一种2’-脱氧鸟苷的纯化方法与流程

本发明属于医药，涉及一种2’-脱氧鸟苷的纯化方法。

背景技术：

1、2’-脱氧鸟苷是一种天然的脱氧核苷，其结构与鸟苷相似，但少了一个位于核糖2’位置上的氧原子，因此称为2’-脱氧鸟苷。2’-脱氧鸟苷可作为中间体用于合成一些重要的分子标记物，dna氧化损伤与老化相关退行性疾病，如癌症、心血管疾病、糖尿病等密切相关，8-羟基-2’-脱氧鸟苷是重要的dna氧化标志物，其作为标准品广泛用于基因组学检测和分子诊断。核苷类似物和其衍生物干扰肿瘤细胞的生长和病毒的繁殖，核苷类药物是治疗癌症和各类病毒性疾病的一个新的发展方向，2’-脱氧鸟苷成为制备寡脱氧核苷酸类抗病毒、抗肿瘤核酸药物的重要原料。基于应用场景的快速拓展，2’-脱氧鸟苷成为需求量增幅较大，增速较快的原料药品种之一。

2、

3、生物酶法合成2’-脱氧鸟苷正在取代化学合成法成为制备方法的主流技术，此过程不需要保护活性基团，具有较高催化效率和立体特异性。如中国专利cn201510140553.1提供了一种制备2’-脱氧鸟苷的生物催化技术，其以β-胸苷和鸟嘌呤为原料，采用发酵乳杆菌菌体浆状物为生物催化剂，在聚乙二醇10000/磷酸氢二钾双水相系统下进行生物催化反应，得到2’-脱氧鸟苷产物。在生成2’-脱氧鸟苷的生物催化反应体系中，不仅包含生物催化剂、催化产物、副产物，还包含脱氧核糖受体、脱氧核糖供体和反应缓冲液等，从成分复杂的催化液中提取目标产物成为挑战。

4、中国专利申请cn201010611733.0使用乙酰短杆菌产生的核苷磷酸化酶催化合成2’-脱氧鸟苷后，催化液通过冷冻离心去除菌体和少量胸腺嘧啶沉淀物，经阴离子交换树脂分离，可获得2’-脱氧鸟苷。常规工艺中经常使用阴离子交换树脂、大孔树脂，固废量大，不易回收处理，而且所用树脂普遍存在选择性差、吸附量小、产品收率低等问题。

技术实现思路

1、本发明为了克服现有技术的不足，提供了一种2’-脱氧鸟苷的纯化方法，该方法采用超滤、纳滤与结晶相结合的纯化方法，显著提高生产效率，全过程不使用有机溶剂，对环境污染小，生产成本显著降低，产品纯度可达99％，该经济可行、工艺简单的2’-脱氧鸟苷纯化方法对工业化生产具有重要的实际意义。

2、为实现以上发明目的，本发明提供如下2’-脱氧鸟苷纯化技术方案：

3、步骤1、2’-脱氧鸟苷催化液固液分离，滤液使用超滤膜进行超滤，收集透出液；

4、步骤2、步骤1收集的透出液使用纳滤膜进行纳滤，收集浓缩液；

5、步骤3、步骤2收集的浓缩液降温结晶、过滤干燥。

6、其中，本发明所使用的2’-脱氧鸟苷催化液可由包含脱氧核糖受体、脱氧核糖供体、磷酸缓冲盐、核苷酸磷酸化酶等的反应体系催化所得，其中脱氧核糖受体可选自鸟嘌呤、鸟苷或鸟苷酸，脱氧核糖供体可选自2’-脱氧核糖、2’-脱氧核糖-1-磷酸，胸苷、2’-脱氧尿苷或2’-脱氧胞苷等，磷酸缓冲液为磷酸氢二钾缓冲液，为本领域常规催化技术。

7、步骤1中2’-脱氧鸟苷催化液固液分离，滤液使用超滤膜进行超滤，超滤膜截留分子量为5000da～15000da，优选10000da，超滤压力低于20mpa，环境温度低于30℃。

8、步骤2中步骤1收集的透出液使用纳滤膜进行纳滤，纳滤膜截留分子量为100da～300da，优选150da，纳滤压力低于20mpa，环境温度低于30℃。

9、步骤3中步骤2收集的浓缩液降温至4～10℃结晶6～10h，过滤干燥得到2’-脱氧鸟苷粗品。2’-脱氧鸟苷粗品使用10bv纯化水加热至50～60℃溶解，使用氢氧化钠调节ph至8～10，优选为9；降温至4～10℃结晶6～10h，过滤干燥得2’-脱氧鸟苷精品，纯度可达99％。

10、本发明提供的2’-脱氧鸟苷纯化方法简单，易于操作，易于工业化放大生产；而且全过程不使用有机溶剂，对环境污染小，生产成本显著降低；产品纯度可达99％，该经济可行、工艺简单的2’-脱氧鸟苷纯化方法对工业化生产具有重要的实际意义。

技术特征：

1.一种从催化液中提取2'-脱氧鸟苷的方法，其特征在于，

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，

7.根据权利要求1-6任意一项所述方法，其特征在于，

技术总结
本发明涉及2'‑脱氧鸟苷生产领域，公开了一种从2'‑脱氧鸟苷催化液中提取2'‑脱氧鸟苷的方法。该方法将2'‑脱氧鸟苷催化液超滤和纳滤；所得浓缩液降温结晶、过滤烘干，得到2'‑脱氧鸟苷粗品；粗品溶解、调节PH值、降温结晶、过滤烘干，得到2'‑脱氧鸟苷精品。本发明采用超滤、纳滤与结晶相结合的纯化方法，显著提高生产效率，全过程不使用有机溶剂，对环境污染小，生产成本显著降低，产品纯度可达99％，该经济可行、工艺简单的2'‑脱氧鸟苷纯化方法对工业化生产具有重要的实际意义。

技术研发人员：侯宏波,江枫,高庆峰,颜林江,陈斌,陈琳,张华弟,汤佳奇
受保护的技术使用者：杭州中美华东制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/7