一种具有吡咯丁胺骨架的酰胺类化合物及其制备方法与应用

本发明属于天然药物化学领域，具体涉及一种具有吡咯丁胺骨架的酰胺类化合物及其制备方法与应用。

背景技术：

1、华山参(physochlainae radix)是茄科泡囊草属植物漏斗泡囊草的干燥根，因主产于华山而得名，在陕西、河南、山西等省均有分布。华山参性温，味甘、微苦；具有温肺祛痰、平喘止咳、安神镇惊的功效，主要用于治疗寒痰喘咳，惊悸失眠等症，在民间常被用于治疗咳喘、肺痨。此外，华山参对于胃腹疼痛、神经衰弱、精神分裂等也有一定的疗效。

2、cn111848436a公开了从中药华山参中发现的一种新式ⅰ或ⅱ酰胺类化合物，并发现其可以用于制备creb激活剂药物，促进神经元发育、再生、突触形成及修复，促进学习记忆，以及抗焦虑或抗抑郁药物的前景。

3、然而，目前对于华山参中活性物质的研究并不多，对于其中发挥各种功效的活性物质还有待于进一步开发。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种新的酰胺类化合物及其制备方法与应用。该酰胺类化合物具有吡咯丁胺骨架结构，并具有抗炎活性，可用于制备治疗炎症疾病药物。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、第一方面，本发明提供一种酰胺类化合物，具有式(i)或式(ii)所示结构式：

4、

5、式(i)所示化合物：

6、分子式：c19h22n2o5；

7、esi-ms m/z：357.1473[m-h]-；

8、状态：淡黄色油状物；

9、比旋光度：

10、

11、式(ii)所示化合物：

12、分子式：c20h24n2o5；

13、esi-ms m/z：371.1607[m-h]-；

14、状态：淡黄色油状物；

15、比旋光度：

16、第二方面，本发明提供了所述酰胺类化合物的制备方法，包括如下步骤：

17、s1、采用乙醇浸提粉碎后的华山参，所得浸提液经浓缩得到粗浸膏；

18、s2、所述粗浸膏经水分散后，依次采用石油醚、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇进行萃取，得到正丁醇部位浸膏；

19、s3、所述正丁醇部位浸膏依次经正相硅胶柱色谱分离、反相ods柱色谱分离及制备型hplc分离纯化，得到式(i)或式(ii)所示酰胺类化合物。

20、步骤s1中，所述乙醇的体积浓度为50％-95％；优选体积浓度为70％，所述乙醇的用量为所述华山参重量的10-20倍。

21、所述浸提的温度为室温；所述浸提的次数为1-3次。

22、所述浸提液经减压浓缩得到粗浸膏；所述减压浓缩的温度为30-50℃。

23、步骤s2中，所述萃取的条件如下：

24、水与所述石油醚、所述乙酸乙酯和所述水饱和的正丁醇的体积比均为1：1～3：1～3：1～3；优选为1:1:1:1。

25、每种溶剂萃取的次数为2-5次。例如，所述粗浸膏加入蒸馏水分散均匀，随后依次用石油醚萃取2次，合并萃取物，经旋转蒸发仪减压浓缩，得到石油醚萃取物浸膏；然后用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取物，经旋转蒸发仪减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取物浸膏；再用水饱和的正丁醇萃取5次，合并萃取物，经旋转蒸发仪减压浓缩，得到正丁醇萃取物浸膏；蒸馏水与石油醚、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇的体积比为1:1:1:1。

26、步骤s3中，所述正丁醇部位浸膏经正相硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇为流动相进行梯度洗脱，洗脱比例依次为50:0，50:1，20:1，10:1，5:1，3:1，2:1，1:1，0:1，薄层色谱检识各洗脱液并合并相似流分，根据检测结果按照洗脱顺序，依次得到15个组分，标记为fr.1-15；

27、取组分fr.9依次经所述反相ods柱色谱和所述制备型hplc分离纯化，得到式(i)所示酰胺类化合物；

28、取组分fr.8依次经所述反相ods柱色谱和所述制备型hplc分离纯化，得到式(ⅱ)所示酰胺类化合物。

29、进一步地，所述正相硅胶柱色谱分离过程中，每一洗脱比例所述流动相的用量为2～4个柱体积，每一份洗脱液按所述柱体积的1/4为一份收集，得到120份洗脱液；

30、所述薄层色谱检识中，以10％硫酸-乙醇为显色剂，用薄层色谱在254nm、365nm紫外灯光下和日光下检测各个洗脱液，合并色谱行为相似的第1～4份、第5～9份、第10～14份、第15～22份、第23～31份、第32～47份、第48～56份、第57～68份、第69～86份、第87～94份、第95～102份、第103～108份、第109～113份、第114～118份、第119～120份洗脱液，按顺序依次得到组分fr.1-15。

31、优选地，在进行所述正相硅胶柱色谱分离前，先将正丁醇萃取物浸膏加入适量甲醇进行复溶，随后拌样于80～120目硅胶中，并湿法装柱、干法上样于装有200～300目硅胶的色谱柱中。

32、进一步地，所述式(i)所示酰胺类化合物的制备条件如下：

33、所述组分fr.9经所述反相ods柱色谱分离，以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱，洗脱浓度依次为10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，100％甲醇，薄层色谱检识各洗脱液并合并相似流分，根据检测结果按照洗脱顺序，依次得到组分fr.9a～9i；

34、取组分fr.9e经所述制备型hplc分离纯化，以甲醇-水为流动相，洗脱比例为47:53，得到式(i)所示酰胺类化合物。

35、所述反相ods柱色谱分离中，每一洗脱浓度所述流动相的用量为1～3个柱体积，每一份洗脱液按所述柱体积的1/5为一份收集，得到118份洗脱液；

36、所述薄层色谱检识中，以10％硫酸-乙醇为显色剂，用薄层色谱在254nm、365nm紫外灯光下和日光下检测各个洗脱液，合并色谱行为相似的第1～4份、第5～19份、第20～44份、第45～57份、第58～62份、第63～89份、第90～99份、第100～112份、第113～118份洗脱液，按顺序依次共得到9个组分，标记为组分fr.9a～9i；

37、进一步地，式(ii)所示酰胺类化合物的制备条件如下：

38、所述fr.8组分经所述反相ods柱色谱分离，以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱，浓度依次为10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，100％甲醇，薄层色谱检识各洗脱液并合并相似流分，根据检测结果按照洗脱顺序，依次得到组分fr.8a～8j；

39、取组分fr.8e经所述制备型hplc分离纯化，以甲醇-水为流动相，洗脱比例为57:43，得到式(ii)所示酰胺类化合物。

40、进一步地，所述反相ods柱色谱分离中，每一洗脱浓度所述流动相的用量为1～3个柱体积，每一份洗脱液按所述柱体积的1/4为一份收集，依顺序得到98份洗脱液；

41、所述薄层色谱检识中，以10％硫酸-乙醇为显色剂，用薄层色谱在254nm、365nm和日光下检测各个洗脱液，合并色谱行为相似的第1～3份、第4～16份、第17～29份、第30～47份、第48～54份、第55～62份、第63～78份、第79～85份、第86～91份、第92～98份洗脱液，按顺序共得到10个组分，标记为组分fr.8a～8j；

42、本发明中，所述制备液相色谱的色谱柱为c18柱。

43、第三方面，本发明还提供所述酰胺类化合物在制备治疗炎性疾病的药物中的应用；所述药物为前药或药学上可接受的盐。

44、优选地，所述药物为具有抑制lps诱导的巨噬细胞分泌炎性因子no功能的药物。

45、相比现有技术，本发明所取得的有益效果如下：

46、1、本发明首次从华山参中分离并鉴定出两个新酰胺类化合物，分别为physolamide a和physolamide b。新化合物physolamide a和physolamide b具有吡咯丁胺骨架，这是首次在茄科植物中发现具有该骨架类型的酰胺类化合物。

47、2、本发明通过三种分离方式相结合并优化洗脱比例，分离得到新化合物physolamide a和physolamide b。

48、3、本发明通过体外抗炎试验发现，化合物physolamide a和physolamide b对lps诱导的raw264.7炎症细胞的no释放具有抑制作用，因此化合物physolamide a和physolamide b在开发成抗炎药物方面存在潜力。