一种RNA检测系统及其用途的制作方法

文档序号:37803843发布日期:2024-04-30 17:14阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种rna检测系统,其特征在于,包含如下两个单元:

2.如权利要求1所述的rna检测系统,其特征在于,所述的cas13a选自lwacas13a、lbacas13a、lbucas13a、lshcas13a、lsecas13a、lbncas13a、camcas13a、cgacas13a、pprcas13a、lwecas13a或lbfcas13a,更优选lwacas13a。

3.如权利要求1所述的rna检测系统,其特征在于,所述的psdna为硫代修饰,其核苷酸序列如seq id no.1所示。

4.如权利要求1所述的rna检测系统,其特征在于,所述的blocker rna-psdna复合物是由blocker rna和psdna经杂交形成,其结构包括:第一互补区:a区,具有a个互补碱基数;第二互补区:b区,具有b个互补碱基数;茎环结构区:n区,具有n个“auc”片段重复数。

5.如权利要求4所述的rna检测系统,其特征在于,所述的a≥8,所述的b≥5,所述的n≥5;优选地,所述的a=8,所述的n=8,所述的b=6。

6.如权利要求5所述的rna检测系统,其特征在于,所述的blocker rna的核苷酸序列如seq id no.2所示。

7.如权利要求1所述的rna检测系统,其特征在于,所述的cas13a为lwacas13a,所述的靶标rna为mir-19b,所述的crrna为mir-19b-crrna,所述的mir-19b-crrna的核苷酸序列如seq id no.3所示;或者,

8.如权利要求1所述的rna检测系统,其特征在于,所述的dna荧光探针的5’端或3’端被荧光基团修饰;优选地,所述的dna荧光探针的5’端被fam修饰,其序列如seq id no.8所示;优选地,所述的dna荧光探针浓度为20-200nm。

9.如权利要求1所述的rna检测系统,其特征在于,所述的cas13a浓度为25-250nm;优选地,所述的cas13a与crrna的浓度比为1:1-1:4。

10.如权利要求1所述的rna检测系统,其特征在于,所述的聚多巴胺纳米微球的浓度为0.05-0.25mg/ml。

11.如权利要求1所述的rna检测系统,其特征在于,所述的dnasei核酸酶用量为0.1-1.0u。

12.如权利要求1-11任一项所述的rna检测系统在检测靶标rna中的用途,优选地,所述的靶标rna选自mir-19b、mir-17、mir-21、mir-155或sars-cov-2。

13.一种rna检测方法,其特征在于,所述的rna检测方法基于权利要求1-11任一项所述的rna检测系统,具体包括以下步骤:

14.如权利要求13所述的rna检测方法,其特征在于,所述的rna检测的反应温度为33-41℃,反应时间为30-120min。


技术总结
本发明提供了一种RNA检测系统及其用途,更具体涉及一种双核酸酶辅助的等温循环放大的一体化检测系统,以及基于该检测系统的RNA检测方法。该检测体系由基于Cas13a核酸酶的起始反应和基于PDANSs生物传感器的循环放大反应构成。可将起始反应和循环放大反应在单一反应腔体内进行集成,革除了对核酸扩增技术的依赖,是一种具有高灵敏度、高特异性的一体化RNA定量检测系统。

技术研发人员:徐志南,黄迪,司振军,方蒙君
受保护的技术使用者:杭州孚斯泰生物技术有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/4/29
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