一种抗烟草花叶病毒单克隆抗体及其应用的制作方法

本发明涉及烟草花叶病毒的检测，具体涉及一种抗烟草花叶病毒单克隆抗体及其应用。

背景技术：

1、烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus，tmv)是一种分布广泛、寄主范围广的植物病毒，最早于1857年就曾被swieten在烟草生长的反常现象中发现，并记载了感染此病毒的植物病理特征；1886年mayer首次将此病毒病命名为“mosaic”，并且通过一系列实验证明了此病毒具有传染性；直到1939年，德国的科学家kausche等利用电子显微镜技术第一次观察到了tmv的杆状病毒颗粒；此后的许多年里，各国科学家相继发现并报道了此病毒造成的植物疾病，同时也发现了许多与之相关的植物病毒与病害。tmv引起的病害在全世界烟叶种植地区均有发生，在我国也广泛存在此病害，其中黑龙江、辽宁、吉林、山东、河南、安徽、福建、四川、云南、广东等省受害较为严重。tmv的寄主范围非常广，除烟草外，在自然条件下还能侵害番茄、马铃薯、茄子、辣椒、菊花、桃等植物。经实验接种鉴定，tmv可以感染的植物达到350种之多。

2、随着实验技术的发展，检测tmv的手段也日趋多样化。单纯地从植物病理特征来判断，一般要等到有发病的初期症状才能进行，而且这种判断常常受到诸多外界客观因素的制约与干扰，被发现的带病植株已经有了不同程度的损害或已经造成了一定范围内的经济损失。目前常用的烟草花叶病毒检测方法有直接观察法、电子显微镜检测法、生物学检测法、血清学检测法和分子生物学检测法等，但存在准确性低、灵敏度低、检测时间长、对检测者有专业的技能要求、专业仪器昂贵等缺点。免疫检测技术具有操作简便、快速、灵敏、特异等优点，在脱毒种植生产和田间调查中应用前景广阔。因此，制备特异性强、灵敏度高及专化性强的抗体，建立一套灵敏、快速的tmv免疫学检测方法对该病毒的监控和防治具有重要的意义。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种抗烟草花叶病毒单克隆抗体，对烟草花叶病毒具有较高亲和力、检测灵敏度高，为后续烟草花叶病毒免疫分析方法的研发推广奠定基础。

2、为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：

3、本发明提供一种抗烟草花叶病毒单克隆抗体，其包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包括如seq id no.1所示的重链cdr1、seq id no.2所示的重链cdr2和seqid no.3所示的重链cdr3，所述轻链可变区包括如seq id no.4所示的轻链cdr1、seq idno.5所示的轻链cdr2和seq id no.6所示的轻链cdr3。

4、优选的，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.8所示。

5、本发明提供一种核酸分子，其包含编码上述抗烟草花叶病毒单克隆抗体的核苷酸。

6、优选的，核酸分子编码单克隆抗体重链可变区的核苷酸序列如seq id no.9所示，编码单克隆抗体轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.10所示。

7、本发明还提供了上述抗烟草花叶病毒单克隆抗体在检测烟草花叶病毒中的应用。

8、优选的，上述抗烟草花叶病毒单克隆抗体可用于烟草花叶病毒免疫检测分析中。

9、优选的，所述的烟草花叶病毒免疫检测包括但不限于elisa试剂盒和胶体金试纸条。

10、与现有技术相比，本发明的至少具有以下有益效果之一：

11、本发明提供的抗烟草花叶病毒单克隆抗体可以特异性地识别烟草花叶病毒，其抗体效价达到了1:270000以上，对烟草花叶病毒具有较好的特异性，可作为酶联免疫检测和胶体金免疫检测的原料，为后续烟草花叶病毒免疫分析方法的研发推广奠定了基础。

技术特征：

1.一种抗烟草花叶病毒单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区；

2.根据权利要求1所述的一种抗烟草花叶病毒单克隆抗体，其特征在于：所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.8所示。

3.一种核酸分子，其特征在于：核酸分子编码如权利要求1或2所述的抗烟草花叶病毒单克隆抗体的核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子编码抗烟草花叶病毒单克隆抗体重链可变区的核苷酸序列如seq id no.9所示，所述核酸分子编码抗烟草花叶病毒单克隆抗体轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.10所示。

5.权利要求1-2任一一项所述的抗烟草花叶病毒单克隆抗体在检测烟草花叶病毒中的应用。

技术总结
本发明公开了一种抗烟草花叶病毒单克隆抗体，所述单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包括如SEQ ID No.1所示的重链CDR1、SEQ ID No.2所示的重链CDR2和SEQ ID No.3所示的重链CDR3，所述轻链可变区包括如SEQ ID No.4所示的轻链CDR1、SEQ ID No.5所示的轻链CDR2和SEQ ID No.6所示的轻链CDR3。本发明的抗烟草花叶病毒单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高等特点，为后续烟草花叶病毒免疫分析方法的研发推广奠定了基础。

技术研发人员：王春琼,陈丹,张轲,张晓伟,蔡洁云,秦世春,孙浩巍,龙杰,李郸,魏佳,顾健龙,杨艺敏
受保护的技术使用者：云南省烟草质量监督检测站
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12