TACI/BCMA双结合分子的制作方法

本公开涉及细胞治疗领域，并且更具体地涉及靶向存在于多发性骨髓瘤细胞上的抗原的抗体、car和/或tcr。

背景技术：

1、人癌本质上由正常细胞构成，这些正常细胞发生了遗传转化或表观遗传转化而变成异常癌细胞。这样一来，癌细胞开始表达与正常细胞所表达的那些不同的蛋白质和其他抗原。身体的先天免疫系统可使用这些异常肿瘤抗原来特异性地靶向和杀死癌细胞。然而，癌细胞采用各种机制来防止免疫细胞(诸如t和b淋巴细胞)成功靶向癌细胞。

2、目前的t细胞疗法依赖于经富集或修饰的人t细胞来靶向和杀死患者体内的癌细胞。为了增加t细胞靶向和杀死特定癌细胞的能力，已开发了工程化t细胞以表达将t细胞引导至特定靶癌细胞的构建体的方法。包含能够与特定肿瘤抗原相互作用的结合结构域的嵌合抗原受体(car)和工程化t细胞受体(tcr)允许t细胞靶向并杀死表达特定肿瘤抗原的癌细胞。需要靶向和杀死癌细胞的car和tcr，以及特别是表达跨膜活化因子和caml相互作用因子(taci)和/或b细胞成熟抗原(bcma)的细胞，诸如多发性骨髓瘤细胞。

技术实现思路

1、公开了包含双taci-bcma结合结构域的抗体、其抗原结合片段、和编码它们的核酸。在实施方案中，双taci-bcma结合结构域包含来自seq id no:1、25、49、73、97、121、145、169和193的重链可变区(hcvr)中的任一者的三个重链互补决定区(hcdr)的序列和来自seqid no:12、36、60、84、108、132、156、180和204的轻链可变区(lcvr)中的任一者的三个轻链cdr(lcdr)的序列。

2、在实施方案中，双taci-bcma结合结构域包含含有三个重链互补决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)的第一结构域和含有三个轻链互补决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)的第二结构域，其中(i)该hcdr1具有根据seq id no:3-5、27-29、51-53、75-77、99-101、123-125、147-149、171-173和195-197中任一者的序列；(ii)该hcdr2具有根据seq id no:6-8、30-32、54-56、78-80、102-104、126-128、150-152、174-176和198-200中任一者的序列；(iii)该hcdr3具有根据seq id no:9-11、33-35、57-59、81-83、105-107、129-131、153-155、177-179和201-203中任一者的序列；(iv)该lcdr1具有根据seq id no:14-16、38-40、62-64、86-88、110-112、134-136、158-160、182-184和206-208中任一者的序列，(v)该lcdr2具有根据seqid no:17-19、41-43、65-67、89-91、113-115、137-139、161-163、185-187和209-211中任一者的序列；并且(vi)该lcdr3具有根据seq id no:20-22、44-46、68-70、92-94、116-118、140-142、164-166、188-190和212-214中任一者的序列。在实施方案中，该hcdr包含：(i)根据seq id no:3-5中任一者的hcdr1；根据seq id no:6-8中任一者的hcdr2；根据seq idno:9-11中任一者的hcdr3；(ii)根据seq id no:27-29中任一者的hcdr1；根据seq id no:30-32中任一者的hcdr2；根据seq id no:33-35中任一者的hcdr3；(iii)根据seq id no:51-53中任一者的hcdr1；根据seq id no:54-56中任一者的hcdr2；根据seq id no:57-59中任一者的hcdr3；(iv)根据seq id no:75-77中任一者的hcdr1；根据seq id no:78-80中任一者的hcdr2；根据seq id no:81-83中任一者的hcdr3；(v)根据seq id no:99-101中任一者的hcdr1；根据seq id no:102-104中任一者的hcdr2；根据seq id no:105-107中任一者的hcdr3；(vi)根据seq id no:123-125中任一者的hcdr1；根据seq id no:126-128中任一者的hcdr2；根据seq id no:129-131中任一者的hcdr3；(vii)根据seq id no:147-149中任一者的hcdr1；根据seq id no:150-152中任一者的hcdr2；根据seq id no:153-155中任一者的hcdr3；(viii)根据seq id no:171-173中任一者的hcdr1；根据seq id no:174-176中任一者的hcdr2；根据seq id no:177-179中任一者的hcdr3；或者(ix)根据seq id no:195-197中任一者的hcdr1；根据seq id no:198-200中任一者的hcdr2；根据seq id no:201-203中任一者的hcdr3；并且该lcdr包含：(i)根据seq id no:14-16中任一者的lcdr1；根据seqid no:17-19中任一者的lcdr2；根据seq id no:20-22中任一者的lcdr3；(ii)根据seq idno:38-40中任一者的lcdr1；根据seq id no:41-43中任一者的lcdr2；根据seq id no:44-46中任一者的lcdr3；(iii)根据seq id no:62-64中任一者的lcdr1；根据seq id no:65-67中任一者的lcdr2；根据seq id no:68-70中任一者的lcdr3；(iv)根据seq id no:86-88中任一者的lcdr1；根据seq id no:89-91中任一者的lcdr2；根据seq id no:92-94中任一者的lcdr3；(v)根据seq id no:110-112中任一者的lcdr1；根据seq id no:113-115中任一者的lcdr2；根据seq id no:116-118中任一者的lcdr3；(vi)根据seq id no:134-136中任一者的lcdr1；根据seq id no:137-139中任一者的lcdr2；根据seq id no:140-142中任一者的lcdr3；(vii)根据seq id no:158-160中任一者的lcdr1；根据seq id no:161-163中任一者的lcdr2；根据seq id no:164-166中任一者的lcdr3；(viii)根据seq id no:182-184中任一者的lcdr1；根据seq id no:185-187中任一者的lcdr2；根据seq id no:188-190中任一者的lcdr3；或者(ix)根据seq id no:206-208中任一者的lcdr1；根据seq id no:209-211中任一者的lcdr2；根据seq id no:212-214中任一者的lcdr3。

3、在实施方案中，该抗体或其抗原结合片段包含含有三个重链互补决定区(hcdr)的第一结构域和含有三个轻链互补决定区(lcdr)的第二结构域，其中：该hcdr和lcdr包含：(i)根据seq id no:3-5中任一者的hcdr1；根据seq id no:6-8中任一者的hcdr2；根据seqid no:9-11中任一者的hcdr3；根据seq id no:14-16中任一者的lcdr1；根据seq id no:17-19中任一者的lcdr2；根据seq id no:20-22中任一者的lcdr3；(ii)根据seq id no:27-29中任一者的hcdr1；根据seq id no:30-32中任一者的hcdr2；根据seq id no:33-35中任一者的hcdr3；根据seq id no:38-40中任一者的lcdr1；根据seq id no:41-43中任一者的lcdr2；根据seq id no:44-46中任一者的lcdr3；(iii)根据seq id no:51-53中任一者的hcdr1；根据seq id no:54-56中任一者的hcdr2；根据seq id no:57-59中任一者的hcdr3；根据seq id no:62-64中任一者的lcdr1；根据seq id no:65-67中任一者的lcdr2；根据seqid no:68-70中任一者的lcdr3；(iv)根据seq id no:75-77中任一者的hcdr1；根据seq idno:78-80中任一者的hcdr2；根据seq id no:81-83中任一者的hcdr3；根据seq id no:86-88中任一者的lcdr1；根据seq id no:89-91中任一者的lcdr2；根据seq id no:92-94中任一者的lcdr3；(v)根据seq id no:99-101中任一者的hcdr1；根据seq id no:102-104中任一者的hcdr2；根据seq id no:105-107中任一者的hcdr3；根据seq id no:110-112中任一者的lcdr1；根据seq id no:113-115中任一者的lcdr2；根据seq id no:116-118中任一者的lcdr3；(vi)根据seq id no:123-125中任一者的hcdr1；根据seq id no:126-128中任一者的hcdr2；根据seq id no:129-131中任一者的hcdr3；根据seq id no:134-136中任一者的lcdr1；根据seq id no:137-139中任一者的lcdr2；根据seq id no:140-142中任一者的lcdr3；(vii)根据seq id no:147-149中任一者的hcdr1；根据seq id no:150-152中任一者的hcdr2；根据seq id no:153-155中任一者的hcdr3；根据seq id no:158-160中任一者的lcdr1；根据seq id no:161-163中任一者的lcdr2；根据seq id no:164-166中任一者的lcdr3；(viii)根据seq id no:171-173中任一者的hcdr1；根据seq id no:174-176中任一者的hcdr2；根据seq id no:177-179中任一者的hcdr3；根据seq id no:182-184中任一者的lcdr1；根据seq id no:185-187中任一者的lcdr2；根据seq id no:188-190中任一者的lcdr3；或者(ix)根据seq id no:195-197中任一者的hcdr1；根据seq id no:198-200中任一者的hcdr2；根据seq id no:201-203中任一者的hcdr3；根据seq id no:206-208中任一者的lcdr1；根据seq id no:209-211中任一者的lcdr2；根据seq id no:212-214中任一者的lcdr3。

4、在实施方案中，该抗体或其抗原结合片段包含含有该三个hcdr的第一重链可变结构域和含有该三个lcdr的轻链可变结构域，其中：(i)该重链可变结构域与seq id no:1、seq id no:25、seq id no:49、seq id no:73、seq id no:97、seq id no:121、seq id no:145、seq id no:169或seq id no:193至少80％相同；并且(ii)该轻链可变结构域与seq idno:12、seq id no:36、seq id no:60、seq id no:84、seq id no:108、seq id no:132、seqid no:156、seq id no:180或seq id no:204至少80％相同。在实施方案中，该抗体或其抗原结合片段包含含有该三个hcdr的第一重链可变结构域和含有该三个lcdr的轻链可变结构域，其中：(i)该重链可变结构域与seq id no:1至少80％相同，并且该轻链可变结构域与seq id no:12至少80％相同；(ii)该重链可变结构域与seq id no:25至少80％相同，并且该轻链可变结构域与seq id no:36至少80％相同；(iii)该重链可变结构域与seq id no:49至少80％相同，并且该轻链可变结构域与seq id no:60至少80％相同；(iv)该重链可变结构域与seq id no:73至少80％相同，并且该轻链可变结构域与seq id no:84至少80％相同；(v)该重链可变结构域与seq id no:97至少80％相同，并且该轻链可变结构域与seq idno:108至少80％相同；(vi)该重链可变结构域与seq id no:121至少80％相同，并且该轻链可变结构域与seq id no:132至少80％相同；(vii)该重链可变结构域与seq id no:145至少80％相同，并且该轻链可变结构域与seq id no:156至少80％相同；(viii)该重链可变结构域与seq id no:169至少80％相同，并且该轻链可变结构域与seq id no:180至少80％相同；或者(ix)该重链可变结构域与seq id no:193至少80％相同，并且该轻链可变结构域与seq id no:204至少80％相同。在某些实施方案中，该三个hcdr和该三个lcdr由单个多肽包含。在某些实施方案中，其抗原结合片段包含scfv。

5、公开了由本文公开的抗体或其抗原结合片段中的任一者的抗体或其抗原结合片段包含的嵌合抗原受体和编码该嵌合抗原受体的核酸。在实施方案中，该嵌合抗原受体包含以下物质的跨膜结构域：4-1bb/cd137、t细胞受体的α链、t细胞受体的β链、2b4、cd3ε、cd4、cd5、cd8α、cd9、cd16、cd19、cd22、cd28、cd33、cd37、cd45、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137、cd154、nkg2d或t细胞受体的ζ链或它们的任何组合。

6、公开了包含编码所公开的抗体、其抗原结合片段、car或tcr的核酸的重组载体。在实施方案中，重组载体或核酸还包含编码显性阴性tgfβ受体(dn tgfβr)的核酸。在实施方案中，dn tgfβr包含来自tgf-β受体的细胞外结构域(ecd)以及跨膜结构域(tmd)，其中重组多肽缺少野生型tgf-β受体中存在的负责信号传导和磷酸化的氨基酸残基。在实施方案中，ecd来自tgf-βri或tgf-βrii。在实施方案中，tmd是来自tgf-βri、tgf-βrii、pdgfr、cd4、cd8、cd28、cd127、cd132、cd3ζ、4-ibb、ox40、icos、ctla-4、pd-1、lag-3、2b4、il-5、il-7、il-7rα、btla，或前述中任一者的突变体的跨膜结构域。在实施方案中，该dn tgfβr还包含异源性细胞内结构域(icd)，该异源性细胞内结构域缺少野生型tgf-β受体中存在的负责信号传导和磷酸化的氨基酸残基。

7、公开了用所公开的核酸或所公开的重组载体转化的宿主细胞以及包含它们的药物组合物。在实施方案中，用编码所公开的car或tcr的核酸转化宿主细胞。在实施方案中，用编码所公开的car或tcr的核酸和编码显性阴性tgfβ受体(dn tgfβr)的核酸转化宿主细胞。在某些实施方案中，用编码膜结合il-15-il-15rαsushi结构域嵌合受体的核酸转化宿主细胞。在实施方案中，宿主细胞包括ipsc、t细胞或nk细胞。

8、公开了一种治疗有需要的患者的疾病的方法，该方法包括施用t细胞和/或nk细胞或包含它们的药物组合物，其中该t细胞和/或nk细胞包含所公开的car或tcr。在实施方案中，该疾病是多发性骨髓瘤。公开了一种在受试者中诱导免疫应答或使受试者对多发性骨髓瘤免疫的方法，该方法包括向该受试者施用t细胞和/或nk细胞或包含它们的药物组合物，其中该t细胞和/或nk细胞包含所公开的car或tcr。在实施方案中，t细胞和/或nk细胞对患者是同种异体的。