嵌合免疫原和用于制备针对特定表位的多克隆抗体的方法与流程

本发明总体上涉及免疫学和免疫测定。在替代实施方案中，提供了嵌合免疫原，和用于制备和使用所述嵌合免疫原的方法，包括用于制备和获得对所选表位具有特异性的多克隆抗体的方法。在替代实施方案中，提供了用于在兔中产生表位特异性抗体应答的方法，其中所述免疫应答包括产生特异性针对(或特异性结合)至少一个人表位的兔抗体，并且所述方法包括向兔施用足够量的嵌合或重组多肽以产生所述表位特异性抗体应答。在替代实施方案中，提供了包含以下的嵌合或重组多肽：通过或经由基本上非免疫原性接头与免疫原性肽或多肽缀合或附接的铁蛋白多肽。

背景技术：

1、多克隆抗体对多个表位具有不同的反应性，从而确保即使在面对靶标或环境变化的多样性时也有稳健反应。为了获得多克隆抗体，用蛋白质、蛋白质片段或其混合物免疫动物，然后体液免疫系统选择产生抗体的b细胞克隆以用于扩增和成熟。在随后的阶段，这些b细胞将通过诱变和高亲和力免疫球蛋白基因的选择进一步多样化。尽管免疫系统具有针对几乎任何外来蛋白产生抗体的基本能力，但已知一些表位是有优势的，并且产生识别这些“优势”表位的抗体的b细胞克隆将接管免疫应答。这意味着标准多克隆抗体偏向一些表位，并且可能对其他表位缺乏反应性。

2、原则上，可以通过使用单个肽或肽的混合物使用单个(例如，线性)表位来免疫。然而，肽的三维(3d)结构可能与衍生出它们的蛋白质不同，从而导致产生对所述蛋白质具有较低亲和力或没有亲和力的抗体。肽(特别是并非优势表位的那些肽)通常太小而无法靠自身引发免疫应答，并且需要构建为更大的结构，或者需要依赖与更具免疫原性的成分共刺激来刺激经免疫的动物产生针对体液应答偏好的优势表位以外的其他表位的抗体。

3、可以使用各种技术如新生儿药物诱导掩蔽消减免疫或高区带耐受方法来针对非选择表位形成耐受(参见例如，美国专利7,598,030；美国专利8,133,744)，但耐受形成可能是一个有漏洞的过程，其中针对非选择表位的抗体克隆以某一水平继续显露；并且已经建议使用组合以获得更高的效率。在所有情况下，耐受形成意味着，除了标准免疫，还需要另外的程序作为此过程的一部分，从而增加了复杂性和成本。

4、从经免疫动物的血清中纯化用于商业用途的抗体。即使可以提取总免疫球蛋白，也经常需要通过减去不需要的反应性(吸附纯化)或通过特异性选择所需的反应性(亲和纯化)来进一步纯化抗体。

5、有利的是，能够明确多克隆抗体将识别哪些特定表位，而不必在免疫和/或纯化程序中添加额外的步骤。例如，消除对昂贵且耗时的吸附纯化和/或亲和纯化步骤的需要将是有利的。

技术实现思路

1、在替代实施方案中，提供了嵌合或重组多肽，所述嵌合或重组多肽包含：

2、(a)源自第一物种的多肽，和

3、(b)源自至少第二物种的至少一个异源氨基酸序列或氨基酸残基，

4、其中，源自所述第二或另外的物种的所述至少一个异源氨基酸序列或氨基酸残基被插入源自所述第一物种的多肽的氨基酸序列的一部分中、与所述部分接合、在所述部分中产生、或者替代或取代所述部分，

5、并且所述嵌合或重组多肽的氨基酸序列基本上由源自所述第一物种的氨基酸序列构成，

6、并且当来自所述第二物种的氨基酸序列被插入源自所述第一物种的多肽的氨基酸序列的一部分中、与所述部分接合、在所述部分中产生、或者替代或取代所述部分时，在源自所述第一物种的多肽上生成、形成或产生至少一个新表位，当将所述嵌合或重组多肽施用于所述第一物种时，所述至少一个新表位能够使所述第一物种产生对所述至少一个新表位具有特异性的体液抗体应答，

7、其中当所述嵌合或重组多肽被用于使所述第一物种的动物产生体液免疫应答时，在所述第一物种中如此产生的多克隆抗体基本上仅特异性地结合所述至少一个新表位，并且不特异性结合、或基本上不特异性结合、或仅以低亲和力结合源自所述第一物种但缺乏所述至少一个新表位或多个新表位的多肽，所述至少一个新表位或多个新表位由被插入源自第一物种的多肽的一部分中、与所述部分接合、在所述部分中产生、或者替代或取代所述部分的源自所述第二或另外的物种的所述至少一个异源氨基酸序列或氨基酸残基产生、形成或生成。换句话说，在所述第一物种中新产生的针对蛋白质的抗体与来自所述第一物种但其中不含来自所述第二物种的形成所述至少一个新表位的蛋白质序列的多肽可能存在一些低亲和力和/或非特异性结合。

8、当使用蛋白质结构域如轻链恒定结构域用于免疫(所述恒定结构域作为源自所述第一物种的多肽)时，可以看到另一种可能的情况，其中在所述第一物种中可能存在针对在生理环境中通常不暴露(例如，当蛋白质正常折叠或呈其天然三维(3d)结构时，通常不暴露)的表面的抗体应答，例如，恒定区中通常不暴露的表面是λ轻链中的恒定结构域与可变结构域之间的接头区(连接所述可变结构域和恒定结构域的区域)以及在完整igg中通常与重链连接的c末端半胱氨酸。也就是说，当从结构域的正常环境中除去所述结构域时，可能对现在暴露的(在所述嵌合或重组多肽中)一个表面或多个表面具有体液应答。值得注意的是，尽管这可能会引起针对免疫原中新暴露的同源物序列(例如，兔同源物序列，如λ轻链的兔恒定结构域)的抗体产生，但其应该不会引导识别正常(正常折叠的)轻链的体液应答，因为这些区域(通常不暴露的表面)将被隐藏或者在天然3d结构中折叠。

9、在如本文所提供的嵌合或重组多肽的替代实施方案中：

10、-源自所述第二物种的多肽是源自所述第一物种的多肽的同源物；

11、-来自所述至少一个第二物种的氨基酸序列与所述第一物种同源，并且被插入源自所述第一物种的多肽的氨基酸序列的一部分中、与所述部分接合、在所述部分中产生、或者替代或取代所述部分的所述至少一个同源第二物种序列替代源自所述第一物种的多肽的氨基酸序列的所有或基本上所有结构同源区段或部分；

12、-来自所述至少一个第二物种的氨基酸序列与所述第一物种同源，并且被插入源自所述第一物种的多肽的氨基酸序列的一部分中、与所述部分接合、在所述部分中产生、或者替代或取代所述部分的所述至少一个同源第二物种序列与源自所述第一物种的多肽的氨基酸序列结构同源；

13、-第一物种的同源物与其在所述第二物种中的同源物具有至少约25％至99％的序列同一性；

14、-所述第一物种的同源物与其在所述第二物种中的同源物具有基本上相同的二级和/或三级结构；

15、-第一物种的同源物与其在所述第二物种中的同源物具有至少约25％至99％的序列同一性，并且与其在所述第二物种中的同源物具有基本相同的二级和/或三级结构；

16、-第一物种的同源物与其在所述第二物种中的同源物具有至少约50％的序列同一性；或者，第一物种的同源物与其在所述第二物种中的同源物具有至少约70％的序列同一性；或者，第一物种的同源物与其在所述第二物种中的同源物具有至少约80％的序列同一性；或者，第一物种的同源物与其在所述第二物种中的同源物具有至少约90％的序列同一性；

17、-当使用距离矩阵比对来比对时，所述第一多肽和所述第二多肽具有约2至约8的z得分；或者当使用距离矩阵比对来比对时，所述第一多肽和所述第二多肽具有至少8的z得分；

18、-源自所述第一物种的多肽和其源自所述第二物种的同源多肽是抗体；或者，源自所述第一物种的多肽和源自所述第二物种的所述至少一个异源氨基酸序列源自抗体重链或抗体轻链；

19、-所述抗体重链是igm、igg、iga或ige同种型重链，或所述轻链是κ或λ轻链；

20、-所述第一物种是哺乳动物物种；所述第二物种是哺乳动物物种；或者，所述第一物种是鸡形目(galliformes)或稚科(phasianidae)属物种，并且所述第二物种是哺乳动物物种；或者，所述第一物种是兔、鼠物种、绵羊、山羊、猪、牛、马或鸡；并且所述第二物种是人；或者，所述鼠物种是大鼠或小鼠；

21、-所述嵌合或重组多肽的氨基酸序列的至少约80％至约99％是源自所述第一物种的氨基酸序列，和/或所述嵌合或重组多肽的氨基酸序列的约1％至约20％之间是源自所述至少一个第二物种的氨基酸序列；

22、-一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个或更多个新表位被插入源自所述第一物种的多肽的一部分中、与所述部分接合、在所述部分中产生、或者替代或取代所述部分；

23、-所述至少一个新表位包括源自抗体轻链的隐藏表面的表位，其中所述隐藏表面仅在所述抗体轻链游离且不是包含轻链和重链二者的igg分子的一部分时暴露；

24、-通过以下设计由源自所述至少一个第二物种的所述至少一个异源氨基酸序列生成、产生或形成的所述表位：

25、(a)将源自所述第一物种的多肽的序列与其来自所述第二物种的同源多肽比对，

26、(b)确定源自所述第一物种的多肽与其来自所述第二物种的同源多肽之间的一个或多个氨基酸序列差异，

27、(c)选择源自所述第一物种的多肽与其来自所述第二物种的同源多肽之间的至少一个氨基酸序列差异，并且

28、(d)修饰源自所述第一物种的多肽的序列，以与来自所述第二物种的同源多肽的所选的至少一个氨基酸序列匹配或相同；

29、-选择源自所述第一物种的多肽与其来自所述第二物种的同源多肽之间的至少一个氨基酸序列差异包括在来自所述第二物种的多肽的3d模型或结构上突出显示所确定的源自所述第一物种的多肽与其来自所述第二物种的同源多肽之间的一个或多个氨基酸序列差异，并且选择在所述多肽的暴露表面或外表面之中或之上的至少一个氨基酸序列差异；

30、-被插入源自所述第一物种的多肽的氨基酸序列的一部分中、与所述部分接合、在所述部分中产生、或者替代或取代所述部分的来自所述至少一个第二物种的氨基酸序列包含：存在于人igg3而不是人igg1、igg2或igg4或兔igg中的序列；存在于人igg1而不是人igg2、igg3或igg4或兔igg中的序列；存在于人igg2而不是人igg1、igg3或igg4或兔igg中的序列；或存在于人igg4而不是人igg1、igg2或igg3或兔igg中的序列；

31、-通过进一步包括以下的方法制备所述嵌合或重组多肽：在将一个或多个新表位插入源自所述第一物种的多肽的氨基酸序列的一部分中、与所述部分接合、在所述部分中产生、或者替代或取代所述部分之后，从源自所述第二或另外的物种的所述至少一个异源氨基酸序列中除去所述一个或多个新表位，例如，如图8所示；

32、-将至少两个或更多个不同的异源氨基酸序列或氨基酸残基插入源自所述第一物种的多肽的氨基酸序列的一部分中、与所述部分接合、在所述部分中产生、或者替代或取代所述部分，并且任选地所述至少两个或更多个不同的异源氨基酸序列或氨基酸残基来自不同的动物物种，并且任选地所述至少两个或更多个不同的异源氨基酸序列或氨基酸残基中的至少一个源自人，并且所述至少两个或更多个不同的异源氨基酸序列或氨基酸残基中的至少一个源自非人或动物物种，例如，如图9所示；

33、-所述异源氨基酸序列或氨基酸残基中的至少一个包含并非源自所述至少第二物种的人工表位，例如，如图10所示；

34、-所述异源氨基酸序列或氨基酸残基中的至少一个包含最初源自所述至少第二物种的表位，所述表位在所述第一物种中免疫沉默(不能在所述第一物种中产生抗体应答)，但被修饰成为能够使所述第一物种产生针对所述表位的抗体应答的免疫活性表位，例如，如图10所示；

35、-在所述异源氨基酸序列或氨基酸残基中的至少一个新表位被修饰，使得所述第一物种针对经修饰的新表位产生的抗体的结合与可比的未经修饰的新表位的情况下相比更弱或更慢，例如，如图11所示；和/或

36、-所述嵌合或重组多肽进一步包含与所述第一物种不同源的源自至少第二物种的至少一个新表位，并且所述至少一个新表位能够在所述第一物种中产生针对所述至少一个新表位的抗体，例如，如图12所示。

37、在替代实施方案中，提供了重组多肽，所述重组多肽包含来自第一物种的第一多肽的一部分和来自第二物种的第二多肽的至少一部分，其中所述第二多肽的所述至少一部分是所述第一多肽的同源物，并且其中所述第二多肽的所述至少一个同源部分包含不存在于所述第一多肽中的表位。

38、在如本文所提供的重组多肽的替代实施方案中：

39、-所述至少一个第二多肽的部分存在于或基本上存在于所述第一多肽的同源部分的位置处，并且已经替代或基本上替代所述第一多肽的同源部分；

40、所述重组多肽包含第二多肽的至少一部分和第三多肽的至少一部分，所述部分各自是所述第一物种的不同序列的同源物，并且其中所述第二多肽的部分和所述第三多肽的部分各自包含不存在于所述第一多肽中的表位；

41、-所述第一多肽和所述第二多肽具有相似或基本上相同的3d结构；

42、-所述第一多肽和所述第二多肽具有约25％与约95％之间的氨基酸同一性；或所述第一多肽和所述第二多肽具有至少约25％的氨基酸同一性；或者，所述第一多肽和所述第二多肽具有至少约50％的氨基酸同一性；或者，所述第一多肽和所述第二多肽具有至少约70％的氨基酸同一性；或者，所述第一多肽和所述第二多肽具有至少约90％的氨基酸同一性；

43、-当使用距离矩阵比对来比对时，所述第一多肽和所述第二多肽具有约2至约8的z得分；或者当使用距离矩阵比对来比对时，所述第一多肽和所述第二多肽具有至少8的z得分；

44、-所述第一多肽中的至少一个序列被除去，并被由所述第二多肽的同源部分形成的至少一个表位替代；

45、-已被从所述第一多肽中除去的至少一个序列包含存在于所述第一多肽和所述第二多肽所属的家族的另一成员中的序列；

46、-已被除去的至少一个序列包含存在于所述第一多肽和所述第二多肽所属的家族的另一成员中的结构域中的序列；

47、-所述至少一个序列被包含由单克隆抗体特异性识别的表位的序列替代；

48、-已被替代的所述至少一个表位被包含导致在所产生的抗体上的至少一个互补位(抗原结合位点)亚型的表位的序列替代；

49、-已被替代的所述至少一个表位被包含作为优势表位或更有优势的表位的序列替代；

50、-已被替代的所述至少一个表位被包含作为弱表位或更弱表位的表位或者在所述第一物种中引发弱体液应答进而导致相对较低的抗体滴度的表位的序列替代；

51、-在替代实施方案中，待被插入所述第一物种多肽的来自所述第二物种的序列的一个或多个部分(或表位)首先被修饰或改变为与来自所述第一物种的序列相同或更相似，其中，这确保仅一个或一些最初或天然存在于所述第二序列中的表位仍然存在于最终的重组或嵌合多肽中；这可以使所产生的多克隆抗体对所选定的靶标(或表位)更具特异性(例如，通过减少在转移的第二物种中存在的表位的数量)；或者，这可以通过消除高疏水性互补位将存在于所产生的抗体中的可能性来改变所产生的多克隆抗体的特征或特性；

52、-所述第二多肽中的表位被修饰，从而与未经修饰的表位的情况下相比降低由所述第一物种产生的特异性识别所述表位的抗体的亲和力；

53、-所述重组多肽包含来自第三物种的第三多肽的一部分，所述部分包含不存在于所述第一多肽或所述第二多肽中的表位；

54、-存在于所述第一多肽和所述第二多肽所属的家族的另一成员中的至少一个表位已被并入所述重组多肽中；

55、-存在于所述第一多肽和所述第二多肽所属的家族的另一成员中的结构域中的至少一个表位被并入所述重组多肽中；

56、-来自所述第二多肽的表位被修饰，以增加特异性识别来自所述第二多肽的表位的抗体的亲和力，或者产生特异性识别来自所述第二多肽的表位的抗体对所述表位的亲和力；

57、-所述第一物种是兔，并且所述第二物种是人；或所述第一多肽是兔抗体轻链，并且所述第二多肽是人抗体轻链；和/或

58、-将所述重组多肽施用于所述第一物种，所述表位能够导致特异性结合所述第二多肽中的表位但不特异性结合所述第一多肽的抗体的产生。

59、在替代实施方案中，提供了编码如本文所提供的嵌合或重组多肽的重组核酸。

60、在如本文所提供的重组核酸的替代实施方案中：

61、-所述重组核酸是或包含dna或rna分子，其中任选地所述rna是mrna分子，或所述重组核酸包含可被细胞机构用于制备多肽的合成或经修饰的核苷酸；

62、-所述重组核酸进一步包含转录调节元件并且与所述转录调控元件可操作地连接，并且任选地所述转录调节元件包括启动子，并且任选地所述启动子是诱导型启动子或组成型启动子；

63、-所述重组核酸进一步包含编码另外的蛋白质或肽部分或结构域的序列；

64、-所述另外的蛋白质或肽部分或结构域包含纯化部分或结构域以帮助纯化或分离由所述重组核酸编码的所述嵌合或重组抗体；

65、-所述另外的蛋白质或肽部分或结构域包含组氨酸(聚his)标签或麦芽糖结合蛋白；和/或

66、-所述重组核酸进一步包含位于所述纯化部分或结构域与编码所述嵌合或重组抗体的序列之间的编码蛋白酶切割位点的序列，并且任选地所述蛋白酶切割位点是烟草蚀纹病毒(tev)蛋白酶切割位点。

67、在替代实施方案中，提供了包含如本文所提供的重组核酸的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒。

68、在替代实施方案中，提供了细胞，所述细胞包含如本文所提供的嵌合或重组多肽，如本文所提供的重组核酸，或如本文所提供的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒；并且任选地，所述细胞是细菌细胞、真菌细胞、哺乳动物细胞、酵母细胞、昆虫细胞或植物细胞。

69、在替代实施方案中，提供了用于产生多克隆抗体或用于产生多克隆免疫血清的方法，所述多克隆抗体或所述多克隆免疫血清对表位具有特异性或与表位特异性结合，所述方法包括：

70、(a)向受试者施用如本文所提供的嵌合或重组多肽或用如本文所提供的嵌合或重组多肽免疫所述受试者，

71、(b)向受试者施用如本文所提供的重组核酸，或如本文所提供的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒，或

72、(c)向受试者施用如本文所提供的细胞，

73、其中，所述受试者是如本文所提供的所述第一多肽来源的物种，或所述受试者是如本文所提供的所述第一多肽的部分来自的物种，并且所述表位源自如本文所提供的所述第二多肽来源的物种，或所述表位源自如本文所提供的所述第二多肽的部分来自的物种。

74、在如本文所提供的方法的替代实施方案中：

75、-所述受试者是哺乳动物或禽类物种；或者，所述受试者是兔、鼠物种、绵羊、山羊、猪、牛、马或鸡；并且任选地所述鼠物种是大鼠或小鼠；

76、-所述重组核酸是rna或dna构建体；

77、-通过在细胞中表达如本文所提供的重组核酸，或如本文所提供的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒来产生所述嵌合或重组多肽；

78、-所述细胞是细菌、真菌、哺乳动物、酵母、昆虫或植物细胞；

79、-所述方法进一步包括在所述施用于或免疫所述哺乳动物之前基本上分离或纯化所述嵌合或重组多肽；

80、-所述分离或纯化包括使用疏水相互作用色谱法(hic)、离子交换色谱法(iec)、尺寸排阻色谱法(sec)、亲和纯化、吸附纯化或其任何组合；

81、-将步骤(a)、(b)或(c)中的所述施用重复两次与二十次之间，或重复2、3、4、5、6、7、8、9或10次，或以每2至20周或3至16周一次的间隔重复；

82、-所述方法产生基本上缺乏对所述表位不具有特异性或不特异性结合所述表位的抗体的多克隆抗体或多克隆免疫血清；

83、-所述方法产生基本上包含对所述表位的错误折叠形式不具有特异性或不特异性结合所述表位的错误折叠形式的抗体的多克隆抗体或多克隆免疫血清；

84、-所述第一多肽中的至少一个序列被除去，并被所述第二多肽的一部分形成的表位替代；

85、-来自所述第二多肽的序列中的至少一个表位被存在于所述第一多肽和所述第二多肽所属的家族的另一成员中的表位替代；

86、-来自所述第二多肽的序列中的至少一个表位被包含存在于所述第一多肽和所述第二多肽所属的家族的另一成员中的结构域中的表位的序列替代；

87、-所述第二多肽中由单克隆抗体特异性识别的至少一个表位被源自所述第一多肽的对应序列替代；

88、-所述第二多肽中的包含导致(或产生)至少一种互补位亚型的表位的至少一个序列被来自所述第一多肽的对应序列替代；

89、-所述第二多肽中的包含优势表位的至少一个序列被源自所述第一多肽的对应序列替代；

90、-所述第二多肽中的包含弱表位或引发弱体液应答进而导致相对较低的抗体滴度的表位的至少一个序列被源自所述第一多肽的对应序列替代；

91、-所述第二多肽中的表位被修饰，以降低特异性识别所述表位的抗体的亲和力；

92、-所述重组多肽包含来自第三物种的第三多肽的一部分，所述部分包含不存在于所述第一多肽或所述第二多肽中的表位；

93、-存在于所述第一多肽和所述第二多肽所属的家族的另一成员中的至少一个表位已被并入所述重组多肽中；

94、-存在于所述第一多肽和所述第二多肽所属的家族的另一成员中的结构域中的至少一个表位被并入所述重组多肽中；和/或

95、-来自所述第二多肽的表位被修饰，以增加特异性识别来自所述第二多肽的表位的抗体的亲和力，或者产生特异性识别来自所述第二多肽的表位的抗体对所述表位的亲和力。

96、在替代实施方案中，提供了如本文所提供的嵌合或重组多肽；如本文所提供的核酸；如本文所提供的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒；或者，如本文所提供的细胞，用于在产生多克隆抗体中使用或用于产生多克隆免疫血清，所述多克隆抗体或所述多克隆免疫血清对表位具有特异性或与表位特异性结合。

97、在替代实施方案中，提供了以下的用途：(a)如本文所提供的嵌合或重组多肽；(b)如本文所提供的核酸；(c)如本文所提供的表达盒、载体、重组病毒、人工染色体、粘粒或质粒；或者，(d)如本文所提供的细胞，所述用途为用于产生多克隆抗体或用于产生多克隆免疫血清，所述多克隆抗体或所述多克隆免疫血清对表位具有特异性或与表位特异性结合。

98、在替代实施方案中，提供了包含以下的嵌合或重组多肽：通过或经由基本上非免疫原性接头与免疫原性肽或多肽缀合或附接的铁蛋白多肽，其中所述免疫原性肽或多肽包含如本文所提供的嵌合或重组多肽，并且所述铁蛋白多肽来自或源自所述第一物种。在这些嵌合或重组多肽的替代实施方案中：

99、-所述铁蛋白多肽折叠成螺旋束，所述螺旋束组装成含有24个拷贝的铁蛋白多肽的球状结构，

100、-所述基本上非免疫原性接头包括聚g接头或聚-(ggggs)接头(seq id no:31)，并且任选地所述聚-(ggggs)接头(seq id no:31)包含(ggggs)5(seq id no:29)接头或由其组成，

101、-所述铁蛋白多肽携带至少一个his(6)-lys-his(3)(seq id no:32)部分，或多个his(6)-lys-his(3)(seq id no:32)部分；

102、-任选地携带来自第二物种(例如人类)的至少一个表位的肽或嵌合多肽位于所述接头和/或一个或多个所述his(6)-lys-his(3)序列之后；

103、-可替代地，卷曲螺旋结构多肽位于所述接头和/或一个或多个his(6)-lys-his(3)序列之后，该卷曲螺旋结构多肽可以结合与免疫原性部分、肽或嵌合多肽连接的另一个卷曲螺旋结构多肽，并且其中这两个卷曲螺旋多肽都源自物种1，因此在物种1中是非免疫原性的，

104、-所述第一物种是非人动物，任选地哺乳动物，任选地兔、山羊或美洲驼，或所述铁蛋白多肽源自非人动物，任选地哺乳动物，任选地兔、山羊或美洲驼，并且任选地所述免疫原性肽或多肽包含嵌合免疫原性肽或多肽，并且所述嵌合免疫原性肽或多肽包含插入兔肽或多肽中的人免疫原性序列，并且所述兔多肽残基在注入兔体内时是非免疫原性的；和/或

105、-所述非免疫原性兔肽或多肽序列源自兔免疫球蛋白多肽。

106、在如本文所提供的嵌合或重组多肽的替代实施方案中：

107、(a)所述铁蛋白多肽包含可与第二卷曲螺旋蛋白或基序结合的至少一个第一卷曲螺旋蛋白或基序(任选地，所述第二卷曲螺旋蛋白或基序包含免疫原性肽或与免疫原性肽结合，任选地通过非免疫原性接头共价附接)，其中所述第一卷曲螺旋蛋白或基序通过非免疫原性接头附接至所述铁蛋白多肽，从而得到嵌合铁蛋白-卷曲螺旋蛋白多肽，所述嵌合铁蛋白-卷曲螺旋蛋白多肽任选地可以折叠成三级结构或螺旋束结构，

108、并且任选地所述卷曲螺旋蛋白或基序源自所述第一物种，并且任选地源自所述第一物种的卷曲螺旋蛋白或基序结合源自所述第一物种的另一卷曲螺旋蛋白或基序，

109、并且任选地所述铁蛋白多肽包含两个、三个、四个或更多个第一卷曲螺旋蛋白或基序，

110、并且任选地所述卷曲螺旋蛋白或基序包含γ-氨基丁酸b型受体亚基1异形体x1(gbr1)和/或γ-氨基丁酸b型受体亚基2(gbr2)，其中所述gbr1可以选择性地结合gbr2基序，

111、并且任选地所述gbr1基序包含：

112、stnnneeeksrllekenrelekiiaekeervselrhqlqsr(seq id no:33)，并且任选地所述gbr2基序包含：

113、svnqastsrleglqsenhrlrmkiteldkdleevtmqlqdt(seq id no:34)；

114、(b)所述铁蛋白多肽已在其氨基酸序列中插入至少一个his(6)-lys-his(3)(seqid no:32)部分，或多个his(6)-lys-his(3)(seq id no:32)部分；

115、(c)所述基本上非免疫原性接头包括聚g接头或聚-(ggggs)接头(seq id no:31)；

116、(d)所述聚-(ggggs)接头(seq id no:31)包含(ggggs)5(seq id no:29)接头或由其组成；

117、(e)所述非免疫原性接头附接至所述铁蛋白多肽的氨基末端；

118、(f)所述第一物种是兔，或所述铁蛋白多肽源自兔；

119、(g)所述免疫原性肽或多肽包含嵌合免疫原性肽或多肽，并且所述嵌合免疫原性肽或多肽包含插入兔肽或多肽中的人免疫原性序列，并且所述兔多肽残基在注入兔体内时是非免疫原性的；和/或

120、(h)所述非免疫原性兔肽或多肽序列源自兔免疫球蛋白多肽。

121、在替代实施方案中，提供了包含多种如本文所提供的嵌合或重组多肽的制品，并且任选地所述制品包含24种所述嵌合或重组多肽，

122、并且任选地所述嵌合或重组多肽中的每一种包含卷曲螺旋蛋白，并且所述卷曲螺旋蛋白彼此结合。

123、在替代实施方案中，提供了用于在兔中产生表位特异性抗体应答的方法，其中所述免疫应答包括产生特异性针对(或特异性结合)至少一个人表位的兔抗体，并且所述方法包括向兔施用足够量的如本文所提供的嵌合或重组多肽以产生所述表位特异性抗体应答。

124、在下面的附图和描述中阐述了本发明的一个或多个示例性实施方案的细节。根据描述和附图以及根据权利要求，本发明的其他特征、目标和优点将变得清楚。

125、出于所有目的将本文引用的所有出版物、专利、专利申请都通过引用以其整体明确地特此并入。