1.一种基于微流控和流式细胞术联用的丝状真菌高通量筛选方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)所述突变体文库的构建采用常压室温等离子体诱变技术,诱变条件设定为:孢子或原生质体悬液用量为10μl,载片与等离子体发生器射流出口间距为2mm,功率为120w,通气量10slm,诱变时间为150-180s。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)所述培养基配方为:2%葡萄糖、0.5%胰蛋白胨、0.1%酵母粉、0.1%nano3、0.05%kh2po4、0.05%mgso4·7h2o、0.001%feso4·7h2o,余量为水。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)所述培养基中的孢子或原生质体浓度根据泊松分布中的λ值计算获得;所述原生质体需要在高渗条件下预培养3-6h完成再生后再进行包埋。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)所述静止培养的时间为20-24h。
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(5)所述分选的目标产物可以是胞内积累的,也可以是胞外分泌的。
7.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(5)所述富集条件为油相流速为5-10μl/min,液滴流速为1-2μl/min,富集的速率为10000-20000个液滴/h,且富集的阳性效率达到50%以上。
8.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(6)所述发酵的培养基配方为:2%葡萄糖、0.5%胰蛋白胨、0.1%酵母粉、0.1%nano3、0.05%kh2po4、0.05%mgso4·7h2o、0.001%feso4·7h2o;发酵条件为:30℃、220rpm培养24h。
9.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(7)所述摇瓶发酵的条件为:30℃、220rpm培养72h。
10.权利要求1-9任意一项所述方法在筛选分泌表达的酶蛋白的高产菌株,或筛选丝状真菌内源的整合位点和启动子,或实现丝状真菌的高通量筛选和高效纯化分离中的应用。