用于治疗HER2阳性癌症的组合物和方法与流程

背景技术：

1、细胞疗法是治疗各种疾病，特别是癌症的有力工具。在常规的过继性细胞疗法中，将免疫细胞工程化以表达特定受体，例如嵌合抗原受体(car)或t细胞受体(tcr)，其通过受体与靶细胞表达的配体的相互作用将免疫细胞的活性导向细胞靶。鉴定合适的靶分子仍然具有挑战性，因为许多靶标在正常组织中表达。这类靶标的一个实例为erb-b2受体酪氨酸激酶2(erbb2或her2)，其在许多实体肿瘤以及正常上皮细胞的表面上表达。当移植细胞靶向表达her2靶分子的正常组织时，这种表达可能会导致毒性。用her2 car的临床试验已显示严重副作用，且目前靶向her2的唯一抗体治疗仅对具有极高her2含量的乳腺癌有效。因此，所属领域中需要适用于通过过继性细胞疗法治疗疾病，特别是癌症的组合物和方法。

技术实现思路

1、本公开提供应答癌细胞中杂合性丢失的免疫细胞，其包含：(a)活化剂受体，其包含对erb-b2受体酪氨酸激酶2(her2)抗原具有特异性的胞外配体结合结构域；和(b)抑制受体，其包含对由于所述癌细胞中的杂合性丢失而所述癌细胞不表达的非靶抗原具有特异性的胞外配体结合结构域。

2、在本公开的免疫细胞的一些实施例中，所述非靶抗原为i类hla等位基因或次要组织相容性抗原(minor histocompatibility antigen；miha)。在一些实施例中，i类hla等位基因包含hla-a、hla-b、hla-c或hla-e。在一些实施例中，i类hla等位基因为hla-a*02。

3、在本公开的免疫细胞的一些实施例中，靶抗原为her2或与i类主要组织相容性复合物(mhc i)的复合物中的her2的肽抗原。

4、在本公开的免疫细胞的一些实施例中，癌细胞表达her2。在一些实施例中，癌细胞为乳腺癌细胞、膀胱癌细胞、卵巢癌细胞、胃癌细胞、唾液管癌细胞、非小细胞肺癌细胞、胰腺癌细胞或结肠癌细胞。在一些实施例中，癌细胞为乳腺癌细胞或胃癌细胞。

5、在本公开的免疫细胞的一些实施例中，hla-a*02非靶抗原是由个体的健康细胞表达。在一些实施例中，个体的健康细胞表达靶抗原和hla-a*02非靶抗原两者。在一些实施例中，活化剂受体和抑制受体在癌细胞存在下一起特异性地活化免疫细胞。

6、在本公开的免疫细胞的一些实施例中，免疫细胞为t细胞。在一些实施例中，t细胞为cd8+cd4-t细胞。

7、在本公开的免疫细胞的一些实施例中，her2抗原包含与seq id no:2-29中的任一个的序列或子序列至少95％一致的序列或子序列。

8、在本公开的免疫细胞的一些实施例中，活化剂受体为t细胞受体(tcr)或嵌合抗原受体(car)。在一些实施例中，活化剂受体的胞外配体结合结构域包含抗体片段、单链fv抗体片段(scfv)、β链可变结构域(vβ)、或tcrα链可变结构域和tcrβ链可变结构域。在一些实施例中，活化剂受体的胞外配体结合结构域包含重链可变(vh)区和轻链可变(vl)区。在一些实施例中，vh和vl区包含选自由seq id no:30-42组成的群组的互补决定区(cdr)。在一些实施例中，vh区包含一个或多个选自由以下组成的群组的cdr序列：gfnikdtyih(seq idno:36)、ariyptngytryadsvkg(seq id no:38)和srwggdgfyamd[y/v](seq id no:40)或(seq id no:41)；且vl区包含一个或多个选自由以下组成的群组的cdr序列：rasqdvntava(seq id no:30)、sasfly(seq id no:32)和qqhyttpp(seq id no:34)。在一些实施例中，vh区包含一个或多个选自由以下组成的群组的cdr序列：nygmn(seq id no:37)、wintstgestfaddfkg(seq id no:39)和wevyhgyvpy(seq id no:42)；且vl区包含一个或多个选自由以下组成的群组的cdr序列：kasqdvynava(seq id no:31)、sassryt(seq id no:33)和qqhfrtpft(seq id no:35)。在一些实施例中，vh区包含以下的cdr序列：gfnikdtyih(seq id no:36)、ariyptngytryadsvkg(seq id no:38)和srwggdgfyamd[y/v](seq id no:40)或(seq id no:41)；且vl区包含以下的cdr序列：rasqdvntava(seq id no:30)、sasfly(seq id no:32)和qqhyttpp(seq id no:34)。在一些实施例中，vh区包含以下的cdr序列：nygmn(seq id no:37)、wintstgestfaddfkg(seq id no:39)和wevyhgyvpy(seq id no:42)；且vl区包含以下的cdr序列：kasqdvynava(seq id no:31)、sassryt(seq id no:33)和qqhfrtpft(seq id no:35)。在一些实施例中，vh区包含以下的cdr序列：dtyih(seq id no:313)、riyptngytryadsvkg(seq id no:314)和wggdgfyamdv(seq id no:315)；且vl区包含以下的cdr序列：rasqdvntava(seq id no:30)、sasflys(seq id no:311)、qqhyttppt(seqid no:312)和dtyih(seq id no:313)。在一些实施例中，scfv包含与选自由seq id no:51、53、55、57、59和61组成的群组的序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少99％一致性或与其一致的序列。

9、在本公开的免疫细胞的一些实施例中，car包含分离或衍生自cd8、cd28、igg1或igg4的铰链序列，或合成铰链。在一些实施例中，car包含分离或衍生自cd8或cd28的跨膜结构域。在一些实施例中，car包含分离或衍生自cd28、4-1bb或cd3z或其组合的胞内结构域。

10、在本公开的免疫细胞的一些实施例中，抑制受体包含tcr或car。在一些实施例中，抑制受体的胞外配体结合结构域包含抗体片段、单链fv抗体片段(scfv)、β链可变结构域(vβ)、或tcrα链可变结构域和tcrβ链可变结构域。在一些实施例中，抑制受体的胞外配体结合结构域包含重链可变(vh)区和轻链可变(vl)区。在一些实施例中，vh和vl区包含选自由seqid no:87-102组成的群组的cdr。在一些实施例中，vh区包含一个或多个选自由以下组成的群组的cdr：asgytftsyhih(seq id no:95)、wiypgnvnteynekfkgk(seq id no:98)和eeityamdy(seq id no:101)，且vl区包含一个或多个选自由以下组成的群组的cdr：rssqsivhsngntyle(seq id no:87)、kvsnrfsgvp[d/a]r(seq id no:90)或(seq id no:91)和fqgshvprt(seq id no:92)。在一些实施例中，vh区包含一个或多个选自由以下组成的群组的cdr：sgytftsyhmh(seq id no:97)、wiypgdgstqynekfkg(seq id no:100)和egtyyamdy(seq id no:102)；且vl区包含一个或多个选自由以下组成的群组的cdr：rssqsivhsngntyld(seq id no:89)、kvsnrfsgvp[d/a]r(seq id no:90)或(seq id no:91)和mqgshvprt(seq id no:94)。在一些实施例中，scfv包含与选自由seq id no:63-74、207、209和211组成的群组的序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少99％一致性或与其一致的序列。在一些实施例中，vh区包含vh区包含以下cdr序列：syhih(seq idno:566)、wiypgnvnteynekfkg(seq id no:567)和eeityamdy(seq id no:101)；且vl区包含以下cdr序列：rssqsivhsngntyle(seq id no:87)、kvsnrfs(seq id no:565)和fqgshvprt(seq id no:92)。

11、在本公开的免疫细胞的一些实施例中，抑制受体包含lilrb1胞内结构域或其功能变体。在一些实施例中，抑制受体包含lilrb1铰链和跨膜结构域，或其功能变体。在一些实施例中，抑制受体包含与ygsqsskpyllthpsdplelvvsgpsggpsspttgpts tsgpedqpltptgsdpqsglgrhlgvvigilvavilllllllllflilrhrrqgkhwtstqrkadfqhpagavgpeptdrglqwrsspaadaqeenlyaavkhtqpedgvemdtrsphdedpqavtyaevkhsrprremasppsplsgefldtkdrqaeedrqmdteaaaseapqdvtyaqlhsltlrreatepppsqegpspavpsiyatlaih(seq id no:254)具有至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少99％一致性或与其一致的序列。

12、本公开提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的本公开的免疫细胞。在一些实施例中，药物组合物进一步包含药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。

13、本公开提供一种药物组合物，其包含本公开的免疫细胞，其用作治疗癌症中的药物。

14、本公开提供一种多核苷酸系统，其包含一种或多种包含编码以下的多核苷酸序列的多核苷酸：(a)活化剂受体，其包含对erb-b2受体酪氨酸激酶2(her2)抗原具有特异性的胞外配体结合结构域；和(b)抑制受体，其包含对由于所述癌细胞中的杂合性丢失而所述癌细胞不表达的非靶抗原具有特异性的胞外配体结合结构域。

15、本公开提供一种载体，其包含本公开的多核苷酸系统。

16、本公开提供一种治疗鉴定为在her2+癌症中的编码非靶抗原的等位基因处具有或疑似具有杂合性丢失的个体的her2+癌症的方法，其包含向个体施用本公开的免疫细胞或药物组合物。

17、本公开提供一种制备免疫细胞疗法的方法，其包含用本公开的多核苷酸系统或载体转化免疫细胞。

18、本公开提供一种试剂盒，其包含本公开的免疫细胞或药物组合物。在一些实施例中，试剂盒进一步包含使用说明书。

19、本公开还提供一种选择性杀伤在her2阳性癌症中的编码非靶抗原的等位基因处具有杂合性丢失的her2阳性肿瘤细胞的方法，其包含使her2阳性肿瘤细胞与组合物或免疫细胞接触，肿瘤细胞是在混合培养物中。在一些实施例中，非靶抗原选自由以下组成的群组：hla-a*02、hla-a*01、hla-a*03、hla-a*11、hla-b*07和hla-c*07。

20、本公开还提供一种免疫细胞，其包含：(a)活化剂受体，其包含对erb-b2受体酪氨酸激酶2(her2)抗原具有特异性的胞外配体结合结构域，其中活化剂受体的胞外配体结合结构域包含：(i)vh区包含以下的cdr序列：dtyih(seq id no:313)、riyptngytryadsvkg(seq id no:314)和wggdgfyamdv(seq id no:315)；和(ii)vl区包含以下的cdr序列：rasqdvntava(seq id no:30)、sasflys(seq id no:311)、qqhyttppt(seq id no:312)和dtyih(seq id no:313)区和轻链可变(vl)区.；和(b)抑制受体，其包含对由于癌细胞中的杂合性丢失而癌细胞不表达的非靶抗原具有特异性的胞外配体结合结构域，其中抑制受体的胞外配体结合结构域包含：(i)重链可变(vh)区，其包含以下的cdr序列：syhih(seq idno:566)、wiypgnvnteynekfkg(seq id no:567)和eeityamdy(seq id no:101)；和(ii)轻链可变(vl)区，其由rssqsivhsngntyle(seq id no:87)、kvsnrfs(seq id no:565)和fqgshvprt(seq id no:92)构成。

21、本公开还提供一种免疫细胞，其包含：(a)活化剂受体，其包含对erb-b2受体酪氨酸激酶2(her2)抗原具有特异性的胞外配体结合结构域，其中活化剂受体的胞外配体结合结构域为包含seq id no:51的序列的scfv；和(b)抑制受体，其包含对由于癌细胞中的杂合性丢失而癌细胞不表达的非靶抗原具有特异性的胞外配体结合结构域，其中抑制受体的胞外配体结合结构域为包含seq id no:209的序列的scfv。

22、本公开还提供一种治疗鉴定为在编码hla-a*02的等位基因处具有或疑似具有杂合性丢失的个体的her2+癌症的方法，其包含向个体施用包含以下的免疫细胞：(a)活化剂受体，其包含对erb-b2受体酪氨酸激酶2(her2)抗原具有特异性的胞外配体结合结构域，其中活化剂受体的胞外配体结合结构域包含：vh区，其包含以下的cdr序列：dtyih(seq idno:313)、riyptngytryadsvkg(seq id no:314)和wggdgfyamdv(seq id no:315)；和(ii)vl区，其包含以下的cdr序列：rasqdvntava(seq id no:30)、sasflys(seq id no:311)、qqhyttppt(seq id no:312)和dtyih(seq id no:313)区和轻链可变(vl)区；和(b)抑制受体，其包含对由于癌细胞中的杂合性丢失而癌细胞不表达的非靶抗原具有特异性的胞外配体结合结构域，其中抑制受体的胞外配体结合结构域包含：(i)重链可变(vh)区，其包含以下的cdr序列：syhih(seq id no:566)、wiypgnvnteynekfkg(seq id no:567)和eeityamdy(seq id no:101)；和(ii)轻链可变(vl)区，其由rssqsivhsngntyle(seq id no:87)、kvsnrfs(seq id no:565)和fqgshvprt(seq id no:92)构成。

23、本公开还提供一种治疗鉴定为在编码hla-a*02的等位基因处具有或疑似具有杂合性丢失的个体的her2+癌症的方法，其包含向个体施用包含以下的免疫细胞：(a)活化剂受体，其包含对erb-b2受体酪氨酸激酶2(her2)抗原具有特异性的胞外配体结合结构域，其中活化剂受体的胞外配体结合结构域为包含seq id no:51的序列的scfv；和(b)抑制受体，其包含对由于癌细胞中的杂合性丢失而癌细胞不表达的非靶抗原具有特异性的胞外配体结合结构域，其中抑制受体的胞外配体结合结构域为包含seq id no:209的序列的scfv。

24、本公开还提供一种选择性杀伤在编码hla-a*02的等位基因处具有杂合性丢失的her2阳性肿瘤细胞的方法，其包含使her2阳性肿瘤细胞与包含以下的免疫细胞接触：(a)活化剂受体，其包含对erb-b2受体酪氨酸激酶2(her2)抗原具有特异性的胞外配体结合结构域，其中活化剂受体的胞外配体结合结构域包含：(i)vh区，其包含以下的cdr序列：dtyih(seq id no:313)、riyptngytryadsvkg(seq id no:314)和wggdgfyamdv(seq id no:315)；和(ii)vl区，其包含以下的cdr序列：rasqdvntava(seq id no:30)、sasflys(seq id no:311)、qqhyttppt(seq id no:312)和dtyih(seq id no:313)区和轻链可变(vl)区.；和(b)抑制受体，其包含对由于癌细胞中的杂合性丢失而癌细胞不表达的非靶抗原具有特异性的胞外配体结合结构域，其中抑制受体的胞外配体结合结构域包含：(i)重链可变(vh)区，其包含以下的cdr序列：syhih(seq id no:566)、wiypgnvnteynekfkg(seq id no:567)和eeityamdy(seq id no:101)；和(ii)轻链可变(vl)区，其由rssqsivhsngntyle(seq id no:87)、kvsnrfs(seq id no:565)和fqgshvprt(seq id no:92)构成。

25、本公开还提供一种选择性杀伤在编码hla-a*02的等位基因处具有杂合性丢失的her2阳性肿瘤细胞的方法，其包含使her2阳性肿瘤细胞与包含以下的免疫细胞接触：(a)活化剂受体，其包含对erb-b2受体酪氨酸激酶2(her2)抗原具有特异性的胞外配体结合结构域，其中活化剂受体的胞外配体结合结构域为包含seq id no:51的序列的scfv；和(b)抑制受体，其包含对由于癌细胞中的杂合性丢失而癌细胞不表达的非靶抗原具有特异性的胞外配体结合结构域，其中抑制受体的胞外配体结合结构域为包含seq id no:209的序列的scfv。