细胞培养专用回温箱的制作方法

1.本实用新型属于细胞培养器械技术领域，尤其涉及一种细胞培养专用回温箱。


背景技术：

2.细胞培养是指在体外模拟体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等)，使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。许多研究可以利用细胞培养技术在体外进行，避免了因为技术风险而产生的伦理问题。同时，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等，因此细胞培养也经常用于分子生物学和免疫学的研究。
3.在细胞培养时，无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件，为此必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。另外，不适宜的温度会影响细胞的生长，一般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37～38℃，在25～35℃时生长缓慢。而细胞培养所用的培养基与其他添加的营养成分，大多数是冷藏或冷冻保存，使用前需要恢复到室温状态，若直接使用容易产生应激反应造成细胞死亡，从而导致实验失败。现有技术中则没有专用的回温设备。另外，在细胞培养时，为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，对培养的细胞进行细胞冻存是必须的实验手段。冻存与复苏细胞要遵循慢冻快融的原则，现有技术中采用的方法是把冻存在液氮(-196℃)中的细胞取出后，迅速置于37℃水浴锅或金属浴之中，使其快速融化，这种操作方式繁琐，存在烫伤的安全隐患，容易受外界环境污染。


技术实现要素：

4.本实用新型的目的是提供一种细胞培养专用回温箱，旨在解决现有技术中因无专用回温设备导致实验失败，采用水浴锅或金属浴融化细胞操作繁琐、易烫伤、易受外界污染的技术问题。
5.为解决上述技术问题，本实用新型所采取的技术方案是：
6.一种细胞培养专用回温箱，包括能够置于超净工作台内的箱体，所述箱体的底部设有加热组件、上部设有保温层，所述箱体的左侧设有多个器皿放置区，用于放置冻存管、离心管、容量瓶及培养瓶；所述保温层的底部设有夹持组件，用于固定冻存管、离心管、容量瓶及培养瓶。
7.优选的，所述夹持组件包括三个以上的卡爪，所述卡爪的上端与扭簧相连，所述扭簧设置在保温层的底部，所述保温层的底部设有用于与放置区对应的定位孔，所述扭簧均布在定位孔四周的保温层上，所述扭簧的另一端与拉线相连，所述拉线的自由端贯穿保温层内穿孔延伸至箱体的外侧。
8.优选的，所述拉线的末端设有提拉杆。
9.优选的，所述卡爪包括连接杆和贴片，所述连接杆设有向外凸起的弧度，所述贴片
的内侧设有防滑垫，用于与待固定的冻存管、离心管、容量瓶或培养瓶的外壁贴合。
10.优选的，所述卡爪由耐120℃高温的聚丙烯塑料制作而成。
11.优选的，所述加热组件包括导热盘及电加热片，所述电加热片平铺于箱体底部，所述导热盘设置于电加热片的上方，所述电加热片的底部设有隔热垫。
12.优选的，所述箱体的外部设有用于控制加热组件的按钮，用于控制箱体内温度在25-37℃；所述箱体的外部设有用于显示温度数值的显示屏。
13.优选的，所述保温层的材质为泡沫板。
14.优选的，所述箱体的尺寸为20cm
×
15cm
×
12cm。
15.采用上述技术方案所产生的有益效果在于：与现有技术相比，本实用新型通过将箱体放置在超净工作台上，利用加热组件控制箱体内的温度，通过夹持组件对箱体内部放置的冻存管、离心管、容量瓶及培养瓶进行固定，借助保温层对其内部进行保温，可迅速将细胞的培养环境恢复到适宜的温度。本实用新型体积小巧，能够放置在超净工作台内，能适用于多种型号的容器，减少人员的走动和容器的移动，减少污染的可能，使实验操作更加便利。
附图说明
16.下面结合附图和具体实施方式对本实用新型作进一步详细的说明。
17.图1是本实用新型实施例提供的一种细胞培养专用回温箱的结构示意图；
18.图2是图1中细胞培养专用回温箱的内部结构俯视图；
19.图3是本实用新型实施例中夹持组件的结构示意图；
20.图中：1-箱体，2-加热组件，3-保温层，4-放置区，5-卡爪，51-连接杆，52-贴片，53-防滑垫；6-扭簧，7-定位孔，8-拉线，9-提拉杆，10-导热盘，11-电加热片，12-隔热垫，13-按钮，14-显示屏，15-提手。
具体实施方式
21.下面结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本实用新型的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。
22.参见图1、2，本实用新型提供的一种细胞培养专用回温箱包括能够置于超净工作台内的箱体1，所述箱体1的底部设有加热组件2、上部设有保温层3，所述箱体1的左侧设有多个器皿放置区4，用于放置冻存管、离心管、容量瓶及培养瓶，能同时回温多种容器；所述保温层3的底部设有夹持组件，用于固定冻存管、离心管、容量瓶及培养瓶。使用时，将箱体置于超净工作台内，在细胞培养及细胞复苏的操作时，回温均能在超净工作台上完成操作，无需把细胞样品或培养基移出超净工作台，减少污染的可能，提高了实验的便利性。
23.在本实用新型的一个具体实施例中，如图3所示，所述夹持组件包括三个以上的卡爪5，所述卡爪5的上端与扭簧6相连，所述扭簧6设置在保温层3的底部，所述保温层3的底部设有用于与放置区4对应的定位孔7，所述扭簧6均布在定位孔7四周的保温层上，所述扭簧6的另一端与拉线8相连，所述拉线8的自由端贯穿保温层3内穿孔延伸至箱体1的外侧。另外，
细胞活率97％91％cd3-cd56+88.3％83.2％无菌阴性阴性支原体阴性阴性细胞内毒素＜0.25eu/ml＜0.25eu/ml
40.由上述对比实验可知，培养基采用本实施例中的专用回温箱回温的实验组，与培养基在室温中回温的对照组相比，培养的nk细胞数量更多，活率更高，表型更好，而且操作更为便利。
41.实施例二：
42.在本实施例中，细胞培养的样本为液氮中冻存的同一批号的间充质干细胞(msc)。
43.回温箱放置于超净工作台中，预先把温度调节至37℃。
44.本实施例具体操作方法：
45.实验分为为两组，一组为实验组，使用新型的细胞培养专用回温箱；另一组为对照组，不使用新型的细胞培养专用回温箱，其余的实验用仪器与实验试剂均为一样。
46.实验组：从液氮中取出一管msc，立刻把冻存管放进超净工作台的回温箱回温孔，回温1min。按要求对复苏后的msc进行增殖培养。换液时，将培养基放置于回温箱中回温至37℃再进行操作。
47.对照组：从液氮中取出一管msc，立刻把冻存管放进实验室的金属浴中回温1min。回温后把冻存管转至超净工作台进行复苏操作。按要求对复苏后的msc进行增殖培养。换液时，将培养基放置于实验室中回温至室温(25℃)再进行操作。
48.两组在msc长到175cm2培养瓶面积的90％进行细胞数量、无菌、支原体和细胞内毒素的质检。
49.表2冻存msc的复苏培养效果
[0050][0051]
由上表可知，采用本实施例中的细胞培养专用回温箱时，实验组复苏msc的效果更好。而且在实施例中，复苏操作除了离心及细胞活率计算以外，都是在超净工作台内完成，
减少了人员的移动可能带来的污染风险，操作更加便捷。
[0052]
实施例三：
[0053]
本实施例是用实施例二的两组msc进行传代操作。
[0054]
回温箱放置于超净工作台中，预先把温度调节至37℃。
[0055]
本实施例的与实施例一和实施例二的不同之处在于：
[0056]
实验组：在实施例二的实验组175cm2培养瓶中加入胰酶消化液后，把培养瓶置于回温箱右边的保温区2min，使大部分细胞从瓶底脱离，用显微镜观察细胞消化至90％再进行传代培养。
[0057]
对照组：在实施例二的对照组175cm2培养瓶中加入胰酶消化液后，把培养瓶置于室温(25℃)，使大部分细胞从瓶底脱离，定期用显微镜观察，5分钟后细胞消化至90％再进行传代培养。
[0058]
表3复苏msc的传代培养效果
[0059]
检测项目实验组对照组胰酶消化时间(min)23起始细胞数(cells/ml)1.0
×
1061.0
×
1065天后收获(cells/ml)1.2
×
1078
×
106无菌阴性阴性支原体阴性阴性细胞内毒素＜0.25eu/ml＜0.25eu/ml
[0060]
由上表可知，采用本实施例中的细胞培养专用回温箱时，实验组msc用胰酶消化的时间更短，传代的效果更好。
[0061]
综上所述，本实用新型具有结构简单、体积小巧、使用方便的优点，能够在超净工作台内使用，可同时回温不同的容器。利用本实用新型在细胞培养及细胞复苏的操作时，回温均能在超净工作台上完成操作，无需把细胞样品或培养基移出超净工作台，减少人员的走动和容器的移动，以防引起超净工作台的气流紊乱破坏超净状态，减少污染的可能，使实验操作更加便利，能够更好的控制体外培养所需的无菌环境。
[0062]
在上面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本实用新型，但是本实用新型还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本实用新型内涵的情况下做类似推广，因此本实用新型不受上面公开的具体实施例的限制。