一株多功能普沙根瘤菌、含有其的微生物菌剂及应用

本发明涉及微生物及其应用，尤其是涉及一株多功能普沙根瘤菌、含有其的微生物菌剂及应用。

背景技术：

1、植物根际有益微生物（pgpr）指的是能够定殖在植物体表或体内，对植物体没有伤害的同时，还能够促进植物生长或者帮助植物体抵御病原的一类微生物。目前已有研究指出，植物根际有益微生物能够通过产生植物激素，溶解土壤中的难溶矿质元素，提高养分利用率以及降解土壤中的一些污染元素而促进植物的生长；也可以通过直接抑制病原物活性或诱导植株系统抗性抑制植物病害的发生。

2、根结线虫（meloidogyne）是一种高度专化型的杂食性植物病原线虫。随着近十年来农业种植业结构的深化调整，设施蔬菜栽培得到了迅速发展，同时也导致根结线虫的发生面积逐渐增大，危害也越来越严重。黄瓜作为第一大设施蔬菜作物，同时也是对南方根结线虫最为敏感的蔬菜作物。当黄瓜植株受到根结线虫侵害后，受害较轻时地上部分症状不明显，受害较重时植株一般出现发育停滞、矮化，叶片变薄或变黄等症状，最为严重时可导致整个植株死亡。

3、根结线虫的防治主要采用化学农药法，不仅会降低蔬菜品质，而且还会破坏土壤的生态平衡，造成环境污染。将植物根际有益微生物应用到植物病害的防治上具有很多的优点，相对传统化学农药而言，生防微生物广谱性更高，并且对环境污染较小。目前关于黄瓜根际有益微生物在根结线虫防治方面的介绍较少，因此，筛选出高效的防治根结线虫的有益菌株成为国内外研究的热点。

4、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一株多功能普沙根瘤菌、含有其的微生物菌剂及应用。

2、为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

3、在一个方面，本发明提供了一株多功能普沙根瘤菌，所述普沙根瘤菌为普沙根瘤菌（ rhizobium pusense）tyq1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：cgmcc no. 26530。

4、本发明从发生根结线虫病的黄瓜的根际土壤中分离筛选到一株新的植物根际有益菌，该菌株的单菌落呈圆形，边缘光滑，乳白色，中央微凸起，该菌体呈棒状，革兰氏染色为阴性。通过16s rdna分子鉴定该菌株为普沙根瘤菌（ rhizobium pusense）tyq1。本发明的普沙根瘤菌tyq1菌株是一株综合性能优异的菌株，除具有分泌生长素、促进植物生长的功能之外，还具有溶磷和耐盐的功能，并且该菌株的发酵上清液对根结线虫有较强的触杀能力，可用于防治根结线虫，尤其是有利于黄瓜根结线虫的早期防治。

5、在另一个方面，本发明提供了微生物菌剂，所述微生物菌剂包含前述的普沙根瘤菌（ rhizobium pusense）tyq1或其发酵产物。

6、在一个实施方案中，所述微生物菌剂中，所述普沙根瘤菌（ rhizobium pusense）tyq1的总活菌数为0.5×105-1×109 cfu·ml-1。

7、在一个实施方案中，所述微生物菌剂的制备方法包括：将所述普沙根瘤菌（ rhizobium pusense）tyq1接种于液体培养基，将菌液培养至od600为0.6-0.8，然后将菌液离心弃上清液，用等体积的缓冲液悬浮。

8、在一个可选的实施方案中，将所述普沙根瘤菌（ rhizobium pusense）tyq1接种至lb液体培养基，在180 rpm/min和28℃条件下将菌液培养至od600为0.8，然后将菌液在8000rmp/min转速下离心5分钟，弃上清液，用等体积的10 mm mgso4缓冲液悬浮后即得菌剂。与常规的缓冲液如无菌水、低浓度氯化钠缓冲液相比，采用mgso4缓冲液的优势在于该缓冲液中所含的镁离子有助于细菌的生长和维持细菌的活性。

9、在另一个方面，本发明提供了前述普沙根瘤菌（ rhizobium pusense）

10、tyq1或含有其的微生物菌剂在以下至少一个方面中的应用：

11、（a）溶磷；

12、（b）分泌生长素；

13、（c）触杀根结线虫；

14、（d）抗盐；

15、（e）促进植物生长。

16、在一个实施方案中，所述溶磷包括溶解难溶性无机磷。

17、在一个实施方案中，所述根结线虫为南方根结线虫。

18、在一个实施方案中，所述促进植物生长包括促进黄瓜幼苗生长。

19、在另一个方面，本发明提供了一种提高土壤磷利用率并防治黄瓜根结线虫的方法，包括将普沙根瘤菌（ rhizobium pusense）tyq1的菌粉、发酵上清液、菌悬液、孢子悬液和/或含有其的菌剂与黄瓜种子进行拌种，或作为肥料施用于黄瓜植株生长区域。

20、在一个实施方案中，当黄瓜幼苗长至第一片真叶刚刚露出时，将含有所述普沙根瘤菌（ rhizobium pusense）tyq1的菌剂浇灌在健康或感病植株根围土壤。

21、保藏信息：本发明提供的普沙根瘤菌（ rhizobium pusense），菌株名为tyq1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏时间为：2023年2月8日，保藏编号cgmcc no.26530。经保藏中心于2023年2月8日检测为存活菌株。

22、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

23、（1）本发明的普沙根瘤菌（ rhizobium pusense）tyq1是发明人通过大量筛选工作，首次于感病黄瓜植株中筛选得到的，该菌株具有良好的耐盐、溶磷性，菌株tyq1可以溶解无机磷培养基中的难溶性磷酸盐，具有提高植物对磷元素吸收效率的潜力，同时其耐盐性可有助于盐碱环境下植物的防病促生。

24、（2）本发明的普沙根瘤菌（ rhizobium pusense）tyq1可以分泌iaa，在色氨酸存在下其分泌iaa的浓度为5.329 µg/ml。该菌株有促进黄瓜幼苗生长的作用，当接种于健康或感病黄瓜植株根围土壤时，能够显著增大黄瓜植株的株高和茎粗，显著促进了黄瓜幼苗的干物质积累，并促进黄瓜幼苗的根系生长。

25、（3）本发明的普沙根瘤菌（ rhizobium pusense）tyq1的菌株发酵液上清对离体的根结线虫处理24h后，根结线虫的致死率达到98.4%，将菌株发酵上清液稀释6倍，对根结线虫的致死性仍能达到95%以上。当将tyq1菌剂接种在根结线虫感病黄瓜植株根围土壤时，滞缓了根结线虫在黄瓜根系内的发育进程，黄瓜根系的单位根结数降低了53.24%，卵块数降低了72.74%，有利于根结线虫的早期防治，对黄瓜植株栽培和根结线虫防治具有较大意义。

26、（4）本发明菌株不仅具有耐盐、溶磷性并且同时能够分泌生长素以及防治根结线虫，综合性能突出，可用于稳定防治植物根结线虫病害且兼具抗逆性，有利于提高植物磷利用率以及促进植物生长，本发明为黄瓜植物栽培和防病提供了一种新的有益的微生物资源。