人参皂苷Rb2在灭活病毒中的应用

本发明涉及灭活疫苗制备，特别涉及人参皂苷rb2在灭活病毒中的应用。

背景技术：

1、病毒灭活是疫苗生产中的一个重要环节，其目的是通过灭活病原体，使其失去致病性的同时保持免疫原性，从而制备出安全有效的疫苗，因此，病毒灭活效果对于疫苗的质量和安全性有着至关重要的影响。

2、目前，常用的病毒灭活方法包括化学灭活、热灭活和辐射灭活等。化学灭活是最常用的灭活手段之一，通过化学试剂使病毒失去活性；常见的用于疫苗的化学灭活剂包括甲醛、戊二醛、β-丙内酯和过氧化氢等，具有灭活效果好、操作简便等优点，但存在易污染、易破坏病毒免疫原性、易导致免疫副反应等问题。热灭活是另一种常用的灭活手段，通过加热使病毒失去活性；优点在于操作简单、灭活效果稳定，但可能会对病毒的免疫原性产生影响。辐射灭活是一种新兴的灭活手段，通过电离辐射或紫外线辐射使病毒失去活性；优点是操作简单、灭活效果稳定，但也存在对病毒免疫原性产生不可逆的破坏以及对疫苗质量产生影响等问题。在工业应用中，需要根据具体的病毒特点和工艺要求选择合适的灭活手段。

3、相比于传统的采用化学合成类灭活剂的化学灭活方法相比，中药植物来源化合物本身具有安全性高、免疫原性好等优点，更加符合医药安全的需要，在疫苗生产中显示出独特的优势。但是目前开发的中药活性成分多用于抗病毒药或者疫苗佐剂方面的研究，抗病毒作用主要包括两个方面：一是药物对病毒的直接作用，包括阻断病毒对宿主细胞的吸附、抑制病毒在宿主细胞内复制等，二是间接抗病毒作用，即通过激活或提高机体的免疫力，例如通过中药有效成分作用于免疫细胞、细胞因子等，进而增强机体免疫系统对病毒的清除作用。然而，能够抑制病毒的吸附、复制的化合物不一定能够使病毒失去感染细胞的能力(即病毒灭活效应)，例如黄酮类、多糖及其衍生物、三萜类化合物及其衍生物(如甘草甜素衍生物)、生物碱及苷类等能阻止病毒颗粒对宿主细胞的吸附从而发挥抗病毒作用，然而其并不能直接杀灭病毒使其失去活性，再例如多酚类物质可以抑制病毒蛋白质和rna的合成，但其同样难以使病毒失去感染细胞的能力。因此，迄今为止，较少有抗病毒的中药活性化合物应用于病毒灭活疫苗的制备，关于中药来源化合物进行病毒灭活的研究还是鲜有报道。筛选出能够通过某种途径完全使病毒丧失感染细胞能力的中药化合物具有广阔的应用前景，将为灭活疫苗生产提供更加安全、高效和经济的选择。

技术实现思路

1、针对现有技术无有效的灭活病毒的中药来源化合物等问题，本发明提供了人参皂苷rb2在灭活病毒中的应用，并提供了一种利用人参皂苷rb2灭活病毒制备灭活疫苗的方法，以解决或至少部分解决现有技术中的问题。

2、为实现上述目的，本发明具体通过以下技术方案实现：

3、本发明第一方面提供了人参皂苷rb2在灭活病毒中的应用，所述病毒为黄病毒属病毒。

4、进一步地，所述黄病毒属病毒包括寨卡病毒和乙型脑炎病毒中的至少一种。

5、更进一步地，所述寨卡病毒毒株为寨卡病毒sz01/2016/china株，所述乙型脑炎病毒毒株为乙型脑炎病毒at31株。

6、进一步地，所述灭活病毒的方法包括：将所述黄病毒属病毒与所述人参皂苷rb2混合，使反应溶液中所述人参皂苷rb2终浓度为100μm-400μm，在35℃-39℃孵育所述反应溶液6-24h。

7、更进一步地，所述灭活病毒的方法包括：将所述黄病毒属病毒与所述人参皂苷rb2混合，使反应溶液中所述人参皂苷rb2终浓度为200μm-400μm，在35℃-39℃孵育所述反应溶液10-14h。

8、再进一步地，所述灭活病毒的方法包括：将所述黄病毒属病毒与所述人参皂苷rb2混合，使反应溶液中所述人参皂苷rb2终浓度为200μm，在37℃孵育所述反应溶液10-14h。

9、进一步地，所述反应溶液中所述黄病毒属病毒的浓度为1×106-1×107pfu/ml。

10、本发明第二方面提供了一种利用人参皂苷rb2灭活病毒制备灭活疫苗的方法，包括以下步骤：

11、s1、向黄病毒属病毒溶液中加入人参皂苷rb2，至所述人参皂苷rb2的浓度为100μm-400μm，在35℃-39℃孵育6-24h，得到灭活病毒液；

12、s2、将所述灭活病毒液与弗氏佐剂混合，乳化，得到灭活疫苗。

13、进一步地，所述弗氏佐剂为弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂1：1的混合液。

14、进一步地，所述灭活病毒液与所述弗氏佐剂的体积比为1：1。

15、本发明的优点及积极效果为：

16、1、本发明提供了一种安全有效的病毒灭活剂—人参皂苷rb2，人参皂苷单体化合物rb2在安全无毒性范围内能够有效地杀灭黄病毒属病毒，直接使病毒不可逆地失去感染细胞的能力，且保留灭活病毒的免疫原性，适用于制备灭活疫苗。

17、2、本发明提供的rb2具有佐剂活性和增强免疫的作用，可以在高效灭活黄病毒属病毒的同时增强免疫原性和免疫保护效果，有利于显著提高灭活疫苗质量和生物安全性，为灭活疫苗的安全性、有效性提供了有利保障。

18、3、本发明利用人参皂苷rb2作为黄病毒属病毒灭活剂，人参皂苷rb2没有生物毒性，无需后续纯化工序，可以简化疫苗的制备。

技术特征：

1.人参皂苷rb2在灭活病毒中的应用，其特征在于，所述病毒为黄病毒属病毒。

2.根据权利要求1所述的人参皂苷rb2在灭活病毒中的应用，其特征在于，所述黄病毒属病毒包括寨卡病毒和乙型脑炎病毒中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的人参皂苷rb2在灭活病毒中的应用，其特征在于，所述寨卡病毒毒株为寨卡病毒sz01/2016/china株，所述乙型脑炎病毒毒株为乙型脑炎病毒at31株。

4.根据权利要求1-3任一项所述的人参皂苷rb2在灭活病毒中的应用，其特征在于，所述灭活病毒的方法包括：将所述黄病毒属病毒与所述人参皂苷rb2混合，使反应溶液中所述人参皂苷rb2终浓度为100μm-400μm，在35℃-39℃孵育所述反应溶液6-24h。

5.根据权利要求4所述的人参皂苷rb2在灭活病毒中的应用，其特征在于，所述灭活病毒的方法包括：将所述黄病毒属病毒与所述人参皂苷rb2混合，使反应溶液中所述人参皂苷rb2终浓度为200μm-400μm，在35℃-39℃孵育所述反应溶液10-14h。

6.根据权利要求5所述的人参皂苷rb2在灭活病毒中的应用，其特征在于，所述灭活病毒的方法包括：将所述黄病毒属病毒与所述人参皂苷rb2混合，使反应溶液中所述人参皂苷rb2终浓度为200μm，在37℃孵育所述反应溶液10-14h。

7.根据权利要求4所述的人参皂苷rb2在灭活病毒中的应用，其特征在于，所述反应溶液中所述黄病毒属病毒的浓度为1×106-1×107pfu/ml。

8.一种利用人参皂苷rb2灭活病毒制备灭活疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

9.根据权利要求8所述的利用人参皂苷rb2灭活病毒制备灭活疫苗的方法，其特征在于，所述弗氏佐剂为弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂1：1的混合液。

10.根据权利要求8所述的利用人参皂苷rb2灭活病毒制备灭活疫苗的方法，其特征在于，所述灭活病毒液与所述弗氏佐剂的体积比为1：1。

技术总结
本发明属于灭活疫苗制备技术领域，尤其涉及人参皂苷Rb2在灭活病毒中的应用。本发明提供了一种新型的安全有效的病毒灭活剂—人参皂苷Rb2，人参皂苷单体化合物Rb2在安全无毒性范围内能够有效地杀灭黄病毒属病毒，直接使病毒不可逆地失去感染细胞的能力，且保留灭活病毒的免疫原性，适用于制备灭活疫苗。而且Rb2具有佐剂活性和增强免疫的作用，可以在高效灭活病毒的同时增强免疫原性和免疫保护效果，有利于显著提高灭活疫苗质量和生物安全性，为灭活疫苗的安全性、有效性提供了有利保障。

技术研发人员：郑振华,谌翰林,吴桐,丁庆文,谭忠元,魏锦博,张乃楼
受保护的技术使用者：中国科学院武汉病毒研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16