含氮杂芳基化合物、其制备方法及其在医药上的应用与流程

1.本公开属于医药领域，涉及一种含氮杂芳基类化合物、其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，本公开涉及一种通式(i)所示的含氮杂芳基类化合物、其制备方法及含有该类化合物的药物组合物以及其作为治疗剂的用途，特别是作为 fgfr2抑制剂的用途和在制备用于治疗和/或预防肿瘤的药物中的用途。


背景技术：

2.成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factors receptors，fgfrs)是受体酪氨酸激酶家族(rtks)的一员，是一类经典的rtks，包括fgfr1、fgfr2、 fgfr3和fgfr4四个成员，均包含胞外区、跨膜区和胞内酪氨酸激酶区三个部分。成纤维细胞生长因子(fgfs)结合fgfrs后引起受体二聚化，导致其胞内酪氨酸激酶区的多个酪氨酸残基自磷酸化而活化；活化的fgfrs通过磷酸化激活底物 plcγ和信号衔接蛋白frs2，进一步激活下游的ras-raf-mapk、pi3k/akt、 pkc、stat等信号通路，从而影响细胞增殖、分化、迁移、血管新生、组织修复等生理功能(signal transduct targeted ther,2020,2；5(1):181)。
3.人体内的fgf共分为6个亚家族，分为两大类：经典fgfs和激素类fgfs。经典fgfs包括fgf1-10、16-18、20、22，能与fgfr1-4结合，与肝素有很强的亲和力，主要影响细胞增殖、分化、血管新生和创伤修复及癌症发生发展(nat revcancer,2010；10(2):116-129)；激素类fgfs则包括fgf19、21、23，主要与fgfr1 和fgfr4结合，以α/β-klotho作为共受体，调节体内代谢过程。其中fgf19-fgfr4 调节胆酸代谢，fgf23-fgfr1调节血液中钙、磷及维生素d水平(nat rev drugdiscov.2016；15(1):51-69)，这使得fgfr1和fgfr4的抑制会造成靶点相关毒性，引起高血磷和腹泻等严重不良反应。
4.当fgfr发生异常时，会引起fgfr信号通路的过度激活，并进一步诱发正常细胞癌变，fgfr基因异常在多种癌症中普遍存在。一项针对4853个各类实体瘤的ngs研究显示，7％的癌症存在fgfr异常，包括fgfr1(49％)、fgfr2(19％)、 fgfr3(26％)、和fgfr4(7％)。其中，fgfr2异常发生率较高的为子宫内膜癌、胆管癌和胃癌(clin cancer res.2016 1；22(1):259-267)。
5.目前针对fgfr已经有两款泛-fgfr抑制剂药物获批上市，为jassen的厄达替尼(erdatinib)，获批适应症为fgfr2或fgfr3异常的局部晚期或转移性尿路上皮癌(n engl j med.2019,381(4):338-348)；和incyte的培米替尼(pemigatinib)，获批适应症为fgfr2融合或重排的局部晚期或转移性胆管癌(the lancet oncology. 2020,21(5):671-684)。但由于对fgfr1和fgfr4的抑制而引起的严重高血磷症、腹泻等不良反应，泛-fgfr抑制剂大多采用间隔给药的方式来降低不良反应，使得药物疗效大打折扣。除了靶点相关毒性以外，泛-fgfr抑制剂在治疗过程中还会产生耐药。比如在fgfr2融合或突变类型的胆管癌患者中，接受泛-fgfr抑制剂治疗后，会发生v564、n549、e565、l617、k641等位点的获得性耐药突变(cancerdiscov.2017,7(3):252-263)。这些不良反应、间隔给药和获得性耐药的问题极大地限制了泛-fgfr抑制剂的应用。
6.目前relay公司发表了关于fgfr2选择性抑制剂的唯一专利申请 (wo2020231990a1)。2020年relay的小分子fgfr2抑制剂rly4008进入临床一期。目前还没有fgfr2选择性抑制剂药物被批准上市，因此相关病患人群仍存在重大未满足的医学需求。


技术实现要素：

7.本公开的目的在于提供一种通式(i)所示的化合物或其可药用的盐；
[0008][0009]
其中：
[0010]
x和y相同或不同，且各自独立地选自n原子、nr0和crc；
[0011]
z为c原子或n原子；
[0012]
前提是x、y和z中至少一个为n原子或nr0；
[0013]
r0选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自卤素、氧代基、烷基、卤代烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、-nr8r9、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0014]
rc选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、羟烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0015]
ra和rb相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、羟烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0016]
环a选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0017]
各个r1相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、氧代基、烷基、卤代烷基、烯基、炔基、羟烷基、氰基、氧代基、-or
10
和-(crfrg)
n-nr6r7；
[0018]
l2为-nr
5a-或-s(o)
p-；
[0019]
r4选自烷基、-c(o)r
10
、-c(o)or
10
、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基、、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基、其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自卤素、氧代基、烷基、卤代烷基、甲叉基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、-nr8r9、羟基、羟烷基、杂环基中的一个或多个取代基所取代；
[0020]r11
、r
12
、r
13
相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、-c(o)nr6r7、
ꢀ‑
c(o)r
10
、-c(o)or
10
、-c(o)-nr
5b-or
10
、氰基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自卤素、氧代基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、-nr8r9、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0021]
或者r
11
和r
12
与相连的碳原子一起形成环烷基或杂环基，其中所述形成的环烷基或杂环基各自独立地任选被选自卤素、氧代基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0022]
或者r
12
和r
13
与相连的碳原子一起形成环烷基或杂环基，其中所述形成的环烷基或杂环基各自独立地任选被选自卤素、氧代基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0023]
环b选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0024]
各个r2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、卤素、氰基、氧代基、
ꢀ‑
nr6r7、-c(o)nr6r7、-c(o)r
10
、-c(o)or
10
、-oc(o)r
10
、-or
10
、-s(o)
pr10
、
ꢀ‑
s(o)
p
nr6r7、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自卤素、氧代基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、-nr8r9、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0025]
l1选自化学键、-(crhri)
r-、-nr
5a-、o原子、-o-(crhri)
r-、-(crhri)
r-o-、
ꢀ‑
(crhri)
r-nr
5a-、-nr
5a-(crhri)
r-、-c(o)-、-o-c(o)-、-c(o)o-、-s(o)
p-、-nr
5a-c(o)-、-c(o)-nr
5a-、-c(o)-nr
5a-(crhri)
r-、-(crhri)
r-nr
5a-c(o)-、-nr
5a-c(o)-(crhri)
r-、
ꢀ‑
nr
5a-s(o)
2-和-s(o)
2-nr
5a-；
[0026]
环c选自环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0027]
各个r3相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、卤素、氰基、氧代基、
ꢀ‑
nr6r7、-c(o)nr6r7、-c(o)r
10
、-c(o)or
10
、-oc(o)r
10
、-or
10
、-s(o)
pr10
、
ꢀ‑
s(o)
p
nr6r7、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自卤素、氧代基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、-nr8r9、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0028]r5a
和r
5b
相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
[0029]
r6、r7、r8、r9相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基和卤代烷氧基中的一个或多个取代基所取代；
[0030]
或者r6和r7与相连的氮原子一起形成杂环基，其中所述形成的杂环基任选被选自卤素、氧代基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0031]
或者r8和r9与相连的氮原子一起形成杂环基，其中所述形成的杂环基任选被选自卤素、氧代基、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0032]r10
选自氢原子、烷基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环
烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基和卤代烷氧基中的一个或多个取代基所取代；
[0033]
rf、rg、rh和ri相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、羟烷基、烯基、炔基、烷氧基和卤代烷氧基；
[0034]
n为0、1、2、3、4、5或6；
[0035]
r为1、2、3、4、5或6；
[0036]
s为0、1、2、3或4；
[0037]
t为0、1、2、3、4或5；
[0038]
p为0、1或2；且
[0039]
q为0、1、2、3、4或5。在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其中x为n原子或crc；rc如通式(i)中所定义。
[0040]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其中y为n原子或nr0；r0如通式(i)中所定义。
[0041]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其中x为nr0，y为n原子或crc，z为c原子；或者x为n原子或crc， y为nr0，z为c原子；或者x为crc，y为n原子，z为n原子；优选地，x 为n原子或crc，y为nr0，z为c原子；或者x为crc，y为n原子，z为n 原子；更优选地，x为n原子或crc，y为nr0，z为c原子，其中r0和rc如通式(i)中所定义。
[0042]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其中x为nr0，y为n原子或crc，z为c原子；或者x为n原子或crc， y为nr0，z为c原子；其中r0和rc如通式(i)中所定义；优选地，x为nr0，y 为crc，z为c原子；或者x为n原子或crc，y为nr0，z为c原子；其中r0和rc如通式(i)中所定义。在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其中为*端与环a连接；x为n原子或crc，y为n原子或crc，其中r0和rc如通式(i)中所定义；
[0043]
优选地，为*端与环a连接；x为n原子或crc，y为crc，其中r0和rc如通式(i)中所定义；
[0044]
更优选地，为端与环a连接。
[0045]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其中ra和rb均为氢原子。
[0046]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，
其为通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐：
[0047][0048]
其中：
[0049]
x为n原子或crc；
[0050]
环a、环b、环c、l1、l2、r0、rc、r1至r4、q、s和t如通式(i)中所定义。
[0051]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐，其中l2为-nr
5a-，其中r
5a
如通式(i)中所定义。
[0052]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐，其中r4为其中r
11
至r
13
如通式(i)中所定义。
[0053]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐，其为通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐：
[0054][0055]
其中：
[0056]
x为n原子或crc；
[0057]
环a、环b、环c、l1、r0、rc、r1至r3、r
5a
、r
11
至r
13
、q、s和t如通式(i)中所定义。
[0058]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐，其中环a为6至10元芳基或5至10元杂芳基；优选地，环a选自苯基、吡啶基和嘧啶基；更优选地，环a为苯基。
[0059]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐，其中选自
优选地，为其中s为0、1或2；r1如通式(i)中所定义。
[0060]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐，其中环b选自3至8元环烷基、3至8元杂环基、6至10 元芳基和5至10元杂芳基；优选地，环b选自苯基、吡啶基、吡唑基、环己基、环己烯基、哌啶基和1,2,3,6-四氢吡啶基；更优选地，环b为苯基或吡啶基；最优选地，环b为苯基。
[0061]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐，其中t为0、1或2；优选为0或1。
[0062]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐，其中选自选自优选地，为更优选地，选自选自进一步优选地，为其中q1和q2相同或不同，且各自独立地为cr2，或者q1和q2中一个为cr2，另一个为氮原子；t1为 0、1或2；r2如通式(i)中所定义。
[0063]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐，其中为*端与l1连接。
[0064]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐，其中环c为6至10元芳基或5至10元杂芳基；优选地，环c为吡啶基或嘧啶基。
[0065]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐，其中q为0、1或2，优选为1。
[0066]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)所示的化
合物或其可药用的盐，其中为u为cr3或n 原子；优选地，为q1为0、1 或2，优选为1，r3如通式(i)中所定义。
[0067]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐，其中为
[0068]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐，其中l1为氧原子。
[0069]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐，其为通式(iv)所示的化合物或其可药用的盐：
[0070][0071]
其中：
[0072]
q1和q2相同或不同，且各自独立地为cr2，或者q1和q2中一个为cr2，另一个为氮原子；
[0073]
u为cr3或n原子；
[0074]
x为n原子或crc；
[0075]
s为0、1或2；
[0076]
t1为0、1或2；
[0077]
q1为0、1或2；
[0078]
r0、rc、r1至r3、r
5a
和r
11
至r
13
如通式(i)中所定义。
[0079]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv) 所示的化合物或其可药用的盐，其中各个r1相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、c
1-6
羟烷基和
ꢀ‑
nr6r7，其中r6和r7如通式(i)中所定义；优选地，r1为氢原子。
[0080]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv) 所示的化合物或其可药用的盐，其中s为0。
[0081]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式
(iv) 所示的化合物或其可药用的盐，其中各个r2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、卤素、氰基、-nr6r7、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基和c
1-6
羟烷基，其中r6和r7如通式(i)中所定义；优选地，各个r2相同或不同，且各自独立地为氢原子或卤素；更优选地，各个r2相同或不同，且各自独立地为氢原子或f。在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(iv)所示的化合物或其可药用的盐，其中q1为cr2，q2为ch；r2为氢原子或卤素；优选地，q1为cf 或ch，q2为ch。在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv)所示的化合物或其可药用的盐，其中各个r3相同或不同，且各自独立地选自氢原子、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、卤素、氰基、氧代基、-nr6r7、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基和c
1-6
羟烷基，其中r6和r7如通式(i)中所定义；优选地，各个r3相同或不同，且各自独立地为氢原子或c
1-6
烷基；优选为氢原子或甲基。
[0082]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐，其中q为1。
[0083]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(iv)所示的化合物或其可药用的盐，其中q1为1。
[0084]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(iv)所示的化合物或其可药用的盐，其中t1为0。
[0085]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv) 所示的化合物或其可药用的盐，其中r0为氢原子或c
1-6
烷基；优选为氢原子或甲基。
[0086]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv) 所示的化合物或其可药用的盐，其中rc为氢原子。
[0087]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv) 所示的化合物或其可药用的盐，其中rc为氢原子或c
1-6
烷基；优选为氢原子或甲基。
[0088]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv) 所示的化合物或其可药用的盐，其中r
5a
为氢原子或c
1-6
烷基；优选地，r
5a
为氢原子。在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv)所示的化合物或其可药用的盐，其中r
11
选自氢原子、卤素、c
1-6
烷基、
ꢀ‑
c(o)nr6r7和-c(o)r
10
，其中所述的c
1-6
烷基任选被选自卤素、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、氰基、-nr8r9、羟基和c
1-6
羟烷基中的一个或多个取代基所取代，其中r6至r
10
如通式(i)中所定义；优选地，r
11
为氢原子或c
1-6
烷基；更优选地， r
11
为氢原子。
[0089]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv) 所示的化合物或其可药用的盐，其中r
12
选自氢原子、卤素、c
1-6
烷基、-c(o)nr6r7和-c(o)r
10
，其中所述的c
1-6
烷基任选被选自卤素、c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷氧基、氰基、-nr8r9、羟基和c
1-6
羟烷基中的一个或多个取代基所取代，其中r6至r
10
如通式(i)中所定义；优选地，r
12
为氢原子或c
1-6
烷基；更优选地，r
12
为氢原子。
[0090]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv) 所示的化合物或其可药用的盐，其中r
13
选自氢原子、卤素和c
1-6
烷基；优选地， r
13
为氢原子或c
1-6
烷基；更优选地，r
13
为氢原子。
[0091]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv) 所示的化合物或其可药用的盐，其中r
11
、r
12
和r
13
均为氢原子。
[0092]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv) 所示的化合物或其可药用的盐，其中r6和r7相同或不同，且各自独立地选自氢原子、c
1-6
烷基、c
1-6
羟烷基、3至8元环烷基和3至12元杂环基，其中所述的c
1-6
烷基、3至8元环烷基和3至12元杂环基各自独立地任选被选自卤素、c
1-6
烷基、 c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基和c
1-6
卤代烷氧基中的一个或多个取代基所取代。
[0093]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv) 所示的化合物或其可药用的盐，其中r8和r9相同或不同，且各自独立地选自氢原子、c
1-6
烷基、c
1-6
羟烷基、3至8元环烷基和3至12元杂环基，其中所述的c
1-6
烷基、3至8元环烷基和3至12元杂环基各自独立地任选被选自卤素、c
1-6
烷基、 c
1-6
烷氧基、c
1-6
卤代烷基和c
1-6
卤代烷氧基中的一个或多个取代基所取代。
[0094]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv) 所示的化合物或其可药用的盐，其中r
10
选自氢原子、c
1-6
烷基和c
1-6
羟烷基。
[0095]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(i)所示的化合物或其可药用的盐，其中为*端与环a连接；x为n原子或crc，y为n原子或crc，rc为氢原子或c
1-6
烷基；ra和rb均为氢原子；r0为氢原子或c
1-6
烷基；环a为苯基；s为0；环b为苯基；r2为氢原子或卤素；t 为1；l1为氧原子；环c为吡啶基或嘧啶基；r3为氢原子或c
1-6
烷基；q为1；l2为-nr
5a-；r
5a
为氢原子或c
1-6
烷基；r4为r
11
为氢原子；r
12
为氢原子；r
13
为氢原子。
[0096]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(iv)所示的化合物或其可药用的盐，其中x为n原子或crc；rc为氢原子或c
1-6
烷基；r0为氢原子或c
1-6
烷基； s为0；t1为0；q1为cr2，q2为ch；r2为氢原子或卤素；u为cr3或n原子；各个r3相同或不同，且各自独立地为氢原子或c
1-6
烷基；q1为1；r
5a
为氢原子或 c
1-6
烷基；r
11
为氢原子；r
12
为氢原子；r
13
为氢原子。
[0097]
表a本公开的典型化合物包括但不限于：
[0098]
[0099][0100]
本公开的另一方面涉及通式(ia)所示的化合物或其盐，
[0101][0102]
其中：
[0103]
w为卤素；优选地，w为溴原子；
[0104]
x、y、z、环b、环c、ra、rb、l1、r2、r3、q和t如通式(i)中所定义。
[0105]
在本公开一些优选的实施方案中，所述的通式(ia)所示的化合物或其盐，其中 z为c。
[0106]
本公开的另一方面涉及通式(iia)所示的化合物或其盐，
[0107][0108]
其中：
[0109]
w为卤素；优选地，w为溴原子；
[0110]
x、环b、环c、r0、l1、r2、r3、q和t如通式(ii)中所定义。
[0111]
本公开的另一方面涉及通式(iva)所示的化合物或其盐，
[0112][0113]
其中：
[0114]
w为卤素；优选地，w为溴原子；
[0115]
x、q1、q2、u、r0、r2、r3、q1和t1如通式(iv)中所定义。
[0116]
本公开的另一方面涉及通式(iiib)所示的化合物或其盐，
[0117][0118]
其中：
[0119]
x、环a、环b、环c、l1、r0、r1至r3、r
5a
、q、s和t如通式(iii)中所定义。
[0120]
本公开的另一方面涉及通式(ivb)所示的化合物或其盐，
[0121][0122]
其中：
[0123]
x、q1、q2、u、r0、r1至r3、r
5a
、q1、s和t1如通式(iv)中所定义。
[0124]
表b本公开的典型中间体化合物包括但不限于：
[0125]
[0126][0127]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(i)所示的化合物或其可药用的盐的方法，其包括：
[0128][0129]
通式(ia)所示的化合物或其盐和通式(x)所示的化合物或其盐发生偶联反应得到通式(i)所示的化合物或其可药用的盐；
[0130]
其中：
[0131]
w为卤素；优选地，w为溴原子；
[0132]
l为r为氢原子或c
1-6
烷基；
[0133]
x、y、z、环a、环b、环c、l1、l2、ra、rb、r1至r4、q、s和t如通式(i) 中所定义。
[0134]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐的方法，其包括：
[0135][0136]
通式(iia)所示的化合物或其盐和通式(x)所示的化合物或其盐发生偶联反应得到通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐；
[0137]
其中：
[0138]
w为卤素；优选地，w为溴原子；
[0139]
l为r为氢原子或c
1-6
烷基；
[0140]
x、环a、环b、环c、l1、l2、r0、r1至r4、q、s和t如通式(ii)中所定义。
[0141]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐的方法，其包括：
[0142][0143]
通式(iia)所示的化合物或其盐和通式(xi)所示的化合物或其盐发生偶联反应得到通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐；
[0144]
其中：
[0145]
w为卤素；优选地，w为溴原子；
[0146]
l为r为氢原子或c
1-6
烷基；
[0147]
x、环a、环b、环c、l1、r0、r1至r3、r
5a
、r
11
至r
13
、q、s和t如通式 (iii)中所定义。
[0148]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(iv)所示的化合物或其可药用的盐的方法，其包括：
[0149][0150]
通式(iva)所示的化合物或其盐和通式(xii)所示的化合物或其盐发生偶联反应得到通式(iv)所示的化合物或其可药用的盐；
[0151]
其中：
[0152]
w为卤素；优选地，w为溴原子；
[0153]
l为r为氢原子或c
1-6
烷基；
[0154]
x、q1、q2、u、r0、r1至r3、r
5a
、r
11
至r
13
、q1、s和t1如通式(iv)中所定义。
[0155]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐的方法，其包括：
[0156][0157]
通式(iiib)所示的化合物或其盐和通式(m1)所示的化合物或其盐反应得到通式 (iii)所示的化合物或其可药用的盐；
[0158]
其中：
[0159]rx
为卤素；优选地，r
x
为氯原子；
[0160]
x、环a、环b、环c、l1、r0、r1至r3、r
5a
、r
11
至r
13
、q、s和t如通式 (iii)中所定义。
[0161]
本公开的另一方面涉及一种制备通式(iv)所示的化合物或其可药用的盐的方法，其包括：
[0162][0163]
通式(ivb)所示的化合物或其盐和通式(m1)所示的化合物或其盐反应得到通式 (iv)所示的化合物或其可药用的盐；
[0164]
其中：
[0165]rx
为卤素；优选地，r
x
为氯原子；
[0166]
x、q1、q2、u、r0、r1至r3、r
5a
、r
11
至r
13
、q1、s和t1如通式(iv)中所定义。
[0167]
本公开的另一方面涉及一种药物组合物，所述药物组合物含有本公开通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv)以及表a所示的化合物或其可药用的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0168]
本公开进一步涉及通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv)以及表a所示的化合物或其可药用的盐或包含其的药物组合物在制备用于抑制fgfr2的药物中的用途。
[0169]
本公开进一步涉及通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv)以及表a所示的化合物或其可药用的盐或包含其的药物组合物在制备用于治疗和/或预防肿瘤的药物中的用途。
[0170]
本公开还涉及一种抑制fgfr2的方法，其包括给予所需患者抑制有效量的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv)以及表a所示的化合物或其可药用的盐，或包含其的药物组合物。
[0171]
本公开还涉及一种治疗和/或预防肿瘤的方法，其包括给予所需患者治疗有效量
的通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv)以及表a所示的化合物或其可药用的盐，或包含其的药物组合物。
[0172]
本公开进一步涉及一种通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv)以及表a所示的化合物或其可药用的盐，或包含其的药物组合物，其用作药物。
[0173]
本公开进一步涉及通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv)以及表a所示的化合物或其可药用的盐，或包含其的药物组合物，其用作fgfr2抑制剂。
[0174]
本公开进一步涉及通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv)以及表a所示的化合物或其可药用的盐，或包含其的药物组合物，其用于抑制fgfr2。
[0175]
本公开进一步涉及通式(i)、通式(ii)、通式(iii)、通式(iv)以及表a所示的化合物或其可药用的盐，或包含其的药物组合物，其用于治疗和/或预防肿瘤。
[0176]
本公开中如上所述的肿瘤为癌症；所述的癌症优选选自胆管癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌(如非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、甲状腺癌、胃癌、卵巢癌、结直肠癌(如结肠癌和直肠癌)、子宫内膜癌、尿路上皮癌、睾丸癌、宫颈癌、白血病、皮肤癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、膀胱癌、食管癌、头颈癌、肾癌、胰腺癌、骨癌、淋巴瘤、黑色素瘤、肉瘤、外周神经上皮瘤、胶质瘤(如星形细胞瘤和成胶质细胞瘤)、室管膜瘤、成神经细胞瘤、神经节细胞瘤、成神经管细胞瘤、松果体细胞肿瘤、脑膜瘤、神经纤维瘤、神经鞘瘤和维尔姆斯瘤；更优选选自胆管癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、甲状腺癌、胃癌、卵巢癌、结直肠癌、子宫内膜癌和尿路上皮癌。
[0177]
可将活性化合物制成适合于通过任何适当途径给药的形式，活性化合物优选是以单位剂量的方式，或者是以患者可以以单剂自我给药的方式。本公开化合物或组合物的单位剂量的表达方式可以是片剂、胶囊、扁囊剂、瓶装药水、药粉、颗粒剂、锭剂、栓剂、再生药粉或液体制剂。
[0178]
作为一般性指导，合适的单位剂量可以是0.1～1000mg。
[0179]
本公开的药物组合物除活性化合物外，可含有一种或多种辅料，所述辅料选自以下成分：填充剂(稀释剂)、粘合剂、润湿剂、崩解剂或赋形剂等。根据给药方法的不同，组合物可含有0.1至99重量％的活性化合物。
[0180]
含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂、造粒剂、崩解剂、粘合剂和润滑剂。这些片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收，因而在较长时间内提供缓释作用的已知技术将其包衣。
[0181]
也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂或其中活性成分与水溶性载体或油溶媒混合的软明胶胶囊提供口服制剂。
[0182]
水混悬液含有活性物质和用于混合的适宜制备水混悬液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂、分散剂或湿润剂。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂。
[0183]
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油或矿物油配制而成。油悬浮液可含有增
稠剂。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂保存这些组合物。
[0184]
本公开的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油、矿物油或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂，乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。
[0185]
本公开的药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳，可通过局部大量注射将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本公开化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是delteccadd-plus.tm.5400型静脉注射泵。
[0186]
本公开的药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用任何调和固定油。此外，脂肪酸也可以制备注射剂。
[0187]
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本公开化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。
[0188]
如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、患者的年龄、患者的体重、患者的健康状况、患者的行为、患者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合、疾病的严重性等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、化合物的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
[0189]
术语说明
[0190]
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
[0191]
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个) 碳原子的烷基(即c
1-12
烷基)，更优选含有1至6个碳原子的烷基(即c
1-6
烷基)。烷基的非限制性实例包括：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2
‑ꢀ
二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、 2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、 3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，取代基优选选自d原子、卤素、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基
氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
[0192]
术语“烯基”指分子中含有至少一个碳碳双键的烷基化合物，其中烷基的定义如上所述。优选含有2至12个(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12 个)碳原子的烯基(即c
2-12
烯基)，更优选含有2至6个碳原子的烯基(即c
2-6
烯基)。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选选自烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
[0193]
术语“炔基”指分子中含有至少一个碳碳三键的烷基化合物，其中烷基的定义如上所述。优选含有2至12个(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12 个)碳原子的炔基，更优选含有2至6个碳原子的炔基。炔基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选选自烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
[0194]
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和的全碳单环或多环系统，所述环系统中包含3至20个环原子(即3至20元环烷基)，优选包含3至12个(例如3、4、5、 6、7、8、9、10、11和12个)环原子(即3至12元环烷基)，优选包含3至8个环原子(即3至8元环烷基)，更优选包含3至6个环原子(即3至6元环烷基)。
[0195]
所述的全碳单环的环烷基，非限制性实例包括：环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基和环辛基等。
[0196]
所述的多环系统的环烷基包括：螺环烷基、稠环烷基和桥环烷基。所述多环系统的环烷基还包括如上所述的全碳单环的环烷基、螺环烷基、稠环烷基和桥环烷基与一个或多个芳基、杂芳基或杂环基稠合的多环系统，其中连接点在全碳单环的环烷基、螺环烷基、稠环烷基和桥环烷基所在的环上，并且在这种情况下，碳原子个数继续表示多环系统中的碳原子个数，非限制性实例包括：原子个数，非限制性实例包括：等；优选
[0197]
术语“螺环烷基”指单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的5至20元的多环系统，其可以含有一个或多个双键。优选为6至14元(例如6、7、8、9、10、 11、12、13和14元)，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基或多螺环烷基(如双螺环烷基)，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5 元/5元、5元/6元、6元/4元、6元/5元或6元/6元单螺环烷基。螺环烷基非限制性实例包括：
[0198][0199]
术语“稠环烷基”指每个环与体系中的其它环共享毗邻的一对碳原子的5至 20元的多环系统，其中一个或多个环系统可以含有一个或多个双键。优选为6至 14元(例如6、7、8、9、10、11、12、13和14元)，更优选为7至10元。根据组成环系统的数目可以分为双环、三环、
四环等多环稠环烷基，优选为双环或三环稠环烷基，更优选为3元/4元、3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4 元/6元、5元/3元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、5元/7元、6元/3元、6元/4 元、6元/5元、6元/6元、6元/7元、7元/5元或7元/6元双环稠环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括：
[0200][0201]
术语“桥环烷基”指任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的5至20元的多环系统，其可以含有一个或多个双键。优选为6至14元(例如6、7、8、9、10、 11、12、13或14元)，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环等多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环桥环烷基，更优选为双环或三环桥环烷基。桥环烷基的非限制性实例包括：
[0202][0203]
环烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，取代基优选选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
[0204]
术语“烷氧基”指-o-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选选自d原子、卤素、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
[0205]
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和的单环或多环系统，所述环系统中包含3 至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，所述的硫可任选被氧代(即形成亚砜或砜)，但不包括-o-o-、-o-s-或-s-s-的环部分，其余环原子为碳原子，且在满足价键理论的基础上，连接点既可以是碳原子也可以是氮原子(即3至20元杂环基)。优选包含3至12个(例如3、4、5、6、7、8、9、 10、11和12个)环原子，其中1至4个(例如1、2、3和4个)是杂原子(即3 至12元杂环基)；更优选包含3至8个环原子(例如3、4、5、6、7和8个)，其中1至3个是杂原子(例如1、2和3个)(即3至8元杂环基)；更优选包含3至 6个环原子，其中1至3个是杂原子(即3至6元杂环基)；最优选包含5或6个环原子，其中1至3个是杂原子(即5或6元杂环基)。
[0206]
所述的单环的杂环基，非限制性实例包括：吡咯烷基、四氢吡喃基、1,2,3,6
‑ꢀ
四氢吡啶基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基和高哌嗪基等。
[0207]
所述的多环系统的杂环基包括螺杂环基、稠杂环基和桥杂环基。所述多环系统的杂环基还包括如上所述的单环的杂环基、螺杂环基、稠杂环基和桥杂环基与一个或多个芳基、杂芳基或环烷基稠合的多环系统，其中连接点在单环系统的杂环基、螺杂环基、稠杂环
基和桥杂环基所在的环上，并且在这种情况下，环原子个数继续表示多环环系统中的环原子个数，其非限制性实例包括：
[0208]
等。
[0209]
术语“螺杂环基”指单环之间共用一个原子(称螺原子)的5至20元的多环杂环系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，所述的硫可任选被氧代(即形成亚砜或砜)，其余环原子为碳原子，且在满足价键理论的基础上，连接点既可以是碳原子也可以是氮原子。其可以含有一个或多个双键。优选为6 至14元(例如6、7、8、9、10、11、12、13或14元)，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基或多螺杂环基(如双螺杂环基)，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为3元/5元、3元/6元、 4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元、5元/6元或6元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：
[0210][0211]
术语“稠杂环基”指每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的5至20 元的多环杂环系统，一个或多个环可以含有一个或多个双键，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，所述的硫可任选被氧代(即形成亚砜或砜)，其余环原子为碳原子，且在满足价键理论的基础上，连接点既可以是碳原子也可以是氮原子。优选为6至14元(例如6、7、8、9、10、11、12、13或14元)，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环等多环稠杂环基，优选为双环或三环稠杂环基，更优选为3元/4元、3元/5元、3元/6元、4元/4元、 4元/5元、4元/6元、5元/3元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、5元/7元、6元/3元、6元/4元、6元/5元、6元/6元、6元/7元、7元/5元或7元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：
[0212][0213]
术语“桥杂环基”指任意两个环共用两个不直接连接的原子的5至14元的多环杂环系统，其可以含有一个或多个双键，其中一个或多个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，所述的硫可任选被氧代(即形成亚砜或砜)，其余环原子为碳原子，且在满足价键理论的基础
上，连接点既可以是碳原子也可以是氮原子。优选为6 至14元(例如6、7、8、9、10、11、12、13或14元)，更优选为7至10元。根据组成环系统的数目可以分为双环、三环、四环等多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环桥杂环基，更优选为双环或三环桥杂环基。桥杂环基的非限制性实例包括：
[0214][0215]
杂环基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，取代基优选选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
[0216]
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元的单环或多环(其共享毗邻碳原子对的环)环系统，优选为6至10元(例如6、7、8、9或10元)。所述的单环的芳基，例如苯基。所述的多环环系统的芳基，非限制性实例包括：萘基等。所述多环环系统的芳基还包括如上所述的苯基和多环环系统的芳基与一个或多个杂环基或环烷基稠合，其中连接点在苯基和多环环系统的芳基所在的环上，并且在这种情况下，环原子个数继续表示多环系统中的环原子个数，其非限制性实例包括：
[0217][0218]
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，取代基优选选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
[0219]
术语“杂芳基”指包含1至4个选自氧、硫和氮的杂原子(例如1、2、3和4 个)、5至14个环原子的具有共轭的π电子体系的单环或多环系统。优选为5至 10元(例如5、6、7、8、9或10元)杂芳基，更优选为5元或6元杂芳基。
[0220]
所述的单环的杂芳基，非限制性实例包括：呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、n-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、吡唑基、三唑基和四唑基等。
[0221]
所述的多环系统的杂芳基，非限制性实例包括：吲哚基、喹啉基、咔唑基等。所述多环系统的杂芳基还包括如上所述的单环的杂芳基和多环系统的杂芳基与一个或多个芳基稠合的多环系统，其中不限定连接点，并且在这种情况下，环原子个数继续表示多环系统中的环原子个数。所述多环系统的杂芳基还包括如上所述的单环的杂芳基和多环系统的杂芳基与一个或多个环烷基或杂环基稠合的多环系统，其中连接点在单环的杂芳基和多环系统的杂芳基所在的环上，并且在这种情况下，环原子个数继续表示多环环系统中的环原子个数。其非限制性实例包括：
[0222][0223]
杂芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点上被取代，取代基优选选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
[0224]
上述环烷基、杂环基、芳基和杂芳基包括从母体环系统的环原子上除去一个氢原子所衍生的残基，或从母体的相同环原子或两个不同的环原子上除去两个氢原子所衍生的残基即“二价环烷基”、“二价杂环基”、“亚芳基”和“亚杂芳基”。
[0225]
术语“氨基保护基”是为了使分子其它部位进行反应时氨基保持不变，用易于脱去的基团对氨基进行保护。非限制性实例包括：(三甲基硅)乙氧基甲基、四氢吡喃基、叔丁氧羰基(boc)、乙酰基、苄基、烯丙基、对甲氧苄基和叔丁基二甲基硅基(tbs)等。这些基团可任选地被选自卤素、烷氧基和硝基中的1-3个取代基所取代。
[0226]
术语“环烷基氧基”指环烷基-o-，其中环烷基如上所定义。
[0227]
术语“杂环基氧基”指杂环基-o-，其中杂环基如上所定义。
[0228]
术语“芳基氧基”指芳基-o-，其中芳基如上所定义。
[0229]
术语“杂芳基氧基”指杂芳基-o-，其中杂芳基如上所定义。
[0230]
术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。
[0231]
术语“卤代烷氧基”指烷氧基被一个或多个卤素取代，其中烷氧基如上所定义。
[0232]
术语“氘代烷基”指烷基被一个或多个氘原子取代，其中烷基如上所定义。
[0233]
术语“羟烷基”指烷基被一个或多个羟基取代，其中烷基如上所定义。
[0234]
术语“甲叉基”指＝ch2。
[0235]
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
[0236]
术语“羟基”指-oh。
[0237]
术语“氨基”指-nh2。
[0238]
术语“氰基”指-cn。
[0239]
术语“硝基”指-no2。
[0240]
术语“氧代”或“氧代基”指“＝o”。
[0241]
术语“羰基”指c＝o。
[0242]
术语“羧基”指-c(o)oh。
[0243]
术语“羧酸酯基”指-c(o)o(烷基)、-c(o)o(环烷基)、(烷基)c(o)o-或(环烷基)c(o)o-，其中烷基和环烷基如上所定义。
[0244]
本公开化合物可以存在特定的立体异构体形式。术语“立体异构体”是指结构相同但原子在空间中的排列不同的异构体。其包括顺式和反式(或z和e)异构体、(-)-和(+)-异构体、(r)-和(s)-对映异构体、非对映异构体、(d)-和(l)-异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体及其混合物(如外消旋体、非对映异构体的混合物)。本公开化合物中的取代基可以存在另外的不对称碳原子。所有这些立体异构体以及它们的混合物，均包括在本公开的范围之内。对于所有的碳-碳双键，即使仅命名了一个构型，z型和e型均包括在内。可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(-)-和(+)-异构体、(r)-和(s)-对映异构体以及(d)
‑ꢀ
和(l)-异构体。本公开某化合物的一种异构体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，得到纯的异构体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成。
[0245]
本公开所述化合物的化学结构中，键表示未指定构型，即如果化学结构中存在手性异构体，键可以为或或者同时包含和两种构型。
[0246]
本公开的化合物可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含在本公开的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指平衡存在并且容易从一种异构形式转化为另一种异构形式的结构异构体。其包括所有可能的互变异构体，即以单一异构体的形式或以所述互变异构体的任意比例的混合物的形式存在。非限制性的实例包括：例如酮-烯醇互变异构、亚胺-烯胺互变异构、内酰胺-内酰亚胺互变异构等。内酰胺-内酰亚胺平衡实例是在如下所示的a和b 之间：
[0247][0248]
如当提及吡唑基时，应理解为包括如下两种结构中的任何一种或两种互变异构体的混合物：
[0249][0250]
所有的互变异构形式在本公开的范围内，且化合物的命名不排除任何互变异构体。
[0251]
本公开还包括一些与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本公开化合物。可结合到本公开化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为2h、3h、
11
c、
13
c、
14
c、
13
n、
15
n、
15
o、
17
o、
18
o、
31
p、
32
p、
35
s、
18
f、
123
i、
125
i和
36
cl等。
[0252]
本公开的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(3h)，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本公开的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本公开的范围之内。
[0253]
此外，用较重同位素(诸如氘(即2h))取代可以提供某些由更高的代谢稳定性产生的治疗优点(例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求)，并且因此在某些情形下可能是优选的，其中氘取代可以是部分或完全的，部分氘取代是指至少一个氢被至少一个氘取代。
[0254]
除另有说明，当一个位置被特别地指定为氘(d)时，该位置应理解为具有大于氘的天然丰度(其为0.015％)至少1000倍的丰度的氘(即，至少10％的氘掺入)。示例中化合物的具有大于氘的天然丰度可以是至少1000倍的丰度的氘、至少2000 倍的丰度的氘、至少3000倍的丰度的氘、至少4000倍的丰度的氘、至少5000倍的丰度的氘、至少6000倍的丰度的氘或更高丰度的氘。本公开还包括各种氘化形式的式(i)化合物。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换。本领域技术人员能够参考相关文献合成氘化形式的式(i)化合物。在制备氘代形式的式(i)化合物时可使用市售的氘代起始物质，或它们可使用常规技术采用氘代试剂合成，氘代试剂包括但不限于氘代硼烷、三氘代硼烷四氢呋喃溶液、氘代氢化锂铝、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。
[0255]“任选地”或“任选”是指意味着随后所描述的事件或环境可以但不必然发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的的情形。例如“任选的被卤素或者氰基取代的c
1-6
烷基”是指卤素或者氰基可以但不必须存在，该说明包括烷基被卤素或者氰基取代的情形和烷基不被卤素和氰基取代的情形。
[0256]“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为1～6个，更优选为1～3 个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下(通过实验或理论)确定可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
[0257]“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
[0258]“可药用的盐”是指本公开化合物的盐，可选自无机盐或有机盐。这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。可以在化合物的最终分离和纯化过程中，或通过使合适的基团与合适的碱或酸反应来单独制备盐。通常用于形成药学上可接受的盐的碱包括无机碱，例如氢氧化钠和氢氧化钾，以及有机碱，例如氨。通常用于形成药学上可接受的盐的酸包括无机酸以及有机酸。
[0259]
针对药物或药理学活性剂而言，术语“治疗有效量”是指足以达到或部分达到预期效果的药物或药剂的用量。治疗有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的治疗有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
[0260]
本文所用的术语“药学上可接受的”是指这些化合物、材料、组合物和/或剂型，在合理的医学判断范围内，适用于与患者组织接触而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或其他
问题或并发症，具有合理的获益/风险比，并且对预期的用途是有效。
[0261]
本文所使用的，单数形式的“一个”、“一种”和“该”包括复数引用，反之亦然，除非上下文另外明确指出。
[0262]
当将术语“约”应用于诸如ph、浓度、温度等的参数时，表明该参数可以变化
±
10％，并且有时更优选地在
±
5％之内。如本领域技术人员将理解的，当参数不是关键时，通常仅出于说明目的给出数字，而不是限制。
[0263]
本公开化合物的合成方法
[0264]
为了完成本公开的目的，本公开采用如下技术方案：
[0265]
方案一
[0266]
本公开通式(i)所示的化合物或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：
[0267][0268]
通式(ia)所示的化合物或其盐和通式(x)所示的化合物或其盐发生suzuki偶联反应得到通式(i)所示的化合物或其可药用的盐；
[0269]
其中：
[0270]
w为卤素；优选地，w为溴原子；
[0271]
l为r为氢原子或c
1-6
烷基；
[0272]
x、y、z、环a、环b、环c、l1、l2、ra、rb、r1至r4、q、s和t如通式(i) 中所定义。
[0273]
方案二
[0274]
本公开通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：
[0275][0276]
通式(iia)所示的化合物或其盐和通式(x)所示的化合物或其盐发生suzuki偶联反应得到通式(ii)所示的化合物或其可药用的盐；
[0277]
其中：
[0278]
w为卤素；优选地，w为溴原子；
[0279]
l为r为氢原子或c
1-6
烷基；
[0280]
x、环a、环b、环c、l1、l2、r0、r1至r4、q、s和t如通式(ii)中所定义。
[0281]
方案三
[0282]
本公开通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：
[0283][0284]
通式(iia)所示的化合物或其盐和通式(xi)所示的化合物或其盐发生suzuki偶联反应得到通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐；
[0285]
其中：
[0286]
w为卤素；优选地，w为溴原子；
[0287]
l为r为氢原子或c
1-6
烷基；x、环a、环b、环c、 l1、r0、r1至r3、r
5a
、r
11
至r
13
、q、s和t如通式(iii)中所定义。
[0288]
方案四
[0289]
本公开通式(iv)所示的化合物或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：
[0290][0291]
通式(iva)所示的化合物或其盐和通式(xii)所示的化合物或其盐发生suzuki偶联反应得到通式(iv)所示的化合物或其可药用的盐；
[0292]
其中：
[0293]
w为卤素；优选地，w为溴原子；
[0294]
l为r为氢原子或c
1-6
烷基；
[0295]
x、q1、q2、u、r0、r1至r3、r
5a
、r
11
至r
13
、q1、s和t1如通式(iv)中所定义。
[0296]
方案五
[0297]
本公开通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：
[0298][0299]
通式(iiib)所示的化合物或其盐和通式(m1)所示的化合物或其盐在碱性条件下反应得到通式(iii)所示的化合物或其可药用的盐；
[0300]
其中：
[0301]rx
为卤素；优选地，r
x
为氯原子；
[0302]
x、环a、环b、环c、l1、r0、r1至r3、r
5a
、r
11
至r
13
、q、s和t如通式 (iii)中所定义。
[0303]
方案六
[0304]
本公开通式(iv)所示的化合物或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：
[0305][0306]
通式(ivb)所示的化合物或其盐和通式(m1)所示的化合物或其盐在碱性条件下反应得到通式(iv)所示的化合物或其可药用的盐；
[0307]
其中：
[0308]rx
为卤素；优选地，r
x
为氯原子；
[0309]
x、q1、q2、u、r0、r1至r3、r
5a
、r
11
至r
13
、q1、s和t1如通式(iv)中所定义。
[0310]
suzuki偶联反应优选在碱和金属催化剂(例如四(三苯基膦)钯)存在下进行。
[0311]
上述金属催化剂包括但不限于四(三苯基膦)钯、1,1
’‑
二(叔丁基膦)二茂铁氯化钯、二氯化钯、醋酸钯、1,1
’‑
双(二苄基磷)二氯二戊铁钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、三(二亚苄基丙酮)二钯等，优选为四(三苯基膦)钯。
[0312]
上述合成方案中，提供碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱，所述的有机碱包括但不限于三乙胺、n,n-二异丙基乙胺、正丁基锂、二异丙基氨基锂、醋酸钾、乙酸钠、乙醇钠、叔丁醇钠或叔丁醇钾；所述的无机碱包括但不限于氢化钠、磷酸钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠、氢氧化锂一水合物、氢氧化锂和氢氧化钾；优选地，方案一至方案四中提供碱性条件的试剂为碳酸钾；方案五和方案六中提供碱性条件的试剂为三乙胺。
[0313]
上述合成方案优选在溶剂中进行，所用溶剂包括但不限于：乙二醇二甲醚、醋酸、
甲醇、乙醇、乙腈、正丁醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺及其混合物。
具体实施方式
[0314]
以下结合实施例用于进一步描述本公开，但这些实施例并非限制着本公开的范围。
[0315]
实施例
[0316]
化合物的结构是通过核磁共振(nmr)或/和质谱(ms)来确定的。nmr位移(δ) 以10-6
(ppm)的单位给出。nmr的测定是用bruker avance neo 500m核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(dmso-d6)、氘代氯仿(cdcl3)、氘代甲醇(cd3od)，内标为四甲基硅烷(tms)。
[0317]
ms的测定用agilent 1200/1290dad-6110/6120quadrupole ms液质联用仪 (生产商：agilent，ms型号：6110/6120quadrupole ms)、waters acquityuplc-qd/sqd(生产商：waters，ms型号：waters acquity qda detector/waters sqdetector)、thermo ultimate 3000-q exactive(生产商：thermo，ms型号： thermo q exactive)。
[0318]
高效液相色谱法(hplc)分析使用agilent hplc 1200dad、agilent hplc 1200vwd和waters hplc e2695-2489高效液相色谱仪。
[0319]
手性hplc分析测定使用agilent 1260dad高效液相色谱仪。
[0320]
高效液相制备使用waters 2545-2767、waters 2767-sq detecor2、shimadzulc-20ap和gilson gx-281制备型色谱仪。
[0321]
手性制备使用shimadzu lc-20ap制备型色谱仪。
[0322]
combiflash快速制备仪使用combiflash rf200(teledyne isco)。
[0323]
薄层层析硅胶板使用烟台黄海hsgf254或青岛gf254硅胶板，薄层色谱法 (tlc)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
[0324]
硅胶柱色谱法一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
[0325]
激酶平均抑制率及ic
50
值的测定用novostar酶标仪(德国bmg公司)。
[0326]
本公开的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自abcr gmbh&co.kg，acros organics，aldrich chemical company，韶远化学科技(accela chembio inc)、达瑞化学品等公司。
[0327]
实施例中无特殊说明，反应均能够在氩气氛或氮气氛下进行。
[0328]
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1l容积的氩气或氮气气球。
[0329]
氢气氛是指反应瓶连接一个约1l容积的氢气气球。
[0330]
加压氢化反应使用parr 3916ekx型氢化仪和清蓝ql-500型氢气发生器或 hc2-ss型氢化仪。
[0331]
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
[0332]
微波反应使用cem discover-s 908860型微波反应器。
[0333]
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
[0334]
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
[0335]
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(tlc)，反应所使用的展开剂，纯化化
合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：a：二氯甲烷 /甲醇体系，b：正己烷/乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
[0336]
实施例1
[0337]
5-(4-丙烯酰胺基苯基)-4-(3-氟-4-((4-甲基嘧啶-2-基)氧基)苯基)-1-甲基-1h-吡唑-3
‑ꢀ
甲酰胺1
[0338][0339]
第一步
[0340]
2-(4-溴-2-氟苯氧基)-4-甲基嘧啶1c
[0341]
将2-氯-4-甲基嘧啶1a(10g，77.78mmol，韶远)和4-溴-2-氟苯酚1b(14.857g， 77.78mmol，毕得)溶解于125ml二甲亚砜中，加入氢氧化钾(5.135g，77.79mmol，毕得)，升温至100℃，搅拌反应3小时。冷却至室温，加入400ml水，水相用乙酸乙酯(300ml
×
3)萃取，合并有机相，减压浓缩，残余物用combiflash快速制备仪以洗脱剂体系a纯化，得到标题化合物1c(19.79g，产率89.9％)。
[0342]
ms m/z(esi)：284.9[m+1]。
[0343]
第二步
[0344]
2-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苯氧基)-4-甲基嘧啶1d
[0345]
氩气氛下，依次将化合物1c(16.39g，57.90mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基
ꢀ‑
2,2'-二(1,3,2-二氧杂戊硼烷)(22.054g，86.85mmol，韶远)、[1,1'-双(二苯基膦基) 二茂铁]二氯化钯(4.237g，5.79mmol)和乙酸钾(17.047g，173.70mmol)溶解于500 ml1,4-二氧六环中，升温至95℃，搅拌反应17小时。过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系b纯化，得到标题化合物1d(19.1g，产率：99.1％)。
[0346]
ms m/z(esi)：331.0[m+1]。
[0347]
第三步
[0348]
4-(3-氟-4-((4-甲基嘧啶-2-基)氧基)苯基)-1-甲基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯1f
[0349]
氩气氛下，依次将4-溴-1-甲基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯1e(1.0g，4.56mmol，毕得)、化合物1d(1.508g，4.57mmol)、四(三苯基膦)钯(528mg，0.46mmol)和碳酸钾(758mg，5.48mmol)溶解于60ml1,4-二氧六环和水(v/v＝5/1)的混合溶剂中，升温至100℃，搅拌反应17小时。反应液减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系a纯化，得到标题化合物1f(1.269g，产率：81.2％)。
[0350]
ms m/z(esi)：343.0[m+1]。
[0351]
第四步
[0352]
4-(3-氟-4-((4-甲基嘧啶-2-基)氧基)苯基)-1-甲基-5-(4-硝基苯基)-1h-吡唑-3-羧酸1g
[0353]
氩气氛下，将化合物1f(1.007g，2.94mmol)、1-溴-4-硝基苯(1.189g，5.89 mmol，毕得)、醋酸钯(133mg，0.59mmol，阿达玛斯)、正丁基二(1-金刚烷基)膦 (317mg，0.88mmol，伊诺凯)、碳酸钾(1.22g，8.83mmol，国药)和特戊酸(301mg， 2.95mmol，阿达玛斯)混合于40ml n,n-二甲基乙酰胺中，升温至150℃，搅拌5 小时。反应液冷却至室温，加入200ml水，用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，水相用浓盐酸调节ph小于3，水相用乙酸乙酯(150ml
×
3)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥15分钟，过滤，滤液减压浓缩得到粗品标题化合物1g(1.05g)，不经纯化，直接下一步。
[0354]
ms m/z(esi)：450.0[m+1]。
[0355]
第五步
[0356]
4-(3-氟-4-((4-甲基嘧啶-2-基)氧基)苯基)-1-甲基-5-(4-硝基苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺 1h
[0357]
将化合物1g(1.05g，2.34mmol)、n,n,n
′
,n
′‑
四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基) 六氟磷酸脲(1.333g，3.51mmol，韶远)、氨的1,4-二氧六环溶液(10.6ml，4.23 mmol，0.4m，阿达玛斯)和n,n-二异丙基乙胺(484mg，3.74mmol，阿达玛斯)混合于35ml n,n-二甲基甲酰胺中，搅拌2小时。加入200ml水，用乙酸乙酯(150 ml
×
3)萃取，有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系a纯化，得到标题化合物1h(441mg，42.1％)。
[0358]
ms m/z(esi)：449.0[m+1]。
[0359]
第六步
[0360]
5-(4-氨基苯基)-4-(3-氟-4-((4-甲基嘧啶-2-基)氧基)苯基)-1-甲基-1h-吡唑-3-甲酰胺 1i
[0361]
氢气氛下，将化合物1h(441mg，0.98mmol)和钯碳(441mg，4.14mmol)混合于100ml四氢呋喃和甲醇(v/v＝1/1)的混合溶剂中，升温至40℃，搅拌17小时。过滤，滤液减压浓缩得到标题产物1i(327mg，产率：79.6％)。
[0362]
ms m/z(esi)：419.0[m+1]。
[0363]
第七步
[0364]
5-(4-丙烯酰胺基苯基)-4-(3-氟-4-((4-甲基嘧啶-2-基)氧基)苯基)-1-甲基-1h-吡唑-3
‑ꢀ
甲酰胺1
[0365]
将化合物1i(327mg，0.78mmol)和三乙胺(238mg，2.35mmol，国药)混合于 20ml二氯甲烷中，冷却至0℃，加入丙烯酰氯(142mg，1.57mmol，tci)，升温至室温，搅拌2小时。加入100ml饱和碳酸氢钠溶液，用二氯甲烷萃取(100ml
×
3)，合并有机相，减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系a纯化得到标题化合物1(43.2mg，产率：11.7％)。
[0366]
ms m/z(esi)：473.1[m+1]。
[0367]1h nmr(500mhz,dmso-d6):δ10.33(s,1h),8.46-8.45(m,1h),7.77-7.75(m,2h), 7.57(s,1h),7.31-7.28(m,3h),7.19-7.15(m,3h),6.96-6.94(m,1h),6.47-6.42(m, 1h),6.30-6.23(m,1h),5.79-5.77(m,1h),3.77(s,3h),2.41(s,3h)。
[0368]
实施例2
[0369]
5-(4-丙烯酰胺基苯基)-1-甲基-4-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺2
[0370]
[0382]
第一步
[0383]
4-碘-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-3-羧酸乙酯3b
[0384]
将4-碘-1h-吡唑-3-羧酸乙酯3a(4.8g，18.04mmol，毕得)溶解于120ml四氢呋喃中，冷却至0℃，加入氢化钠(726mg，18.95mmol，阿达玛斯)，搅拌0.5 小时，加入2-(三甲基硅烷基)乙氧甲基氯(3.309g，19.85mmol，韶远)，升温至室温，搅拌反应3小时。加入200ml饱和氯化铵溶液，水相用乙酸乙酯(150ml
×
3) 萃取，合并有机相，减压浓缩，残余物用combiflash快速制备仪以洗脱剂体系b 纯化，得到标题化合物3b(5.955g，产率83.3％)。
[0385]
ms m/z(esi)：396.9[m+1]。
[0386]
第二步
[0387]
4-(3-氟-4-((4-甲基嘧啶-2-基)氧基)苯基)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1h-吡唑-3-羧酸乙酯3c
[0388]
氩气氛下，依次将化合物3b(3.955g，9.98mmol)、化合物1d(3.296g，9.98 mmol)、四(三苯基膦)钯(1.154g，1.00mmol)和碳酸钾(1.518g，10.98mmol)溶解于 120ml1,4-二氧六环和水(v/v＝5/1)的混合溶剂中，升温至100℃，搅拌反应17小时。反应液减压浓缩，残留
物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系a纯化，得到标题化合物3c(4.6g，产率：97.5％)。
[0389]
ms m/z(esi)：473.1[m+1]。
[0390]
第三步
[0391]
4-(3-氟-4-((4-甲基嘧啶-2-基)氧基)苯基)-5-(4-硝基苯基)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基) 甲基)-1h-吡唑-3-羧酸乙酯3d
[0392]
氩气氛下，将化合物3c(5.724g，12.11mmol)、1-溴-4-硝基苯(4.894g，24.23 mmol，毕得)、醋酸钯(544mg，2.42mmol，阿达玛斯)、正丁基二(1-金刚烷基)膦 (1.303g，3.63mmol，伊诺凯)、碳酸钾(5.022g，36.34mmol，国药)和特戊酸(1.238 g，12.12mmol，阿达玛斯)混合于125ml n,n-二甲基乙酰胺中，升温至150℃，搅拌5小时。反应液冷却至室温，加入500ml水，用乙酸乙酯(250ml
×
3)萃取，合并有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系a纯化，得到标题化合物3d(6.266g，产率：87.1％)。
[0393]
ms m/z(esi):594.1[m+1]。
[0394]
第四步
[0395]
4-(3-氟-4-((4-甲基嘧啶-2-基)氧基)苯基)-5-(4-硝基苯基)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基) 甲基)-1h-吡唑-3-羧酸3e
[0396]
将化合物3d(1g，1.68mmol)和氢氧化钠(337mg，8.43mmol，国药)溶解于 60ml乙醇和水(v/v＝10/1)的混合溶剂中，搅拌反应2小时。加入150ml水，用浓盐酸调节ph小于3，用乙酸乙酯(150ml
×
3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥15分钟，过滤，滤液减压浓缩得到标题化合物3e(952mg)，不纯化，直接下一步。
[0397]
ms m/z(esi)：566.0[m+1]。
[0398]
第五步
[0399]
4-(3-氟-4-((4-甲基嘧啶-2-基)氧基)苯基)-5-(4-硝基苯基)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基) 甲基)-1h-吡唑-3-甲酰胺3f
[0400]
将化合物3e(952mg，1.68mmol)、n,n,n
′
,n
′‑
四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基) 六氟磷酸脲(960mg，2.52mmol，韶远)、氨的1,4-二氧六环溶液(8.5ml，3.41 mmol，0.4m，阿达玛斯)和n,n-二异丙基乙胺(653mg，5.05mmol，阿达玛斯)混合于40ml n,n-二甲基甲酰胺中，搅拌2小时。加入50ml水，用乙酸乙酯(50ml
ꢀ×
3)萃取，有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系a纯化，得到标题化合物3f(174mg，18.3％)。
[0401]
ms m/z(esi)：565.0[m+1]。
[0402]
第六步
[0403]
5-(4-氨基苯基)-4-(3-氟-4-((4-甲基嘧啶-2-基)氧基)苯基)-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基) 甲基)-1h-吡唑-3-甲酰胺3g
[0404]
氢气氛下，将化合物3f(174mg，0.31mmol)和钯碳(174mg，1.64mmol)混合于25ml甲醇中，升温至40℃，搅拌2小时。过滤，滤液减压浓缩得到标题产物 3g(160mg，产率：97.1％)。
[0405]
ms m/z(esi)：535.1[m+1]。
[0406]
第七步
[0407]
5-(4-丙烯酰胺基苯基)-4-(3-氟-4-((4-甲基嘧啶-2-基)氧基)苯基)-1-((2-(三甲基硅基) 乙氧基)甲基)-1h-吡唑-3-甲酰胺3h
[0408]
将化合物3g(80mg，0.15mmol)和三乙胺(46mg，0.45mmol，国药)混合于15 ml二氯甲烷中，冷却至0℃，加入丙烯酰氯(14mg，0.15mmol，tci)，升温至室温，搅拌2小时。加入50ml饱和碳酸氢钠溶液，用二氯甲烷萃取(50ml
×
3)，合并有机相，减压浓缩得到粗品标题化合物3h(88mg)，不经纯化，直接下一步。
[0409]
ms m/z(esi)：588.9[m+1]
[0410]
第八步
[0411]
5-(4-丙烯酰胺基苯基)-4-(3-氟-4-((4-甲基嘧啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡唑-3-甲酰胺3
[0412]
将化合物3h(88mg，0.15mmol)溶解于4ml二氯甲烷和三氟乙酸(v/v＝1/1) 的混合溶剂中，搅拌2小时。过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系a纯化得到标题产物3(4.7mg，产率：6.9％)。
[0413]
ms m/z(esi)：459.1[m+1]。
[0414]1h nmr(500mhz,dmso-d6):δ13.59(s,1h),10.26(s,1h),8.50-8.49(m,1h), 7.68-7.66(m,2h),7.51(s,2h),7.28-7.19(m,4h),7.04-7.02(m,1h),6.46-6.40(m, 1h),6.28-6.25(m,1h),5.78-5.76(m,1h),5.34-5.32(m,1h),2.44(s,3h)。
[0415]
实施例4
[0416]
5-(4-丙烯酰胺基苯基)-1-甲基-4-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡咯-3-甲酰胺4
[0417][0418]
第一步
[0419]
4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯甲醛4b
[0420]
将2-溴-6-甲基吡啶4a(10g，58.1mmol)、4-羟基苯甲醛(10.65g，87.2mmol) 和碳酸钾置于250ml烧瓶中，升温到180℃搅拌5小时。冷却，加乙酸乙酯溶解，过滤，滤液减压浓缩，残余物用combiflash快速制备仪以洗脱剂体系b纯化，制得标题化合物4b(1.3g)，产率：10.5％。
[0421]
ms m/z(esi)：214.0[m+1]。
[0422]
第二步
[0423]
3-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)丙烯酸乙酯4c
[0424]
将化合物4b(1.3g,6.10mmol)和磷酰基乙酸三乙酯(1.37g，6.10mmol)加入20 ml四氢呋喃中，加入钠氢(234mg，5.85mmol，60％纯度)，常温搅拌1小时。加水20ml，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物用combiflash快速制备仪以洗脱剂体系b纯化，制得标题化合物4c(1.55 g)，产率：89.7％。
[0425]
ms m/z(esi)：283.9[m+1]。
[0426]
第三步
[0427]
4-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡咯-3-甲酸乙酯4d
[0428]
将对甲基苯磺酸甲基异氰(1.6g，8.19mmol)溶解于50ml四氢呋喃中，冷却到-78℃，加入六甲基二硅基氨基锂(8.96ml，1m)，搅拌30分钟，再加入化合物 4c(1.55g，5.47mmol)升到常温搅拌2小时。加水20ml，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物用combiflash快速制备仪以洗脱剂体系b纯化，制得标题化合物4d(1.18g)，产率：66.9％。
[0429]
ms m/z(esi)：323.0[m+1]。
[0430]
第四步
[0431]
1-甲基-4-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡咯-3-甲酸乙酯4e
[0432]
将化合物4d(630mg，1.95mmol)加入50ml四氢呋喃中，加入钠氢(94mg， 2.35mmol，60％纯度)，常温搅拌15分钟，再加入碘甲烷(832mg，5.86mmol)，搅拌2小时。加10ml水，用乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩得粗产品，经过combiflash分离以洗脱剂a体系得到制得标题产物4e(637mg)，产率：96.8％。
[0433]
ms m/z(esi)：336.9[m+1]。
[0434]
第五步
[0435]
1-甲基l-4-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡咯-3-甲酸4f
[0436]
将化合物4e(637mg，1.89mmol)溶于25ml甲醇和水(v/v＝4:1)中，加入氢氧化锂一水合物(398mg，9.47mmol)，80℃搅拌17小时。减压浓缩，加2m hcl 调节ph小于5，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩得产物4f(5500mg)，产率：94.2％。
[0437]
ms m/z(esi)：308.9[m+1]。
[0438]
第六步
[0439]
1-甲基-4-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡咯-3-甲酰胺4g
[0440]
将化合物4f(550mg，1.78mmol)溶于20mln,n-二甲基甲酰胺中，加入2-(7
‑ꢀ
偶氮苯并三氮唑)-n,n,n’,n
’‑
四甲基脲六氟磷酸酯(1.02g，2.67mmol，韶远)，n,n
‑ꢀ
二异丙基乙胺(692mg，5.35mmol，adamas)，氨的1,4-二氧六环溶液(8.95ml， 0.4m)，室温搅拌2小时。加20ml水，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)，合并有机相，水洗(10ml
×
3)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品，经过combiflash分离以洗脱剂a体系得到标题产物4g(480mg)，产率：87.5％
[0441]
ms m/z(esi)：307.9[m+1]。
[0442]
第七步
[0443]
5-溴-1-甲基-4-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡咯-3-甲酰胺4h
[0444]
将化合物4g(430mg，1.40mmol)溶于20ml四氢呋喃中，冷却到-78℃，加入n-溴代丁二酰亚胺(249mg，1.40mmol，adamas)的四氢呋喃(1ml)溶液，搅拌1 小时。加饱和碳酸氢钠溶液，乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩得产物4h(420mg)，产率：77.7％。
[0445]
ms m/z(esi)：386.0[m+1]。
[0446]
第八步
[0447]
5-(4-丙烯酰胺基苯基)-1-甲基-4-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡咯-3-甲酰胺4
[0448]
氩气氛下，将化合物4h(100mg，0.259mmol)，n-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苯基)丙烯酰胺(88mg，0.322mmol，采用文献“journal oforganometallic chemistry,2003,680(1-2),263-270”公开的方法制备而得)，四(三苯基膦)钯(30mg，0.026mmol，adamas)，碳酸钾(72mg，0.52mmol，国药)加入12ml 1,4-二氧六环和水(v/v＝5:1)混合溶剂中，反应在100℃搅拌16小时。减压浓缩得粗产品，经过combiflash分离以洗脱剂a体系得到标题产物4(55mg)，产率： 46.9％。
[0449]
ms m/z(esi)：453.1[m+1]。
[0450]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.61-7.58(m,1h),8.59-8.54(m,1h),7.49(s,1h), 7.46-7.44(m,1h),7.24-7.22(m,2h),7.13-7.12(m,2h),7.05-7.03(m,2h),6.92-6.91 (m,1h),6.64-6.62(m,1h),6.47-6.44(m,1h),6.30-6.24(m,1h),5.81-5.79(m,1h), 3.58(s,3h),2.47(s,3h)。
[0451]
实施例5
[0452]
4-(4-丙烯酰胺基苯基)-5-甲基-3-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡咯-2-甲酰胺5
[0453][0454][0455]
第一步
[0456]
(e)-4-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)丁-3-烯-2-酮5a
[0457]
将1-三苯基膦-2-丙酮(7.45g，23.40mmol，adamas)和化合物4b(4.745g，22.25 mmol)加入到80ml甲苯中，加热到110℃搅拌反应16小时。将反应液冷却到室温后减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系b纯化，得到标题化合物5a (4.91g，产率：87％)。
[0458]
第二步
[0459]
3-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-2-硝基-5-氧代己酸乙酯5b
[0460]
将化合物5a(1g，3.94mmol)加入到硝基乙酸乙酯(526mg，3.95mmol)和三乙胺
(1.196g，11.81mmol，1.64ml)中，加热到80℃搅拌反应4小时。在反应液中加入150ml乙酸乙酯后用1m盐酸洗涤(25ml
×
1)，再用饱和碳酸氢钠溶液洗涤 (25ml
×
1)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到目标化合物5b(1.58g)，直接用于下一步反应无需进一步纯化。
[0461]
第三步
[0462]
5-甲基-3-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡咯-2-甲酸乙酯5c
[0463]
将化合物5b(1.58g，4.08mmol)溶解于30ml异丙醇，加入三乙胺(437mg， 4.31mmol，0.6ml)和二氧化硫脲(1.77g，16.37mmol，adamas)，加热到90℃搅拌反应16小时。将反应液冷却到室温后减压浓缩，残余物加入30ml水和80ml 乙酸乙酯后分液，水相用乙酸乙酯萃取(20ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系b纯化，得到标题化合物5c(510mg，产率：37％)。
[0464]
第四步
[0465]
5-甲基-3-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡咯-2-甲酸5d
[0466]
将化合物5c(510mg，1.51mmol)溶解于35ml水和甲醇(v/v＝1/6)的混合溶剂中，加入氢氧化锂(640mg，15.25mmol)，加热到50℃搅拌反应16小时。将反应液冷却到室温后减压浓缩，残余物中加入1m盐酸调节反应液ph值小于7，过滤，滤饼水洗后真空干燥得目标化合物5d(465mg，产率：99.5％)。
[0467]
第五步
[0468]
5-甲基-3-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡咯-2-甲酰胺5e
[0469]
将化合物5d(465mg，1.50mmol)溶解于15ml n,n-二甲基甲酰胺中，加入n,n,n
′
,n
′‑
四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(860mg，2.26mmol)，二异丙基乙胺(292mg，2.25mmol)和氨的1,4-二氧六环溶液(0.4m，7.5ml)，搅拌反应 16小时。将反应液倒入水中，搅拌10分钟后过滤，滤饼水洗后真空干燥得到目标化合物5e(286mg，产率：61.7％)。
[0470]
第六步
[0471]
4-溴-5-甲基-3-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡咯-2-甲酰胺5f
[0472]
将化合物5e(286mg，930μmol)溶解于20ml二氯甲烷中，加入n-溴代丁二酰亚胺(174mg，977.6μmol)，搅拌反应1小时。加入5ml饱和亚硫酸钠溶液后分液，水相用二氯甲烷萃取(20ml
×
3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系a纯化，得到标题化合物5f(194 mg，产率：53.9％)。
[0473]
第七步
[0474]
4-(4-丙烯酰胺基苯基)-5-甲基-3-(4-((6-甲基吡啶-2-基)氧基)苯基)-1h-吡咯-2-甲酰胺5
[0475]
在氮气气氛下，将化合物5f(194mg，502.2μmol)，n-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2
‑ꢀ
二氧杂戊硼烷-2-基)苯基)丙烯酰胺(151mg，0.552mmol，采用文献“journal oforganometallic chemistry,2003,680(1-2),263-270”公开的方法制备而得)，碳酸钾 (104mg,752.5μmol)，四(三苯基膦)钯(60mg,51.9μmol)加入到24ml水和1,4
‑ꢀ
二氧六环的混合溶剂中，加热到95℃反应16小时。将反应液冷却到室温后减压浓缩，残余物用50ml二氯甲烷溶解后过滤，滤液减压浓缩，残余物残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系a纯化，得到标题化合物5(18mg，产率：7.9％)。
[0476]
ms m/z(esi)：453.5[m+1]。
[0477]1h nmr(500mhz,dmso-d6):δ11.50(s,1h),10.05(s,1h),7.73(t,1h),7.51(d, 2h),7.19(d,2h),7.04(d,2h),7.01(d,1h),6.95(d,2h),6.74(d,1h),6.41(dd,1h), 6.23(dd,1h),5.73(dd,2h),5.57(brs,1h),2.34(s,3h),2.24(s,3h)。
[0478]
生物学评价
[0479]
以下结合测试例进一步描述解释本公开，但这些实施例并非意味着限制本公开的范围。
[0480]
测试例1：本公开化合物对fgfr1、fgfr2、fgfr3和fgfr4激酶的抑制作用
[0481]
利用adp glo的方法对待测化合物的fgfr1、fgfr2、fgfr3和fgfr4激酶活性进行测试。测试浓度为1000nm，3倍稀释，9个浓度，复孔检测。
[0482]
1.1实验材料
[0483]
1.1.1试剂与耗材
[0484][0485]
1.1.2仪器
[0486]
仪器名称厂家型号信息离心机beckman coulterallegra x-12centrifuge酶标仪bmg labtechpherastar hs
[0487]
1.2实验步骤
[0488]
(1)配制1
×
激酶缓冲液(40mm tris，ph＝7.5；20mm mgcl2；0.1mg/ml bsa)，并加入50μm终浓度的dtt和2mm的mncl2；
[0489]
(2)用dmso稀释化合物溶液，最高浓度为200μm，3倍梯度稀释，共设置9个浓度梯度；然后取1.5μl化合物加入98.5μl激酶缓冲液中；
[0490]
(3)配制atp和polye4y1(poly(4:1glu，tyr))的混合液，使得atp和 polye4y1的浓度为6倍终浓度，等体积配成反应混合液；
[0491]
(4)用激酶缓冲液将fgfr2/fgfr1激酶溶液稀释成3倍终浓度；
[0492]
(5)取96孔板，每孔加入2μl的稀释好的化合物溶液，离心；
[0493]
(6)每孔加入2μl的激酶溶液，离心，振荡混匀2min，然后室温孵育60min；
[0494]
(7)加入2μl/孔的atp和polye4y1的混合液，离心，震荡混匀2min，室温反应60min；
[0495]
(8)加入6μl/孔的adp glo终止液，离心，震荡混匀2min，室温反应40min；
[0496]
(9)加入12μl/孔激酶检测试剂，室温孵育40min，用酶标仪检测发光信号。
[0497]
表1本公开化合物对fgfr1、fgfr2、fgfr3和fgfr4激酶的抑制作用
[0498][0499]
结论：本公开化合物对fgfr2具有抑制作用。
[0500]
测试例2：本公开化合物对snu-16和li-7细胞的增殖抑制作用
[0501]
利用ctg方法检测化合物对snu-16和li-7细胞的增殖抑制作用。对于 snu-16和li-7细胞，化合物最高浓度分别为1000nm和10μm，进行3倍梯度稀释，共设置9个浓度，复孔检测。
[0502]
3.1实验材料
[0503]
3.1.1试剂与耗材
[0504]
材料名称货号厂家批号rpmi-1640培养基22400-089gibco2276696胎牛血清10091148gibco2152441p青霉素&链霉素15140-122gibco2199841dpbs(1
×
)14190-144gibco21560320.25％胰蛋白酶-edta(1
×
)25200-072gibco2193366celltiter-glog7572promega0000347555试剂储备,50ml4870corning3611712296-孔板,黑色透明底3603corning3311804496-孔透明圆底聚苯乙烯未处理微孔板，无盖3795corning12418052检测板,2ml3960corning25018000
[0505]
3.1.2仪器
[0506]
[0507][0508]
3.2实验步骤
[0509]
(1)snu-16(atcc细胞库，#crl-5974)和li-7细胞(南京科佰生物科技有限公司，#cbp60205)的铺板密度为1250/孔，50μl/孔加入96孔黑边细胞培养板 (corning，#3603)，边缘孔用100μl pbs封闭。置于37℃co2培养箱中培养24h；
[0510]
(2)用dmso将化合物储存液稀释成500μm或5mm，再用dmso进行3 倍梯度稀释，共设置9个浓度，dmso作为阴性对照组。然后取1μl稀释化合物加入250μl rpmi-1640完全培养基中，将上述化合物稀释250倍；
[0511]
(3)取50μl稀释好的药物加入细胞培养板中，使得snu-16细胞和li-7细胞药物的最高浓度分别为1000nm和10um，3倍梯度稀释，9个浓度，复孔检测， dmso的终浓度为0.2％；
[0512]
(4)加入化合物后，将细胞培养板置于37℃co2培养箱中继续培养，snu-16 培养3天，li-7细胞培养6天；
[0513]
(5)每孔加入50μl celltiter-glo试剂(promega,#g7572)，置于摇床振荡混匀2min，再室温孵育28min，待信号稳定后在酶标仪上进行检测。
[0514]
表2本公开化合物对snu-16和li-7细胞的增殖抑制作用
[0515][0516]
结论：相对于li-7细胞，本公开化合物对snu-16细胞具有选择性的抑制作用。