外周血RNA修饰标志物m7G在诊断PCOS试剂盒中的应用

本发明属于生物医学，具体涉及外周血rna修饰标志物m7g在诊断pcos试剂盒中的应用。

背景技术：

1、公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、多囊卵巢综合征(pcos)是一种复杂的、常见的生殖内分泌疾病，影响高达7.8％的育龄期妇女，是无排卵性不孕症的主要原因之一。pcos的常见临床特征包括胰岛素抵抗、月经周期不规则、高雄激素血症、内分泌代谢异常等，其病因复杂多样，临床表现具有异质性，使得pcos的诊断标准很难统一。

3、pcos是基因遗传易感性及环境因素共同作用的结果，表观遗传学在其发病过程中发挥了重要的作用，包括dna甲基化、组蛋白修饰、rna修饰等。研究表明rna修饰参与颗粒细胞的增殖、凋亡等重要过程，pcos患者颗粒细胞存在foxo3、flot2 mrna的rna修饰水平改变，影响其基因表达，参与pcos的发生。

4、目前常用的pcos诊断是2003年鹿特丹诊断标准，即以下3项中存在2项则可诊断pcos：1)稀发排卵或无排卵，2)高雄激素血症或高雄激素的临床表现(如多毛、痤疮等)，3)月经周期3-5天超声检查显示任意一侧卵巢体积≥10ml或者存在≥12个直径2-9mm的卵泡；此外还要排除高雄激素血症的其他原因(高泌乳素血症、甲状腺疾病、先天性肾上腺皮质增生、库欣综合征、雄激素分泌性肿瘤、21-羟化酶缺乏性非典型肾上腺皮质增生等疾病)。基于目前的诊断标准，需要进行多次抽血进行数项检查，包括：雌激素、睾酮、促卵泡激素、促黄体生成素、催乳素、孕激素，抗米勒管激素、脱氢表雄酮、性激素结合球蛋白，空腹血糖、空腹胰岛素、口服葡萄糖耐量实验等；超声检查包括经腹超声和经阴道(直肠)超声两种方法：腹部超声检查常受肠道气体、腹壁上层脂肪的影响，难以清晰显示皮髓质及髓质血流情况，经阴道(直肠)超声虽然可以避免经腹部超声的缺点，但也常受操作人员操作方式和主观的影响，无法正确估计卵巢和卵泡的体积，影响后续诊断的准确准确性。

5、随着生物技术的发展，分子生物标志物为pcos的诊断提供了新的思路。目前关于pcos的分子诊断物包括代谢产物、卵泡数目、snp标记等。然而传统诊断方法仍需要结合问诊、超声和多种免疫生化试剂盒的联合检测，存在复杂、成本高、主观性强等缺点。

技术实现思路

1、为了解决现有技术的不足，本发明的目的是提供外周血rna修饰标志物m7g在制备诊断pcos试剂盒中的应用。本发明基于三重串联液质联用质谱仪(lc-ms/ms)建立高通量rna修饰定量检测分析平台，发现了pcos患者与对照之间的差异rna修饰，将这些差异rna修饰通过构建贝叶斯广义线性模型，进一步发现了pcos患者外周血中m7g可以作为pcos诊断的特异性分子标志物，该分子标志物在pcos诊断中灵敏度、敏感度高，检测方法简单。

2、为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：

3、第一方面，本发明提供了外周血rna修饰标志物m7g在制备诊断pcos试剂盒中的应用。

4、上述本发明的一种或多种技术方案取得的有益效果如下：

5、本发明利用lc-ms/ms，在训练队列的外周血中发现并量化了15种rna修饰类型：m2,2,7g,m1a,m7g,m5c,m5u,m1g,m2g,m2,2g,gm,i,am,im,m6a,cm,um，其中cm表达最高，m2,2,7g表达最低。相较于健康的对照患者，在pcos患者外周血中鸟嘌呤的、m7g修饰水平显著增加。

6、构建贝叶斯广义线性模型进行拟合分析的结果表明，在发现队列中，将15种rna修饰标记及其定量信息纳入构建模型1，准确度auc可达到1.00；m7g是具有最显著差异的修饰，将m7g的定量信息纳入构建模型2，其准确度auc达到0.954；在验证队列中进行验证，结果显示模型1的auc达到0.923；模型2的auc达到0.889。

7、本发明基于lc-ms/ms高通量rna修饰检测平台与机器学习的方法发现pcos的rna修饰特异性标志物——m7g，其高灵敏度和敏感度说明m7g能够作为pcos诊断的特异性分子标志物，用于pcos诊断试剂盒的开发。

技术特征：

1.外周血rna修饰标志物m7g在制备诊断pcos试剂盒中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒中包括检测m7g修饰水平的检测试剂。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒的受试样品为外周血。

技术总结
本发明属于生物医学技术领域，具体涉及外周血RNA修饰标志物m<supgt;7</supgt;G在制备诊断PCOS试剂盒中的应用。本发明基于三重串联液质联用质谱仪(LC‑MS/MS)建立高通量RNA修饰定量检测分析平台，发现了PCOS患者与对照之间的差异RNA修饰，将这些差异RNA修饰通过构建贝叶斯广义线性模型，进一步发现了PCOS患者外周血中m<supgt;7</supgt;G可以作为PCOS诊断的特异性分子标志物，该分子标志物在PCOS诊断中灵敏度、敏感度高，检测方法简单。

技术研发人员：陈子江,张莹,赵涵,张力文,董森,赵世刚,闫雪琪,高雪莹
受保护的技术使用者：山东大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13