一种具有增强抗乙肝效果的小核酸序列以及其偶联物的制作方法

本发明涉及小核酸序列药物领域，特别涉及一种新型小核酸药物及其偶联物及其应用。

背景技术：

1、目前临床上常用的抗病毒药物有干扰素类和核苷(酸)类似物两大类。干扰素则并不直接杀伤或抑制病毒，主要通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制乙肝病毒的复制；核苷(酸)类似物通过抑制病毒dna多聚酶和逆转录酶的活性，同时竞争性抑制核苷酸进入病毒dna链，终止病毒dna链的延长，干扰病毒dna的合成，从而发挥抗病毒作用。

2、然而上述两大类药物均只能通过抑制病毒复制来延缓病情，治愈率非常有限，无法实现大范围的功能治愈，且多数使用口服药物的患者需要终生用药。部分患者在现有药物治疗过程中不少出现耐药。研究人员认为新型作用机制药物或成为唯一选择，因此，开发新型抗乙肝治疗方法毫无疑义成为当前迫切需求。

技术实现思路

1、本发明的主要目的在于提供一种新型小核酸偶联药物及其应用，可以有效解决背景技术中的问题。

2、为实现上述目的，本发明采取的技术方案为

3、提供一种具有增强抗乙型肝炎病毒活性的小干扰核酸(sirna)组，包括正义链和反义链组成的组，所述序列为aln-1、gbl-1、aro-x、aro-s中至少一组

4、

5、

6、进一步的，本发明还涉及一种小核酸偶联物，偶联物包括上述小核酸sirna序列的正义链或反义链中嵌入抗乙肝病毒的小分子片段，所述小分子片段选自恩替卡韦及其变体、替诺福韦等肝部疾病治疗的核苷类药物、具有核衣壳抑制功能的分子。

7、恩替卡韦单体通过磷酸二酯键或者硫代磷酸二酯键链接嵌入到核酸链中。进一步的，按照寡核苷酸固相合成方法，在正义链或者反义链的特定位置加入5’-保护的恩替卡韦亚磷酰胺中间体的乙腈溶液，单链合成完毕后再进行氨解切割步骤，得到rnai双链体。

8、所述“特定位置”为嵌入核酸序列正义或反义链中鸟苷单体所在的位置；嵌入方式为替换序列中的鸟苷单体。

9、所述小分子片段的数量并不特别限定，可以在任一条或者两条核酸链上一共插入1-5个，但可优选为1-4个，1-3个，1-2个，或1个。

10、进一步的，所述sirna双链体中可以包括开环结构的核苷单体agn，结构如

11、

12、所示；

13、进一步的，所述sirna与靶向配体共价连接。

14、所述靶向配体为galnac，结构如

15、

16、所示。

17、进一步的，所述靶向配体连接于所述sirna中的5’-端。

18、所述核衣壳抑制剂结构为

19、所示，通过磷酸键连接于所述sirna中反义链的5’-端。

20、具体的，本发明所涉及的小核酸偶联物结构如表5-表11其中任意一组单独编号的sirna组所示。

21、本发明还进一步涉及前述小核酸偶联物在制备治疗乙型肝炎药物中的应用，以及包含前述小核酸或小核酸偶联物的药物组合物。

22、有益效果

23、本发明研究内容利用已知具有抗乙肝病毒的小分子，结合hbv序列信息，通过共价化学键偶联方式，成为具有多种功能的小干扰核酸序列，与现有技术相比本发明具有如下有益效果：

24、1)既能“破坏”乙肝病毒复制环节中产生的mrna，阻止其继续表达为病毒蛋白；

25、2)将原来口服全身递送的小分子化合物，通过本技术靶向递送至肝部，继续并有组织选择性地发挥原有的抗乙肝病毒活性，降低小分子使用剂量，降低毒性；

26、3)得到靶向递送的小分子在肝部能够做到药物控释，均匀持久地释放药物，提高治疗效果。

27、通过以上技术，本方案能将大幅度降低机体病毒抗原的水平；给机体免疫力恢复以足够的空间，有望治疗hbv感染者，对于提高抗乙肝的功能性治愈具有现实意义。

技术特征：

1.一种增强抗乙型肝炎病毒活性的小干扰核酸(sirna)组，其特征在于，所述小干扰核酸包括正义链和反义链组成的组，所述序列为seq no.1-8所示的aln-1、gbl-1、aro-x、aro-s中至少一组

2.一种小核酸偶联物，其特征在于，所述偶联物包括在权利要求1所述的核酸序列的正义链或反义链中嵌入抗乙肝病毒的小分子片段，所述小分子片段选自恩替卡韦及其变体、替诺福韦及其变体等肝部疾病治疗的核苷类药物、具有核衣壳抑制功能的分子。

3.根据权利要求2所述的小核酸偶联物，所述恩替卡韦单体通过磷酸二酯键或者硫代磷酸二酯键链接嵌入到核酸链中；嵌入的位置为核酸序列正义或反义链中鸟苷单体所在的位置。

4.根据权利要求3所述的小核酸偶联物，所述正义或/和反义链中小分子片段的数量可以是在任一一条或者两条核酸链上一共插入1-5个，但可优选为1-4个，1-3个，1-2个，或1个。

5.根据权利要求2-4任一项所述的小核酸偶联物，所述sirna进一步与靶向配体共价连接。

6.根据权利要求5所述的小核酸偶联物，所述靶向配体为galnac，结构如

7.根据权利要求6所述的小核酸偶联物，进一步的，所述靶向配体连接于所述sirna的5’端。

8.根据权利要求2所述的小核酸偶联物，所述核衣壳抑制剂结构为

9.根据权利要求2-8所述的小核酸偶联物，其序列结构如表5-表11其中任意一组单独编号的sirna组所示。

10.根据权利要求1所述的小干扰核酸sirna或权利要求2-8中任一项所述的小核酸偶联物在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。

11.一种用于治疗乙型肝炎的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1所述的小干扰核酸sirna或权利要求2-8中任一项所述的小核酸偶联物。

技术总结
本发明公开了一种新型的偶联物及其治疗用途。具体为一种具有增强抗乙肝效果的小核酸序列以及其偶联物，该偶联物由具有治疗作用的小核酸序列和小分子药物组成，将通过化学方法将具有修饰的一种或几种小分子偶联在小核酸序列的特定位置。该偶联物能够保持小核酸序列和小分子药物原有的治疗效果，并能起到协同作用。并且，该偶联物具有控释能力，能够长久地发挥小分子药物原有的治疗作用。

技术研发人员：刘兆贵,张捷婷,赵维峰,丁彦伟,陈璞
受保护的技术使用者：纳肽得（青岛）生物医药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/24