从桑白皮中同时制备脱氧野尻霉素、绿原酸和桑色素的方法与流程

1.本发明涉及脱氧野尻霉素、绿原酸和桑色素的同时提取的方法，具体涉及一种从桑白皮中同时制备脱氧野尻霉素、绿原酸和桑色素的方法。


背景技术：

2.桑白皮为桑科植物桑的干燥根皮，别名桑根白皮、桑根皮、桑皮、白桑皮，主要用于肺热喘咳，主要是肺热引起的气喘，止咳效果相对较弱或不明显，主要是肺息安静下来，肝寒，略有偏于养阴倾向性，所以是肺热盛，肺阴初伤最合适的药，一般儿科中用它清肺平喘。
3.桑白皮中含有脱氧野尻霉素、桑色素、芦丁、白藜芦醇、东莨菪内酯、绿原酸等化学成分。脱氧野尻霉素(1-dnj)属于强效α-葡萄糖苷酶抑制剂，可以有效抑制人体糖分的转化，降低血液中的糖含量；绿原酸亦称“绿吉酸”、“咖啡单宁酸”、“咖啡鞣酸”，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物，为咖啡酰奎尼酸衍生物，有弱酸味并具收敛性，25℃时在水中溶解度为4％，较易溶于热水，溶于乙醇、丙酮，微溶于乙酸乙酯，不溶于氯仿、乙醚和二硫化碳，抗氧化能力强，还具有抗艾滋病毒、抗肿瘤细胞、抗菌、提高中枢兴奋、利胆、抗致畸、抗过敏及调节细胞色素p450连接酶的活性等功能。
4.桑色素是从黄桑木、桑橙树等桑科植物的树皮和许多中草药中提取的一种浅黄色色素，化学结构特点是含氧的杂环连接两个芳香环，通常为黄色或灰黄色针状结晶，久置空气中易氧化为棕色，熔点285℃～290℃(分解)，微溶于水。可抑制酶活性、具有抗氧化、抗痛、抗菌、抗炎、抗动脉粥样硬化、降低血糖和抗应激等作用。
5.桑白皮中目前主要用于提取脱氧野尻霉素，对于桑白中的绿原酸和桑色素提取的较少，较多是进行桑白皮中绿原酸和桑色素含量的检测报道，单一的对脱氧野尻霉素、绿原酸、桑色素的某一成分提取纯化，导致原料中另外两个成分的浪费，使得原料未被充分利用。


技术实现要素：

6.为解决现有对桑白皮中单一成分的提取，导致有效成分的浪费的技术问题，本发明提出一种从桑白皮中同时制备脱氧野尻霉素、绿原酸和桑色素的方法。
7.本发明提供的技术方案为：
8.一种从桑白皮中同时制备脱氧野尻霉素、绿原酸和桑色素的方法，其特殊之处在于，包括以下步骤：
9.s1、取干燥桑白皮原料粉碎，按照桑白皮原料质量：醇提取溶液体积＝1g：(8～10)ml加入醇提取溶液，加热提取获得桑白皮提取液，桑白皮提取液浓缩至无醇，获得桑白皮浓缩提取液；
10.s2、按照体积比，在桑白皮浓缩提取液中加入1～3倍量的纯水稀释，获得桑白皮预制层析液；
11.取桑白皮原料质量1/2～2/3倍量的大孔吸附树脂，制备大孔吸附树脂层析柱；
12.将桑白皮预制层析液加入大孔吸附树脂层析柱，收集吸附流出液；纯水洗脱至洗脱液中无脱氧野尻霉素，合并吸附流出液和纯水洗脱液为脱氧野尻霉素提取液；
13.继续采用15-25％的乙醇洗脱至洗脱液不含绿原酸，收集15-25％的乙醇洗脱液为绿原酸提取液；
14.继续采用70-90％的乙醇洗脱至洗脱液不含桑色素，收集70-90％的乙醇洗脱液为桑色素提取液；
15.s3、分别对脱氧野尻霉素提取液、绿原酸提取液及桑色素提取液去杂纯化获得脱氧野尻霉素产品、绿原酸产品及桑色素产品。
16.进一步地，步骤s3中，对脱氧野尻霉素提取液去杂纯化具体为：采用阳离子交换树脂层析柱纯化法对脱氧野尻霉素提取液进行纯化1-3次，获得脱氧野尻霉素浓缩提取液；按质量计，加入1-3％脱氧野尻霉素浓缩提取液质量的活性炭，65-75℃下搅拌脱色40-60min，抽滤，获得脱色液在真空度为-0.08mpa
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0.06mpa，温度为65℃-75℃下干燥，获得脱氧野尻霉素产品。
17.进一步地，步骤s3中，采用阳离子交换树脂层析柱纯化法对脱氧野尻霉素提取液进行纯化具体为：
18.取桑白皮原料质量的1/3～1/2倍量的阳离子交换树脂，制备阳离子交换树脂层析柱；将脱氧野尻霉素提取液加入阳离子交换树脂层析柱，纯水洗脱2-3bv；继续采用体积分数1％-2％的氨水洗脱，洗脱至洗脱液中无脱氧野尻霉素，将收集的氨水洗脱液在真空度为-0.08mpa
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0.06mpa，温度为55℃-65℃下浓缩至比重为1.10-1.15，加纯水继续浓缩至中性，完成一次纯化。
19.进一步地，步骤s3中，对绿原酸提取液去杂纯化具体为：将绿原酸提取液浓缩至比重为1.13-1.18，按体积计，加入4-6倍量的乙酸乙酯，在25-28℃下搅拌萃取30-40min并分液，萃取3-5次，合并乙酸乙酯相，浓缩至乙酸乙酯相总体积的1/10-1/8，在25-28℃下，静置结晶20-26h，采用体积分数为95-98％的乙醇漂洗结晶，在真空度-0.08mpa
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0.06mpa和温度65℃-75℃下干燥，获得绿原酸产品。
20.进一步地，步骤s3中，对桑色素提取液去杂纯化具体为：将桑色素提取液浓缩至无醇后，按体积计，加入1.5-2.5倍的纯水，获得桑色素稀释提取液；按照体积比，桑色素稀释提取液：萃取剂＝1：(3-5)，于25-28℃下搅拌萃取20-30min并分液，萃取3-5次，合并萃取剂相，浓缩至萃取剂相总体积的1/8-1/6，获得桑色素萃取液；
21.将桑色素萃取液加入聚酰胺树脂层析柱，聚酰胺树脂层析柱中的聚酰胺树脂质量为桑白皮原料质量的1/6-1/5；采用体积分数为30％、60％、80％的乙醇溶液进行梯度洗脱，并用高效液相色谱检测洗脱液，收集含有桑色素的洗脱液浓缩至洗脱液总体积的1/12-1/10，在温度25-28℃下放置结晶20-26h，抽滤结晶，采用体积分数95-98％的乙醇漂洗结晶，于温度为55℃，真空压力-0.09mpa
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0.07mpa下真空干燥，获得桑色素产品。
22.进一步地，步骤s3中，萃取剂为乙酸乙酯或二氯甲烷或正丁醇或正己烷或石油醚或环己烷；或者是乙酸乙酯、二氯甲烷、正丁醇中的任一种分别与正己烷、石油醚、环己烷中的任一种组合。
23.进一步地，步骤s1中，醇提取溶液为甲醇或乙醇，甲醇与乙醇的体积分数均为70～80％；
24.提取条件为70～80℃下提取2～4次，每次1.5～2.5h，合并后获得桑白皮提取液。
25.进一步地，步骤s2中，大孔吸附树脂为lx-38树脂或lx-18树脂或lx-15树脂或ab-8树脂。
26.本发明的有益效果：
27.1、本发明提出的一种从桑白皮中同时制备脱氧野尻霉素、绿原酸和桑色素的方法，使用乙醇进行原料的提取，然后上大孔吸附树脂，根据脱氧野尻霉素、绿原酸和桑色素的性质，依次用水、15-25％乙醇、70-90％乙醇进行洗脱，分别收集水溶性洗脱液，低醇溶性洗脱液，高醇溶性洗脱液。通过跟踪检测得出，三者的洗脱液中各自的成分都被洗脱出来，达到了很好的分离效果。
28.2、本发明通过联合提取纯化的方式，进行了桑白皮中的脱氧野尻霉素、绿原酸和桑色素的提取纯化，最终都得到三种产品，在提取纯化步骤上节省了大量的工艺，即节省了人力、物理、财力，大大降低了成本，使得桑白皮原料以及在提取某一成分时产生的废料都能被充分的利用。
附图说明
29.图1为本发明从桑白皮中同时制备脱氧野尻霉素、绿原酸和桑色素的方法实施例流程图；
30.图2为本发明实施例1中脱氧野尻霉素hplc检测结果示意图；
31.图3为本发明实施例1中绿原酸hplc检测结果示意图；
32.图4为本发明实施例1中桑色素hplc检测结果示意图。
具体实施方式
33.以下结合具体实施例进一步说明。
34.实施例1
35.参见图1，取干燥桑白皮原料100kg粉碎，加入1000l体积分数75％的乙醇，在70℃下提取3次，每次2h，合并后获得桑白皮提取液，桑白皮提取液在-0.08mpa
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0.06mpa、温度为75℃下浓缩至无醇，获得桑白皮浓缩提取液；按照体积比，在桑白皮浓缩提取液中加入2倍量的纯水稀释，获得桑白皮预制层析液。
36.取50kg lx-38大孔吸附树脂，制备大孔吸附树脂层析柱；将桑白皮预制层析液加入大孔吸附树脂层析柱，收集吸附流出液；纯水洗脱至洗脱液中无脱氧野尻霉素，合并吸附流出液和纯水洗脱液为脱氧野尻霉素提取液；继续采用20％的乙醇洗脱至洗脱液不含绿原酸，收集20％的乙醇洗脱液为绿原酸提取液；继续采用80％的乙醇洗脱至洗脱液不含桑色素，收集80％的乙醇洗脱液为桑色素提取液。
37.制备脱氧野尻霉素产品：取40kg的001*7阳离子交换树脂，制备阳离子交换树脂层析柱；将脱氧野尻霉素提取液加入阳离子交换树脂层析柱，纯水洗脱2-3bv；继续采用体积分数1％的氨水洗脱，洗脱至洗脱液中无脱氧野尻霉素，将收集的氨水洗脱液在真空度为-0.08mpa
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0.06mpa，温度为60℃下浓缩至比重为1.10-1.15，加纯水继续浓缩至中性，完成1次纯化，重复纯化1次，获得脱氧野尻霉素浓缩提取液；按质量计，加入2％脱氧野尻霉素浓缩提取液质量的活性炭，70℃下搅拌脱色40min，抽滤，获得脱色液在真空度为-0.08mpa
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0.08mpa
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0.06mpa，温度为70℃下干燥，获得379.4g脱氧野尻霉素粉末，收率为0.379％；通过hplc检测：脱氧野尻霉素含量为65.26％。
47.制备绿原酸产品：将绿原酸提取液浓缩至比重为1.13-1.18，按体积计，加入4倍量的乙酸乙酯，在25℃下搅拌萃取30min并分液，萃取4次，合并乙酸乙酯相，浓缩至乙酸乙酯相总体积的1/10，在25℃下，静置结晶24h，采用体积分数为95％的乙醇漂洗结晶，在真空度-0.08mpa
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0.06mpa和温度70℃下干燥，获得122.4g绿原酸粉末，收率为0.122％；通过hplc检测：绿原酸含量为28.63％。
48.制备桑色素产品：将桑色素提取液浓缩至无醇后，按体积计，加入2倍的纯水，获得桑色素稀释提取液；按照体积比，桑色素稀释提取液：二氯甲烷＝1：4，于26℃下搅拌萃取30min并分液，萃取4次，合并二氯甲烷相，浓缩至二氯甲烷相总体积的1/6获得桑色素萃取液；将桑色素萃取液加入聚酰胺树脂层析柱，聚酰胺树脂层析柱中的聚酰胺树脂质量为20kg；采用体积分数为30％、60％、80％的乙醇溶液进行梯度洗脱，并用高效液相色谱检测洗脱液，收集含有桑色素的洗脱液浓缩至洗脱液总体积的1/10，在温度25℃下放置结晶24h，抽滤结晶，采用体积分数95％的乙醇漂洗结晶，于温度为65℃，真空压力-0.09mpa-[0049]-0.07mpa下真空干燥，获得97.1g桑色素粉末，收率为0.097％；通过hplc检测：桑色素含量为26.41％。
[0050]
实施例3
[0051]
取干燥桑白皮原料100kg粉碎，加入1000l体积分数70％的乙醇，在80℃下提取3次，每次1.5h，合并后获得桑白皮提取液，桑白皮提取液在-0.08mpa
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0.06mpa、温度为75℃下浓缩至无醇，获得桑白皮浓缩提取液；按照体积比，在桑白皮浓缩提取液中加入2倍量的纯水稀释，获得桑白皮预制层析液。
[0052]
取50kg lx-15大孔吸附树脂，制备大孔吸附树脂层析柱；将桑白皮预制层析液加入大孔吸附树脂层析柱，收集吸附流出液；纯水洗脱至洗脱液中无脱氧野尻霉素，合并吸附流出液和纯水洗脱液为脱氧野尻霉素提取液；继续采用20％的乙醇洗脱至洗脱液不含绿原酸，收集20％的乙醇洗脱液为绿原酸提取液；继续采用80％的乙醇洗脱至洗脱液不含桑色素，收集80％的乙醇洗脱液为桑色素提取液。
[0053]
制备脱氧野尻霉素产品：取35kg的001*7阳离子交换树脂，制备阳离子交换树脂层析柱；将脱氧野尻霉素提取液加入阳离子交换树脂层析柱，纯水洗脱2-3bv；继续采用体积分数2％的氨水洗脱，洗脱至洗脱液中无脱氧野尻霉素，将收集的氨水洗脱液在真空度为-0.08mpa
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0.06mpa，温度为60℃下浓缩至比重为1.10-1.15，加纯水继续浓缩至中性，完成1次纯化，重复纯化1次，获得脱氧野尻霉素浓缩提取液；按质量计，加入1％脱氧野尻霉素浓缩提取液质量的320活性炭，70℃下搅拌脱色40min，抽滤，获得脱色液在真空度为-0.08mpa
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0.06mpa，温度为70℃下干燥，获得380.5g脱氧野尻霉素粉末，收率为0.38％；通过hplc检测：脱氧野尻霉素含量为64.13％。
[0054]
制备绿原酸产品：将绿原酸提取液浓缩至比重为1.13-1.18，按体积计，加入6倍量的乙酸乙酯，在25℃下搅拌萃取30min并分液，萃取3次，合并乙酸乙酯相，浓缩至乙酸乙酯相总体积的1/9，在25℃下，静置结晶24h，采用体积分数为96％的乙醇漂洗结晶，在真空度-0.08mpa
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0.06mpa和温度70℃下干燥，获得129.2g绿原酸粉末，收率为0.129％；通过hplc检测：绿原酸含量为27.82％。
[0063]-0.07mpa下真空干燥，获得30.30g桑色素粉末，收率为0.101％；通过hplc检测：桑色素含量为27.08％。
[0064]
实施例5
[0065]
取干燥桑白皮原料30kg粉碎，加入240l体积分数80％的甲醇，在75℃下提取4次，每次2h，合并后获得桑白皮提取液，桑白皮提取液在-0.08mpa
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0.06mpa、温度为75℃下浓缩至无醇，获得桑白皮浓缩提取液；按照体积比，在桑白皮浓缩提取液中加入3倍量的纯水稀释，获得桑白皮预制层析液。
[0066]
取18kg lx-18大孔吸附树脂，制备大孔吸附树脂层析柱；将桑白皮预制层析液加入大孔吸附树脂层析柱，收集吸附流出液；纯水洗脱至洗脱液中无脱氧野尻霉素，合并吸附流出液和纯水洗脱液为脱氧野尻霉素提取液；继续采用18％的乙醇洗脱至洗脱液不含绿原酸，收集18％的乙醇洗脱液为绿原酸提取液；继续采用85％的乙醇洗脱至洗脱液不含桑色素，收集85％的乙醇洗脱液为桑色素提取液。
[0067]
制备脱氧野尻霉素产品：取10kg的001*7阳离子交换树脂，制备阳离子交换树脂层析柱；将脱氧野尻霉素提取液加入阳离子交换树脂层析柱，纯水洗脱2-3bv；继续采用体积分数1.5％的氨水洗脱，洗脱至洗脱液中无脱氧野尻霉素，将收集的氨水洗脱液在真空度为-0.08mpa
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0.06mpa，温度为65℃下浓缩至比重为1.10-1.15，加纯水继续浓缩至中性，完成1次纯化，重复纯化2次，获得脱氧野尻霉素浓缩提取液；按质量计，加入2％脱氧野尻霉素浓缩提取液质量的森环活性炭，75℃下搅拌脱色60min，抽滤，获得脱色液在真空度为-0.08mpa
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0.06mpa，温度为75℃下干燥，获得115.80g脱氧野尻霉素粉末，收率为0.386％；通过hplc检测：脱氧野尻霉素含量为64.17％。
[0068]
制备绿原酸产品：将绿原酸提取液浓缩至比重为1.13-1.18，按体积计，加入5倍量的乙酸乙酯，在26℃下搅拌萃取35min并分液，萃取5次，合并乙酸乙酯相，浓缩至乙酸乙酯相总体积的1/8，在27℃下，静置结晶26h，采用体积分数为98％的乙醇漂洗结晶，在真空度-0.08mpa
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0.06mpa和温度75℃下干燥，获得36.30g绿原酸粉末，收率为0.121％；通过hplc检测：绿原酸含量为28.52％。
[0069]
制备桑色素产品：将桑色素提取液浓缩至无醇后，按体积计，加入1.5倍的纯水，获得桑色素稀释提取液；按照体积比，桑色素稀释提取液：萃取剂＝1：5，于27℃下搅拌萃取25min并分液，萃取5次，萃取剂为乙酸乙酯和环己烷混合液，合并萃取剂相，浓缩至萃取剂相总体积的1/7，获得桑色素萃取液；将桑色素萃取液加入聚酰胺树脂层析柱，聚酰胺树脂层析柱中的聚酰胺树脂质量为5kg；采用体积分数为30％、60％、80％的乙醇溶液进行梯度洗脱，并用高效液相色谱检测洗脱液，收集含有桑色素的洗脱液浓缩至洗脱液总体积的1/11，在温度26℃下放置结晶22h，抽滤结晶，采用体积分数98％的乙醇漂洗结晶，于温度为70℃，真空压力-0.09mpa
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0.07mpa下真空干燥，获得29.40g桑色素粉末，收率为0.098％；通过hplc检测：桑色素含量为26.48％。
[0070]
实施例6
[0071]
取干燥桑白皮原料60kg粉碎，加入600l体积分数75％的甲醇，在80℃下提取3次，每次1.5h，合并后获得桑白皮提取液，桑白皮提取液在-0.08mpa
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0.06mpa、温度为75℃下浓缩至无醇，获得桑白皮浓缩提取液；按照体积比，在桑白皮浓缩提取液中加入3倍量的纯水稀释，获得桑白皮预制层析液。
[0072]
取30kg ab-8大孔吸附树脂，制备大孔吸附树脂层析柱；将桑白皮预制层析液加入大孔吸附树脂层析柱，收集吸附流出液；纯水洗脱至洗脱液中无脱氧野尻霉素，合并吸附流出液和纯水洗脱液为脱氧野尻霉素提取液；继续采用24％的乙醇洗脱至洗脱液不含绿原酸，收集24％的乙醇洗脱液为绿原酸提取液；继续采用75％的乙醇洗脱至洗脱液不含桑色素，收集75％的乙醇洗脱液为桑色素提取液。
[0073]
制备脱氧野尻霉素产品：取20kg的001*7阳离子交换树脂，制备阳离子交换树脂层析柱；将脱氧野尻霉素提取液加入阳离子交换树脂层析柱，纯水洗脱2-3bv；继续采用体积分数1.5％的氨水洗脱，洗脱至洗脱液中无脱氧野尻霉素，将收集的氨水洗脱液在真空度为-0.08mpa
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0.06mpa，温度为55℃下浓缩至比重为1.10-1.15，加纯水继续浓缩至中性，完成1次纯化，重复纯化1次，获得脱氧野尻霉素浓缩提取液；按质量计，加入2％脱氧野尻霉素浓缩提取液质量的320活性炭，75℃下搅拌脱色55min，抽滤，获得脱色液在真空度为-0.08mpa
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0.06mpa，温度为65℃下干燥，获得225.60g脱氧野尻霉素粉末，收率为0.376％；通过hplc检测：脱氧野尻霉素含量为62.78％。
[0074]
制备绿原酸产品：将绿原酸提取液浓缩至比重为1.13-1.18，按体积计，加入4倍量的乙酸乙酯，在28℃下搅拌萃取35min并分液，萃取45次，合并乙酸乙酯相，浓缩至乙酸乙酯相总体积的1/8，在26℃下，静置结晶22h，采用体积分数为97％的乙醇漂洗结晶，在真空度-0.08mpa
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0.06mpa和温度75℃下干燥，获得76.20g绿原酸粉末，收率为0.127％；通过hplc检测：绿原酸含量为27.90％。
[0075]
制备桑色素产品：将桑色素提取液浓缩至无醇后，按体积计，加入2.5倍的纯水，获得桑色素稀释提取液；按照体积比，桑色素稀释提取液：萃取剂＝1：3，于25℃下搅拌萃取22min并分液，萃取5次，萃取剂为正丁醇和正己烷混合液，合并萃取剂相，浓缩至萃取剂相总体积的1/7，获得桑色素萃取液；将桑色素萃取液加入聚酰胺树脂层析柱，聚酰胺树脂层析柱中的聚酰胺树脂质量为12kg；采用体积分数为30％、60％、80％的乙醇溶液进行梯度洗脱，并用高效液相色谱检测洗脱液，收集含有桑色素的洗脱液浓缩至洗脱液总体积的1/10，在温度26℃下放置结晶26h，抽滤结晶，采用体积分数95％的乙醇漂洗结晶，于温度为70℃，真空压力-0.09mpa
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0.07mpa下真空干燥，获得58.80g桑色素粉末，收率为0.098％；通过hplc检测：桑色素含量为25.31％。
[0076]
实施例7
[0077]
取干燥桑白皮原料60kg粉碎，加入600l体积分数70％的甲醇，在70℃下提取4次，每次2.5h，合并后获得桑白皮提取液，桑白皮提取液在-0.08mpa
‑‑
0.06mpa、温度为75℃下浓缩至无醇，获得桑白皮浓缩提取液；按照体积比，在桑白皮浓缩提取液中加入1倍量的纯水稀释，获得桑白皮预制层析液。
[0078]
取40kg lx-38大孔吸附树脂，制备大孔吸附树脂层析柱；将桑白皮预制层析液加入大孔吸附树脂层析柱，收集吸附流出液；纯水洗脱至洗脱液中无脱氧野尻霉素，合并吸附流出液和纯水洗脱液为脱氧野尻霉素提取液；继续采用25％的乙醇洗脱至洗脱液不含绿原酸，收集25％的乙醇洗脱液为绿原酸提取液；继续采用80％的乙醇洗脱至洗脱液不含桑色素，收集80％的乙醇洗脱液为桑色素提取液。
[0079]
制备脱氧野尻霉素产品：取25kg的001*7阳离子交换树脂，制备阳离子交换树脂层析柱；将脱氧野尻霉素提取液加入阳离子交换树脂层析柱，纯水洗脱2-3bv；继续采用体积
分数1％的氨水洗脱，洗脱至洗脱液中无脱氧野尻霉素，将收集的氨水洗脱液在真空度为-0.08mpa
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0.06mpa，温度为60℃下浓缩至比重为1.10-1.15，加纯水继续浓缩至中性，完成1次纯化，重复纯化1次，获得脱氧野尻霉素浓缩提取液；按质量计，加入1％脱氧野尻霉素浓缩提取液质量的320活性炭，70℃下搅拌脱色45min，抽滤，获得脱色液在真空度为-0.08mpa
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0.06mpa，温度为70℃下干燥，获得235.20g脱氧野尻霉素粉末，收率为0.392％；通过hplc检测：脱氧野尻霉素含量为64.96％。
[0080]
制备绿原酸产品：将绿原酸提取液浓缩至比重为1.13-1.18，按体积计，加入6倍量的乙酸乙酯，在25℃下搅拌萃取35min并分液，萃取4次，合并乙酸乙酯相，浓缩至乙酸乙酯相总体积的1/10，在25℃下，静置结晶25h，采用体积分数为95％的乙醇漂洗结晶，在真空度-0.08mpa
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0.06mpa和温度65℃下干燥，获得75.60g绿原酸粉末，收率为0.126％；通过hplc检测：绿原酸含量为28.95％。
[0081]
制备桑色素产品：将桑色素提取液浓缩至无醇后，按体积计，加入2.5倍的纯水，获得桑色素稀释提取液；按照体积比，桑色素稀释提取液：萃取剂＝1：4，于26℃下搅拌萃取28min并分液，萃取4次，萃取剂为二氯甲烷和石油醚的混合液，合并萃取剂相，浓缩至萃取剂相总体积的1/8，获得桑色素萃取液；将桑色素萃取液加入聚酰胺树脂层析柱，聚酰胺树脂层析柱中的聚酰胺树脂质量为12kg；采用体积分数为30％、60％、80％的乙醇溶液进行梯度洗脱，并用高效液相色谱检测洗脱液，收集含有桑色素的洗脱液浓缩至洗脱液总体积的1/10，在温度25℃下放置结晶26h，抽滤结晶，采用体积分数97％的乙醇漂洗结晶，于温度为60℃，真空压力-0.09mpa
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0.07mpa下真空干燥，获得61.80g桑色素粉末，收率为0.103％；通过hplc检测：桑色素含量为26.88％。