猫主要过敏原蛋白表达、纯化和组合应用的制作方法

本申请涉及生物基因工程，具体而言，涉及一种猫主要过敏原蛋白表达、纯化及组合应用，尤其是涉及到组合物在降低猫过敏原方面的应用。

背景技术：

1、在欧洲和美国，动物过敏的发生频率在过去几十年里一直在上升，这是不可否认的。根据heinzerling等人2009年对来自14个欧洲国家17个中心的3034名患者进行的一项大型研究，猫类过敏原皮肤点刺试验(spt)阳性的平均频率为26.3％。猫是世界上最受欢迎和最常见的宠物之一，也是室内过敏原的重要来源。因此，对猫过敏是普遍存在的，在西方人群中发生率为10％-30％。人类ige识别出的家养猫(feld)过敏原总数为10种。feld1、feld4和feld7被认为是猫的主要过敏原。feld1分子量约35-38kda，它由两个相同的异质二聚体组成，每个18-19kda，非共价连接，最终形成四聚体。每个二聚体由两条多肽链，链1和链2组成，由三个二硫键共价连接，由两个不同的基因编码。事实上，94％的对猫过敏的患者都有对feld1特异的ige。feld1在皮脂腺、唾液腺、泪腺和肛门腺中产生，存在于唾液、眼泪、皮肤和皮毛中。feld4脂质运载蛋白，主要存在皮毛，上皮组织和唾液中，据报道指出：feld4引起的过敏为61-63％，是feld1之外的另一大过敏原。fel d 7，一个17.5kda的脂质运载蛋白。这些过敏原主要分布在猫的的皮屑、唾液、毛发、血清以及尿液中。过敏原主要通过空气从猫传播到环境中，如果被人吸入，可能导致过敏和诱发猫过敏。同时过敏是欧洲和美国最常见的慢性疾病，通常表现为鼻炎、结膜炎和哮喘等慢性疾病，极大影响爱猫人士生活。

2、目前治疗猫狗过敏的主要方法是过敏原特异性免疫疗法(sit)。然而，sit与猫过敏原提取物受到严重副作用的限制，在使用猫过敏原提取物进行特异性免疫治疗的患者中，有41％的患者出现了严重的副作用。因此，有必要提出新的免疫治疗方法，处理猫过敏症状。

技术实现思路

1、本申请的主要目的在于提供一种猫主要过敏原蛋白表达、纯化及组合应用，尤其是涉及到组合物在降低猫过敏原方面的应用，以解决目前的问题。

2、为了实现上述目的，本申请提供了如下技术：

3、本申请一方面，提出一种猫主要过敏原蛋白表达方法，包括如下步骤：

4、过敏原蛋白质序列的获取；

5、通过ncbi查找feld1、feld4及feld7蛋白质序列，，其中feld1的两个亚单位用ggggsg连接起来，结果如下：

6、feld1:eicpavkrdvdlfltgtpdeyveqvaqykalpvvlenarilkncvdakmteedkenalslldkiytsplcgggggsgvkmaetcpifydvffavangnellldlsltkvnatepertamkkiqdcyvenglisrvldglvmttissskdcmgeavqntvedlklntlgr；

7、feld4:heeenvvrsnidiskisgewysillasdvkekieengsmrvfvehikaldnsslsfvfhtkengkcteiflvadktkdgvytvvydgynvfsivetvydeyillhllnfdktrpfqlvefyarepdvsqklkekfvkycqehgivnildltevdrclqargsevaqdssve；

8、feld7:eicpavkrdvdlfltgtpdeyveqvaqykalpvvlenarilkncvdakmteedkenalslldkiytsplcgmkalllavglslitvlqaqdppasgedtmamsgkwylkamitdretswkkpelvtpmtltvleggnlkaettlltngqckevelilektsepkkyttyggkrvvyieptevkdhyifycegemqgeqarmaklvgrdpesneealenfreflrakgfnqeifspkqsghgrnpcppdlgsplpscrpplprllphpspvpt。

9、含目的蛋白的质粒bl21细菌的原核诱导表达。

10、目的蛋白293t细胞真核表达。

11、feld1、feld4及feld7蛋白的大量表达和纯化。

12、纯化feld1、feld4及feld7蛋白组合配苗，纯化鉴定好的蛋白按照不同的配比组合配苗。

13、基于过敏原蛋白进行卵黄抗体的制备方法。

14、猫主要过敏原feld1、feld4及feld7蛋白表达和纯化。

15、猫主要过敏原feld1、feld4及feld7在猫中降低过敏原方面的应用。

16、与现有技术相比较，本申请能够带来如下技术效果：

17、1、本申请通过查找并合成含目的蛋白的过敏原feld1和feld4及feld7蛋白的诱导表达，得到大量表达和纯化的feld1和feld4及feld7蛋白；将纯化蛋白feld1和feld4及feld7组合配苗进行配苗使用，旨在降低过敏原的分泌，从而降低人群对猫的过敏反应。

18、2、基于本申请卵黄抗体制剂的使用，用过敏原重组蛋白疫苗免疫蛋鸡获取鸡蛋制备卵黄抗体制剂拌料喂养猫后，采集喂养前和喂养后的唾液中的样本，使用夹心elisa方法进行检测，结果显示比喂养前过敏原减低50％。

19、3、本发明卵黄抗体制剂免疫途径由注射途径变为方便操作的饲喂途径，同时有效降低宠物猫身上的过敏原，为广大爱猫人士带来了极大的福祉。

技术特征：

1.一种猫主要过敏原蛋白表达方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.含权利要求1的目的蛋白的质粒bl21细菌的原核诱导表达。

3.权利要求1的目的蛋白293t细胞真核表达。

4.权利要求1的feld1、feld4及feld7蛋白的大量表达和纯化。

5.权利要求1的纯化feld1、feld4及feld7蛋白组合配苗，纯化鉴定好的蛋白按照不同的配比组合配苗。

6.基于权利要求1的过敏原蛋白进行卵黄抗体的制备方法。

7.猫主要过敏原feld1、feld4及feld7蛋白表达和纯化。

8.权利要求7所述的猫主要过敏原feld1、feld4及feld7在猫中降低过敏原方面的应用。

技术总结
本申请公开了一种猫主要过敏原蛋白表达、纯化和组合应用，通过查找并合成含目的蛋白的过敏原Feld1、Feld4及Feld7蛋白的诱导表达，得到大量表达和纯化的Feld1、Feld4蛋白及Feld7；将纯化蛋白Feld1、Feld4及Feld7组合配苗进行蛋鸡免疫，获取鸡蛋制备卵黄抗体制剂喂养宠物猫，旨在降低猫过敏原的分泌，从而降低人群对猫的过敏反应。本申请用过敏原重组蛋白免疫蛋鸡制备的卵黄抗体拌料喂养猫后，结果显示喂养后比喂养前过敏原减低50％。本发明卵黄抗体使用方法由注射途径变为方便操作的饲喂途径，同时有效降低宠物猫身上的过敏原，为广大爱猫人士带来了极大的福祉。

技术研发人员：黄金安,宋春雨,陈小娟
受保护的技术使用者：浙江鼎持生物制品有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16