转换肽及使用该转换肽的免疫测定法的制作方法

本公开涉及可用于利用免疫反应分析目标抗原物质的转换肽及使用该转换肽的免疫测定方法。

背景技术：

1、免疫测定已被应用于生物测试，例如生物技术领域中的各种免疫诊断测试或环境监测。免疫测定法的优点是能够利用抗原抗体反应的特异性定量分析特定的目标物质，并且具有比其他分析方法更高的灵敏度。

2、免疫测定可用于各种诊断，例如诊断癌症标记、传染病、甲状腺功能、贫血、过敏、妊娠、药物滥用和痛风。为了在各种类型抗原的诊断或分析中应用免疫测定，必需制备对每种抗原具有特异反应性的抗体。

3、然而，这种方法在检测最近迅速多样化的现代化疾病或者具有多个突变体的病毒方面存在局限性。特别是对于病毒，通常不可能找到与病毒具有特异性结合特性的抗体。

4、此外，在利用抗原-抗体反应时，可能需要进行将抗体结合至标记的额外步骤。如果标记与抗体之间的结合特性较差，可能会降低免疫测定分析的准确性或可靠性。

5、由于上述问题，还存在开发能够分别结合不同抗体的不同类型的标记的问题。

技术实现思路

1、技术问题

2、本公开的一个目的在于提供可应用于电化学免疫测定方法的转换肽，其包括能够选择性且可逆地结合至结合抗体的fab区的肽化合物以及能够在检测样品溶液中被氧化和还原的化学标记。

3、本公开的另一个目的在于提供使用所述转换肽的免疫测定方法。

4、技术方案

5、根据本公开实施方案的转换肽包括：能够可逆地结合至结合抗体的肽化合物；以及与肽化合物结合的化学标记。

6、在一个实施方案中，肽化合物可选择性且可逆地结合至结合抗体的抗原结合片段(fab)区。

7、在一个实施方案中，肽化合物可具有能够特异性且可逆地结合至结合抗体的轻链或重链的第一至第四框架区(fr1、fr2、fr3和fr4)中一个或多个的氨基酸序列。

8、在一个实施方案中，所述肽化合物可包括选自以下的一种或多种：第一肽化合物，其具有与第二轻链可变框架区(vl-fr2)的氨基酸序列具有同源性的第一氨基酸序列；第二肽化合物，其具有与第三轻链可变框架区(vl-fr3)或第四轻链可变框架区(vl-fr4)的氨基酸序列具有同源性的第二氨基酸序列；第三肽化合物，其具有与第二重链可变框架区(vh-fr2)的氨基酸序列具有同源性的第三氨基酸序列；和第四肽化合物，其具有与第三重链可变框架区(vh-fr3)或第四重链可变框架区(vh-fr4)的氨基酸序列具有同源性的第四氨基酸序列。

9、在一个实施方案中，肽化合物可包含14至20个氨基酸。

10、在一个实施方案中，肽化合物可具有1650da至2500da的分子量。

11、在一个实施方案中，化学标记可包括能够在样品溶液中被可逆地氧化或还原的物质。

12、在一个实施方案中，化学标记可包括选自以下中的一种或多种：二茂铁、二茂铁甲醇、二茂铁二甲醇、α-甲基二茂铁甲醇、亚铁氰化物离子、铁氰化物离子、六铵合钌离子、氢醌、抗坏血酸、多巴胺、二茂铁羧酸、二茂铁二羧酸和二茂铁醛。

13、根据本公开实施方案的免疫测定方法包括：第一步，将与转换肽结合的结合抗体固定化在基底上，或者将结合抗体固定化在基底上再将转换肽结合至结合抗体上；第二步，利用检测样品溶液处理结合抗体；以及第三步，处理后，通过对检测样品溶液进行电化学分析，定量分析检测样品溶液中与结合抗体特异性反应的目标抗原；其中所述转换肽包括具有能够选择性且可逆地结合至结合抗体的抗原结合片段(fab)区的氨基酸序列的肽化合物以及与肽化合物结合并能够在检测样品溶液中被氧化和还原的化学标记。

14、在一个实施方案中，在第二步中，当检测样品溶液中存在目标抗原时，如果目标抗原与结合抗体结合，则转换肽可根据已与结合抗体反应的目标抗原的量从结合抗体定量释放。

15、在一个实施方案中，电化学分析可通过选自以下的一种方法进行：电流滴定法、计时电流分析法、伏安法、循环伏安法、微分电位伏安法、计时电位分析法和极谱法。

16、在一个实施方案中，在第三步中，在从结合抗体释放的转换肽的化学标记与用于电流滴定法或伏安法的工作电极之间可发生氧化还原反应。

17、有益效果

18、根据本公开的转换肽及使用该转换肽的免疫测定方法，通过使用选择性且可逆地结合至结合抗体的fab区并具有化学标记的转换肽，可通过无需光学系统的电化学分析方法对目标抗原进行定量分析，从而实现分析装置的小型化并降低其成本，因此可应用于现场诊断的装置中。

1.一种转换肽，包括：

2.根据权利要求1所述的转换肽，其中所述肽化合物选择性且可逆地结合至结合抗体的抗原结合片段(fab)区。

3.根据权利要求1所述的转换肽，其中所述肽化合物具有能够特异性且可逆地结合至结合抗体的轻链或重链的第一框架区至第四框架区(fr1、fr2、fr3和fr4)中一个或多个的氨基酸序列。

4.根据权利要求3所述的转换肽，其中所述肽化合物包括选自以下的一种或多种：第一肽化合物，其具有与第二轻链可变框架区(vl-fr2)的氨基酸序列具有同源性的第一氨基酸序列；第二肽化合物，其具有与第三轻链可变框架区(vl-fr3)或第四轻链可变框架区(vl-fr4)的氨基酸序列具有同源性的第二氨基酸序列；第三肽化合物，其具有与第二重链可变框架区(vh-fr2)的氨基酸序列具有同源性的第三氨基酸序列；和第四肽化合物，其具有与第三重链可变框架区(vh-fr3)或第四重链可变框架区(vh-fr4)的氨基酸序列具有同源性的第四氨基酸序列。

5.根据权利要求4所述的转换肽，其中所述肽化合物包含14至20个氨基酸。

6.根据权利要求5所述的转换肽，其中所述肽化合物的分子量为1650da至2500da。

7.根据权利要求1所述的转换肽，其中所述化学标记化学标记包括能够在样品溶液中被可逆地氧化或还原的物质。

8.根据权利要求7所述的转换肽，其中所述化学标记包括选自以下中的一种或多种：二茂铁、二茂铁甲醇、二茂铁二甲醇、α-甲基二茂铁甲醇、亚铁氰化物离子、铁氰化物离子、六铵合钌离子、氢醌、抗坏血酸、多巴胺、二茂铁羧酸、二茂铁二羧酸和二茂铁醛。

9.一种免疫测定方法，包括：

10.根据权利要求9所述的免疫测定方法，其中，在第二步中，当检测样品溶液中存在目标抗原时，如果目标抗原与结合抗体结合，转换肽根据已与结合抗体反应的目标抗原的量从结合抗体定量释放。

11.根据权利要求10所述的免疫测定方法，其中，所述电化学分析通过选自以下的一种方法进行：电流滴定法、计时电流分析法、伏安法、循环伏安法、微分电位伏安法、计时电位分析法和极谱法。

12.根据权利要求11所述的免疫测定方法，其中，在第三步中，在从结合抗体释放的转换肽的化学标记与用于电流滴定法或伏安法的工作电极之间发生氧化还原反应。