病毒的试剂中的应用。

5.一种药物，其特征在于，所述的药物中包含有权利要求1或2所述的核酸适配体。

技术总结
本发明公开了一种可特异性结合非洲猪瘟ASFV的p30蛋白的核酸适配体及其用途，属于分子免疫领域。本发明利用SELEX技术，以ASFV p30蛋白作为结合抗原从核酸文库中筛选出核酸适配体，后续通过适配体二级结构预测、适配体亲和力测定、适配体特异性检测等鉴定出两条结合力最高、特异性良好的核酸适配体，其核心序列分别如SEQ ID No：1和SEQ IDNo:2所示。本发明筛选和制备的ASFV p30蛋白特异性核酸适配体具有极好的特异性和亲和力，为ASFV抗原检测技术的进一步研究提供了重要技术支撑。

技术研发人员：王艳玲,李凯,王伟波,杨建宇,郝琴芳,闫雷,徐晓芳,赵晨辰,于晶晶,王瑜,刘祖宾,娄群,赵忠良,董照洋,宋明轩,李宸辉,张馨予,王娇
受保护的技术使用者：青岛蔚蓝生物股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13