异串联双环肽复合物的制作方法

本发明涉及异串联(heterotandem)双环肽复合物，其包含结合存在于癌细胞上的成分的第一肽配体，所述第一肽配体通过接头与一个或多个第二肽配体缀合，所述第二肽配体结合存在于自然杀伤(nk)细胞上的一种或多种成分。本发明还涉及所述异串联双环肽复合物在预防、抑制或治疗癌症中的用途。

背景技术：

1、环肽能够以高亲和力和靶标特异性与蛋白质靶标结合，因此是对于治疗剂开发有吸引力的分子类别。事实上，临床上已经成功使用了几种环肽，例如抗菌肽万古霉素、免疫抑制剂环孢霉素或抗癌药奥曲肽(driggers等人(2008),nat rev drug discov 7(7),608-24)。良好的结合特性是由于肽与靶标之间形成的相对较大的相互作用表面以及环状结构的构象柔韧性降低所致。通常，大环与数百平方埃的表面结合，例如环肽cxcr4拮抗剂cvx15(wu等人(2007),science 330,1066-71)、具有与整联蛋白αvb3结合的arg-gly-asp基序的环肽(xiong等人(2002),science 296(5565),151-5)或结合尿激酶型纤溶酶原激活因子的环肽抑制剂upain-1(zhao等人(2007),j struct biol 160(1),1-10)。

2、由于其环状构型，肽大环比线性肽柔韧性差，导致与靶标结合后熵损失较小，并导致更高的结合亲和力。与线性肽相比，降低的柔韧性还导致锁定靶标特异性构象，增加结合特异性。这种作用已通过一种基质金属蛋白酶8(mmp-8)的有效的和选择性抑制剂得到了例证，该抑制剂在开环时失去相对于其他mmp的选择性(cherney等人(1998),j med chem 41(11),1749-51)。通过大环化获得的有利的结合性质在具有多于一个肽环的多环肽中更为显著，例如在万古霉素、乳酸链球菌肽和放线菌素中。

3、不同的研究团队先前已将具有半胱氨酸残基的多肽系于(tether)一个合成的分子结构上(kemp和mcnamara(1985),j.org.chem；timmerman等人(2005),chembiochem)。meloen和同事已使用三(溴甲基)苯和相关分子将多个肽环快速定量地环化到合成支架上，以结构模拟蛋白质表面(timmerman等人(2005),chembiochem)。wo 2004/077062和wo2006/078161中公开了用于生成候选药物化合物的方法，其中所述化合物是通过将包含半胱氨酸的多肽连接到分子支架上而生成的，所述分子支架例如为三(溴甲基)苯。

4、已经开发了基于噬菌体展示的组合方法以生成和筛选针对目标靶标的双环肽的大型文库(heinis等人(2009),nat chem biol 5(7),502-7和wo 2009/098450)。简要地，在噬菌体上展示了包含三个半胱氨酸残基和两个六随机氨基酸的区域(cys-(xaa)6-cys-(xaa)6-cys)的线性肽的组合文库，并通过将半胱氨酸侧链共价连接至小分子(三-(溴甲基)苯)而得以环化。

技术实现思路

1、根据本发明的第一方面，提供了一种异串联双环肽复合物，其包含：

2、(a)第一肽配体，其结合存在于癌细胞上的成分；通过接头与以下缀合

3、(b)一个或多个第二肽配体，其结合存在于自然杀伤(nk)细胞上的一种或多种成分；

4、其中，每个所述肽配体包含多肽和分子支架，所述多肽包含被至少两个环序列隔开的至少三个反应性基团，并且所述分子支架与所述多肽的反应性基团形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环。

5、根据本发明的进一步的方面，提供了一种药物组合物，其包含如本文所定义的异串联双环肽复合物，与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合。

6、根据本发明的进一步的方面，提供了如本文所定义的异串联双环肽复合物，其用于预防、抑制或治疗癌症。

技术特征：

1.一种异串联双环肽复合物，其包含：

2.如权利要求1所定义的异串联双环肽复合物，其中所述反应性基团为半胱氨酸残基。

3.如权利要求1或2所定义的异串联双环肽复合物，其中所述存在于自然杀伤(nk)细胞上的一种或多种成分是存在于nk细胞表面的天然细胞毒性受体，如nkp30、nkp44和nkp46，特别是nkp46，如其中所述一个或多个第二肽配体包含一个或多个结合nkp46的双环肽配体。

4.如权利要求3所定义的异串联双环肽复合物，其中所述一个或多个结合nkp46的双环肽配体包含选自以下的氨基酸序列：

5.如权利要求1或2所定义的异串联双环肽复合物，其中所述存在于自然杀伤(nk)细胞上的一种或多种成分是存在于nk细胞表面的fc受体，如低亲和力fcγ受体(fcγr)，其选自fcγriia、fcγriib、fcγriic、fcγriiia和fcγriiib，特别是fcγriiia(也称为cd16a)，如其中所述一个或多个第二肽配体包含一个或多个结合cd16a的双环肽配体。

6.如权利要求5所定义的异串联双环肽复合物，其中所述一个或多个结合cd16a的双环肽配体包含选自以下的氨基酸序列：

7.如权利要求1至6中任一项所定义的异串联双环肽复合物，其中所述癌细胞选自ht1080、a549、sc-ov-3、pc3、ht1376、nci-h292、lncap、mc38、mc38#13、4t1-d02、h322、ht29、t47d和rko肿瘤细胞。

8.如权利要求1至7中任一项所定义的异串联双环肽复合物，其中所述存在于癌细胞上的成分是epha2，如其中所述第一肽包含结合epha2的双环肽配体。

9.如权利要求8所定义的异串联双环肽复合物，其中所述结合epha2的双环肽配体包含以下氨基酸序列：

10.如权利要求1至7中任一项所定义的异串联双环肽复合物，其中所述存在于癌细胞上的成分是pd-l1，如其中所述第一肽包含结合pd-l1的双环肽配体。

11.如权利要求10所定义的异串联双环肽复合物，其中所述结合pd-l1的双环肽配体包含以下氨基酸序列：

12.如权利要求1至7中任一项所定义的异串联双环肽复合物，其中所述存在于癌细胞上的成分是mt1，如其中所述第一肽包含结合mt1的双环肽配体。

13.如权利要求12所定义的异串联双环肽复合物，其中所述结合mt1的双环肽配体包含以下氨基酸序列：

14.如权利要求1至13中任一项所定义的异串联双环肽复合物，其是表a1、表a2、表a3、表b1、表c、表d和表e中列出的复合物中的任一种。

15.如权利要求1至14中任一项所定义的异串联双环肽复合物，其中所述药学上可接受的盐选自游离酸或钠、钾、钙、铵盐。

16.一种药物组合物，其包含权利要求1至15中任一项所述的异串联双环肽复合物，与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合。

17.权利要求1至15中任一项所定义的异串联双环肽复合物或权利要求16所定义的药物组合物，其用于预防、抑制或治疗癌症的用途。

技术总结
本发明涉及异串联(heterotandem)双环肽复合物，其包含结合存在于癌细胞上的成分的第一肽配体，所述第一肽配体通过接头与一个或多个第二肽配体缀合，所述第二肽配体结合存在于自然杀伤(NK)细胞上的一种或多种成分。本发明还涉及所述异串联双环肽复合物在预防、抑制或治疗癌症中的用途。

技术研发人员：N·肯,G·穆德,P·布兰迪什,K·盖纳,L·陈,F·杜福尔,C·莱泰瑟,K·麦克道尔,L·雷帕西,S·乌伦布洛克
受保护的技术使用者：拜斯科技术开发有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16