用于降低肿瘤侵袭能力并解除免疫抑制的蛋白质及其应用

本发明属于生物医药，具体涉及一种用于降低肿瘤侵袭能力并解除免疫抑制的蛋白质及其应用。

背景技术：

1、恶性肿瘤因其高昂的治疗费用、易转移和复发、耐药和免疫抑制等仍然是威胁人类生命的最可怕的杀手之一。肿瘤抗原大致可分为细胞外抗原和细胞内抗原。绝大多数基于抗体的研究都集中在针对细胞表面抗原的研究上，但细胞表面的靶标是有限的，因为细胞内肿瘤抗原占大多数肿瘤靶标，而细胞内肿瘤靶标的巨大宝库尚未开发。2009年，国家癌症研究所(nci)进行了一项试点项目，列出并评分癌症抗原，以确定后续癌症疫苗项目的优先顺序。在76个肿瘤抗原中，42个为膜蛋白或可溶性分泌蛋白，34个为细胞内蛋白。令人惊讶的是，在20个顶级靶点中，有11个属于细胞内蛋白抗原，这表明细胞内蛋白作为肿瘤靶点具有巨大的潜力。因此，基于细胞内蛋白抗原的多靶点治疗是高效治疗肿瘤的有利手段。

2、角蛋白中间丝是上皮细胞的细胞骨架的重要组成部分，其形成一个稳定而动态的丝状网络，提供对机械应力的抵抗力。角蛋白一直以来被当作诊断和预后标志物，但大量研究表明，角蛋白在肿瘤发生和发展中积极调节作用，与癌症侵袭及转移等行为息息相关，例如研究表明肿瘤细胞内的细胞角蛋白81(keratin 81，简称k81)可促进肿瘤细胞的转移。磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称ps)是一类普遍存在的磷脂，通常位于细胞膜内层。肿瘤细胞和肿瘤血管内皮细胞表面暴露的ps能够招募抑制性细胞和m2巨噬细胞并产生抗炎细胞因子，从而促进免疫抑制微环境的产生。基于此，设计用于结合肿瘤细胞中k81和ps的蛋白质可能有利于降低肿瘤的侵袭能力并改变免疫抑制状态。

技术实现思路

1、为了提高肿瘤治疗效果，本发明提供一种用于降低肿瘤侵袭能力并解除免疫抑制的蛋白质，其名称为ska511，其氨基酸序列如seq id no：1所示。

2、本发明还提供编码上述蛋白质(ska511)的基因。

3、在本发明的一些实施例中，上述基因的核苷酸序列如seq id no：2所示。

4、含有上述基因的表达盒、载体、细菌或真菌也属于本发明的保护范围。所述载体可以是克隆载体或表达载体。所述细菌可以是大肠杆菌。所述真菌可以是酵母菌。

5、上述蛋白质在制备用于肿瘤细胞内治疗的药物中的用途也属于本发明的保护范围。

6、本发明还提供用于肿瘤细胞内治疗的药物，其包含上述蛋白质(ska511)。

7、在本发明的一些实施例中，上述药物的剂型为注射剂。

8、本发明还提供制备上述蛋白质(ska511)的方法，其包括：将编码上述蛋白质的基因导入表达载体中，得到重组载体；将所述重组载体导入表达宿主菌中，得到重组菌；培养所述重组菌并诱导蛋白表达；提取和纯化蛋白。

9、体外自组装实验表明低浓度的ska511也可以与细胞角蛋白81(k81)良好地组装(图2)。细胞共定位实验表明ska511可以在肿瘤细胞内与k81有效结合(图3)。细胞划痕实验和transwell实验表明ska511可以降低小鼠乳腺癌细胞(4t1)的迁移和侵袭能力(图4和图5)。同时ska511能够与磷脂酰丝氨酸(ps)特异性结合(图6)。因此，本发明提供的蛋白质ska511能够降低肿瘤细胞的迁移和侵袭能力，解除免疫抑制，从而改善肿瘤发展进程。

技术特征：

1.用于降低肿瘤侵袭能力并解除免疫抑制的蛋白质，其氨基酸序列如seq id no：1所示。

2.编码权利要求1所述的蛋白质的基因。

3.权利要求2所述的基因，其核苷酸序列如seq id no：2所示。

4.含有权利要求2或3所述的基因的表达盒。

5.含有权利要求2或3所述的基因的载体。

6.含有权利要求2或3所述的基因的细菌或真菌。

7.权利要求1所述的蛋白质在制备用于肿瘤细胞内治疗的药物中的用途。

8.用于肿瘤细胞内治疗的药物，其包含权利要求1所述的蛋白质。

9.权利要求8所述的药物，其剂型为注射剂。

10.制备权利要求1所述的蛋白质的方法，其包括：将权利要求2或3所述的基因导入表达载体中，得到重组载体；将所述重组载体导入表达宿主菌中，得到重组菌；培养所述重组菌并诱导蛋白表达；提取和纯化蛋白。

技术总结
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种用于降低肿瘤侵袭能力并解除免疫抑制的蛋白质及其应用。提供的用于降低肿瘤侵袭能力并解除免疫抑制的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。所述蛋白质能够同时结合肿瘤细胞内的细胞角蛋白81(K81)和磷脂酰丝氨酸(PS)，抑制肿瘤细胞转移，解除免疫抑制，从而改善肿瘤的发展进程。

技术研发人员：郝石磊,王伯初,侯瑶,张豪杰
受保护的技术使用者：重庆大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15