用于抑制血管紧张素原表达的siRNA、其缀合物和药物组合物及用途的制作方法

本技术涉及抑制血管紧张素原(agt)基因表达的sirna、sirna缀合物、包含其的药物组合物、其制备方法和用途。

背景技术：

1、血管紧张素原(agt)，也被称为serpina8或anhu，是丝氨酸蛋白酶抑制剂家族的成员并且是肾素-血管紧张素-醛固酮系统(raas)的组分。它主要在肝脏中产生，并且释放到循环系统中，在此处肾素将其转化为血管紧张素i。随后通过血管紧张素转化酶(ace)将血管紧张素i转化成血管紧张素ii。血管紧张素ii是引起血管收缩的肽激素，其进而可以增加血压。血管紧张素ii也刺激肾上腺皮质的激素醛固酮的分泌。醛固酮使肾脏增加钠和水的重吸收，导致体内流体体积的增加，进而可以增加血压。raas途径的过度刺激或活动可导致高血压。

2、高血压是各种疾病、病症和病状的主要危险因素，所述疾病、病症和病状诸如预期寿命缩短、慢性肾病、中风、心肌梗塞、心力衰竭、血管动脉瘤(例如主动脉瘤)、外周动脉疾病、心脏损伤(例如，心脏扩大或肥大)和其他心血管相关疾病、病症和/或病状。然而，目前批准用于治疗高血压的疗法存在局限性，因为所有高血压患者未能实现足够的血压控制。例如，靶向肾素-血管紧张素-醛固酮系统系统(raas)途径的部分的药物诸如ace抑制剂和血管紧张素受体阻滞剂(arb)抑制raas途径的能力有限(nobakht等人,nat rev nephrol，2011，7:356-359)。另外，某些抗高血压药物(诸如ace抑制剂)在患有肾病的高血压患者中是禁忌的，因为它们有可能危及患者的肾功能。因此，需要寻找替代疗法来抑制raas途径并治疗高血压。

3、目前尚无靶向agt的药物上市，这些药物仍处于临床阶段，如ionis的反义核酸药物isis-904处于临床1期，用于难治性高血压的治疗，因此开发靶向agt的药物具有重大的意义和市场前景。

4、本发明旨在提供sirna、sirna缀合物及其药物组合物，其可以抑制肝脏中agt基因的表达，从而实现疾病治疗的目的。

技术实现思路

1、本发明提供了一种能够抑制agt基因表达的sirna，所述sirna包含正义链与反义链，其中所述sirna中的每个核苷酸各自独立地为修饰或未修饰的核苷酸，其中所述正义链含有核苷酸序列i，反义链含有核苷酸序列ii，所述核苷酸序列i和所述核苷酸序列ii至少部分地反向互补形成双链区，其中所述核苷酸序列i和核苷酸序列ii选自以下序列：

2、(1)所述核苷酸序列i包含seq id no:121所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:122所示的核苷酸序列：

3、5’-gcuagucgcugca-3’(seq id no:121)

4、5’-ugcagcgacuagc-3’(seq id no:122)，

5、其中所述核苷酸序列i不为seq id no:27，且所述核苷酸序列ii不为seq id no:28；

6、(2)所述核苷酸序列i包含seq id no:123所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:124所示的核苷酸序列：

7、5’-ccuuggaaggacaaga-3’(seq id no:123)

8、5’-ucuuguccuuccaagg-3’(seq id no:124)；

9、(3)所述核苷酸序列i包含seq id no:125所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:126所示的核苷酸序列：

10、5’-gugcugaacagcauuu-3’(seq id no:125)

11、5’-aaaugcuguucagcac-3’(seq id no:126)；

12、(4)所述核苷酸序列i包含seq id no:127所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:128所示的核苷酸序列：

13、5’-cuacccaacagcu-3’(seq id no:127)

14、5’-agcuguuggguag-3’(seq id no:128)；

15、(5)所述核苷酸序列i包含seq id no:1所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:2所示的核苷酸序列；

16、(6)所述核苷酸序列i包含seq id no:5所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:6所示的核苷酸序列；

17、(7)所述核苷酸序列i包含seq id no:7所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:8所示的核苷酸序列；

18、(8)所述核苷酸序列i包含seq id no:53所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:54所示的核苷酸序列；

19、(9)所述核苷酸序列i包含seq id no:55所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:56所示的核苷酸序列；

20、(10)所述核苷酸序列i包含seq id no:61所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:62所示的核苷酸序列；

21、(11)所述核苷酸序列i包含seq id no:63所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:64所示的核苷酸序列；

22、(12)所述核苷酸序列i包含seq id no:67所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:68所示的核苷酸序列；

23、(13)所述核苷酸序列i包含seq id no:69所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:70所示的核苷酸序列；

24、(14)所述核苷酸序列i包含seq id no:119所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:120所示的核苷酸序列；

25、(15)所述核苷酸序列i包含seq id no:446所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:447所示的核苷酸序列：

26、5’-ucuggguacua-3’(seq id no:446)

27、5’-uaguacccaga-3’(seq id no:447)；

28、(16)所述核苷酸序列i包含seq id no:448所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:449所示的核苷酸序列：

29、5’-cugcuccaauu-3’(seq id no:448)

30、5’-aauuggagcag-3’(seq id no:449)；

31、(17)所述核苷酸序列i包含seq id no:450所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:451所示的核苷酸序列：

32、5’-cugcaaaacuu-3’(seq id no:450)

33、5’-aaguuuugcag-3’(seq id no:451)；

34、(18)所述核苷酸序列i包含seq id no:452所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:453所示的核苷酸序列：

35、5’-cucucuauaccccu-3’(seq id no:452)

36、5’-agggguauagagag-3’(seq id no:453)；

37、(19)所述核苷酸序列i包含seq id no:454所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:455所示的核苷酸序列：

38、5’-caagugcccuuca-3’(seq id no:454)

39、5’-ugaagggcacuug-3’(seq id no:455)；

40、(20)所述核苷酸序列i包含seq id no:456所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:457所示的核苷酸序列：

41、5’-acagagucuacccaa-3’(seq id no:456)

42、5’-uuggguagacucugu-3’(seq id no:457)；

43、(21)所述核苷酸序列i包含seq id no:458所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:459所示的核苷酸序列：

44、5’-gucgacuuugagcugga-3’(seq id no:458)

45、5’-uccagcucaaagucgac-3’(seq id no:459)；

46、(22)所述核苷酸序列i包含seq id no:460所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:461所示的核苷酸序列：

47、5’-gaaagcagccgu-3’(seq id no:460)

48、5’-acggcugcuuuc-3’(seq id no:461)；

49、(23)所述核苷酸序列i包含seq id no:462所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:463所示的核苷酸序列：

50、5’-ggcacaaaugcaccu-3’(seq id no:462)

51、5’-aggugcauuugugcc-3’(seq id no:463)；

52、(24)所述核苷酸序列i包含seq id no:464所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:465所示的核苷酸序列：

53、5’-gcagcuggcaa-3’(seq id no:464)

54、5’-uugccagcugc-3’(seq id no:465)；

55、(25)所述核苷酸序列i包含seq id no:269所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:270所示的核苷酸序列：

56、5’-caaugccgggaagcccaaa-3’(seq id no:269)

57、5’-uuugggcuucccggcauug-3’(seq id no:270)；

58、(26)所述核苷酸序列i包含seq id no:466所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:467所示的核苷酸序列：

59、5’-accuucauaccu-3’(seq id no:466)

60、5’-agguaugaaggu-3’(seq id no:467)；

61、(27)所述核苷酸序列i包含seq id no:468所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:469所示的核苷酸序列：

62、5’-ccaggaguucu-3’(seq id no:468)

63、5’-agaacuccugg-3’(seq id no:469)；

64、(28)所述核苷酸序列i包含seq id no:470所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:471所示的核苷酸序列：

65、5’-ccacugcccugcacuucc-3’(seq id no:470)

66、5’-ggaagugcagggcagugg-3’(seq id no:471)；

67、(29)所述核苷酸序列i包含seq id no:472所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:473所示的核苷酸序列：

68、5’-agcuggugcuagucg-3’(seq id no:472)

69、5’-cgacuagcaccagcu-3’(seq id no:473)；

70、(30)所述核苷酸序列i包含seq id no:474所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:475所示的核苷酸序列：

71、5’-acagcuuaacaa-3’(seq id no:474)

72、5’-uuguuaagcugu-3’(seq id no:475)；

73、(31)所述核苷酸序列i包含seq id no:476所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:477所示的核苷酸序列：

74、5’-gccguuucuccuu-3’(seq id no:476)

75、5’-aaggagaaacggc-3’(seq id no:477)；

76、(32)所述核苷酸序列i包含seq id no:141所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:142所示的核苷酸序列；

77、(33)所述核苷酸序列i包含seq id no:145所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:146所示的核苷酸序列；

78、(34)所述核苷酸序列i包含seq id no:177所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:178所示的核苷酸序列；

79、(35)所述核苷酸序列i包含seq id no:179所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:180所示的核苷酸序列；

80、(36)所述核苷酸序列i包含seq id no:181所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:182所示的核苷酸序列；

81、(37)所述核苷酸序列i包含seq id no:187所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:188所示的核苷酸序列；

82、(38)所述核苷酸序列i包含seq id no:189所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:190所示的核苷酸序列；

83、(39)所述核苷酸序列i包含seq id no:191所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:192所示的核苷酸序列；

84、(40)所述核苷酸序列i包含seq id no:193所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:194所示的核苷酸序列；

85、(41)所述核苷酸序列i包含seq id no:199所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:200所示的核苷酸序列；

86、(42)所述核苷酸序列i包含seq id no:201所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:202所示的核苷酸序列；

87、(43)所述核苷酸序列i包含seq id no:203所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:204所示的核苷酸序列；

88、(44)所述核苷酸序列i包含seq id no:223所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:224所示的核苷酸序列；

89、(45)所述核苷酸序列i包含seq id no:243所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:244所示的核苷酸序列；

90、(46)所述核苷酸序列i包含seq id no:245所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:246所示的核苷酸序列；

91、(47)所述核苷酸序列i包含seq id no:247所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:248所示的核苷酸序列；

92、(48)所述核苷酸序列i包含seq id no:281所示的核苷酸序列，且所述核苷酸序列ii包含seq id no:282所示的核苷酸序列。

93、在一个实施方案中，所述核苷酸序列i和所述核苷酸序列ii基本上反向互补、实质上反向互补或完全反向互补；所述基本上反向互补是指两个核苷酸序列之间存在不多于3个的碱基错配；所述实质上反向互补是指两个核苷酸序列之间存在不多于1个的碱基错配；完全反向互补是指两个核苷酸序列之间没有错配。

94、在一个实施方案中，所述正义链还含有核苷酸序列iii，所述反义链还含有核苷酸序列iv，核苷酸序列iii和核苷酸序列iv的长度各自独立地为0-10个核苷酸，其中所述核苷酸序列iii连接在核苷酸序列i的5'末端，核苷酸序列iv连接在核苷酸序列ii的3'末端，所述核苷酸序列iii和所述核苷酸序列iv长度相等并且实质上反向互补或完全反向互补；所述实质上反向互补是指两个核苷酸序列之间存在不多于1个的碱基错配；完全反向互补是指两个核苷酸序列之间没有错配；和/或，所述核苷酸序列iii连接在核苷酸序列i的3'末端，核苷酸序列iv连接在核苷酸序列ii的5'末端，所述核苷酸序列iii和所述核苷酸序列iv长度相等并且实质上反向互补或完全反向互补；所述实质上反向互补是指两个核苷酸序列之间存在不多于1个的碱基错配；完全反向互补是指两个核苷酸序列之间没有错配。

95、在一个实施方案中，所述正义链还含有核苷酸序列v和/或所述反义链还含有核苷酸序列vi，核苷酸序列v和vi的长度为0至3个核苷酸，核苷酸序列v连接在所述正义链的3'末端构成正义链的3'突出端，和/或核苷酸序列vi连接在所述反义链的3'末端构成反义链的3'突出端。在一个优选的实施方式中，所述核苷酸序列v或vi的长度为2个核苷酸。在一个优选的实施方案中，所述核苷酸序列v或vi为连续的两个胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸或连续的两个尿嘧啶核糖核苷酸。在一个优选的实施方案中，所述核苷酸序列v或vi与靶mrna相应位置的核苷酸错配或互补。

96、在一个实施方案中，该双链区的长度是15-30个核苷酸对。在一个优选的实施方案中，双链区的长度是17-23个核苷酸对。在一个更优选的实施方案中，双链区的长度是19-21个核苷酸对。

97、在一个实施方案中，正义链或反义链具有15-30个核苷酸。在一个优选的实施方案中，正义链或反义链具有19-25个核苷酸。在一个更优选的实施方案中，正义链或反义链具有19-23个核苷酸。

98、在一个实施方案中，所述正义链或所述反义链中的至少一个核苷酸为修饰的核苷酸，和/或至少一个磷酸酯基为具有修饰基团的磷酸酯基；优选地，所述含有修饰基团的磷酸酯基为磷酸酯基中的磷酸二酯键中的至少一个氧原子被硫原子取代而形成的硫代磷酸酯基。

99、在一个实施方案中，所述sirna包括不包含3’突出端核苷酸的正义链。

100、在一个实施方案中，所述正义链的5’末端核苷酸连接5’磷酸基团或5’磷酸衍生基团，和/或所述反义链的5’末端核苷酸连接5’磷酸基团或5’磷酸衍生基团。

101、在一个实施方案中，所述修饰的核苷酸选自2’-氟代修饰的核苷酸，2’-烷氧基修饰的核苷酸，2’-取代的烷氧基修饰的核苷酸，2’-烷基修饰的核苷酸，2’-取代的烷基修饰的核苷酸，2’-脱氧核糖核苷酸，2’-氨基修饰的核苷酸，2’-取代的氨基修饰的核苷酸，核苷酸类似物或其中任意两种以上的组合。

102、在一个实施方案中，所述修饰的核苷酸选自2’-f修饰的核苷酸，2’-o-ch3修饰的核苷酸，2’-o-ch2-ch2-o-ch3修饰的核苷酸，2’-o-ch2-ch＝ch2修饰的核苷酸，2’-ch2-ch2-ch＝ch2修饰的核苷酸，2’-脱氧核糖核苷酸，核苷酸类似物或其中任意两种以上的组合。

103、在一个实施方案中，所述正义链和所述反义链中的每一个核苷酸独立地为2’-氟代修饰的核苷酸或非氟代修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的偶数位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、14和16位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、8、9、14和16位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、14和16位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第9、10和11位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第14位，其余位置为非氟代修饰的核苷酸。在一个实施方案中，每一个非氟代修饰的核苷酸均为2’-甲氧基修饰的核苷酸，所述2’-甲氧基修饰的核苷酸指核糖基的2'-羟基被甲氧基取代而形成的核苷酸。

104、在一个实施方案中，每一个非氟代修饰的核苷酸独立地选自核苷酸的核糖基2'位的羟基被非氟基团取代形成的核苷酸或核苷酸类似物中的一种，核苷酸类似物选自异核苷酸、lna、ena、cet bna、una和gna中的一种。

105、在一个实施方案中，所述正义链和所述反义链中的每一个核苷酸独立地为2’-氟代修饰的核苷酸，2’-甲氧基修饰的核苷酸，2’-脱氧核糖核苷酸，gna修饰的核苷酸或其中任意两种以上的组合。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的偶数位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、14和16位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、8、9、14和16位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、14和16位，gna修饰的核苷酸位于反义链的第6位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、14和16位，gna修饰的核苷酸位于反义链的第7位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第14位，脱氧核糖核苷酸位于反义链的第2、5、7、12位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸。

106、在一些实施方案中，所述sirna中以下核苷酸之间的连接中至少一个为硫代磷酸酯基连接：

107、所述正义链的5’末端起始的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间的连接；

108、所述正义链的5’末端起始的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间的连接；

109、所述正义链的3’末端起始的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间的连接；

110、所述正义链的3’末端起始的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间的连接；

111、所述反义链的5’末端起始的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间的连接；

112、所述反义链的5’末端起始的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间的连接；

113、所述反义链的3’末端起始的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间的连接；

114、所述反义链的3’末端起始的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间的连接。

115、在一些实施方案中，所述sirna沿5’末端向3’末端方向，所述正义链包含位于如下所示位置处的硫代磷酸酯基：

116、所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

117、所述正义链5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

118、所述正义链3’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

119、所述正义链3’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

120、或者，

121、所述正义链包含位于如下所示位置处的硫代磷酸酯基：

122、所述正义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

123、所述正义链5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间。

124、在一些实施方案中，所述sirna沿5’末端向3’末端方向，反义链包含位于如下所示位置处的硫代磷酸酯基：

125、所述反义链5’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

126、所述反义链5’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间；

127、所述反义链3’末端起始的第1个核苷酸与第2个核苷酸之间；

128、所述反义链3’末端起始的第2个核苷酸与第3个核苷酸之间。

129、在一个实施方案中，所述正义链和所述反义链中的每一个核苷酸独立地为2’-氟代修饰的核苷酸，2’-甲氧基修饰的核苷酸，2’-脱氧核糖核苷酸，gna修饰的核苷酸或其中任意两种以上的组合。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的偶数位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接，3’末端除去突出端；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的偶数位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接，3’末端除去突出端；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、14和16位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、14和16位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、8、9、14和16位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、6、14和16位，gna修饰的核苷酸位于反义链的第7位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第7、9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第2、14和16位，gna修饰的核苷酸位于反义链的第6位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。在一个优选的实施方案中，按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于正义链的第9、10和11位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接；按照5’到3’的方向，2’-氟代修饰的核苷酸位于反义链的第14位，脱氧核糖核苷酸位于反义链的第2、5、7、12位，其余位置为2’-甲氧基修饰的核苷酸，5’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，5’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间，3’末端的第1个核苷酸和第2个核苷酸之间，3’末端的第2个核苷酸和第3个核苷酸之间为硫代磷酸酯基连接。

130、在一个具体实施方案中，本发明提供了选自表1的sirna；优选地，所述sirna选自n-er-fy0140024、n-er-fy0140024m1、n-er-fy0140024md2、n-er-fy0140028、n-er-fy0140028m1、n-er-fy0140028md2、n-er-fy0140040、n-er-fy0140040m1、n-er-fy0140040md2、n-er-fy0140045、n-er-fy0140045m1、n-er-fy0140045md2、n-er-fy0140032、n-er-fy014082、n-er-fy0140024d2、n-er-fy0140024m2、n-er-fy0140024m2d2、n-er-fy0140024m3、n-er-fy0140024m4、n-er-fy0140024m5、n-er-fy0140024m6、n-er-fy0140028d2、n-er-fy0140028m2、n-er-fy0140028m2d2、n-er-fy0140028m3、n-er-fy0140028m4、n-er-fy0140028m5、n-er-fy0140040d2、n-er-fy0140040m2、n-er-fy0140040m2d2、n-er-fy0140040m3、n-er-fy0140040m4、n-er-fy0140040m5、n-er-fy0140045d2、n-er-fy0140045m2、n-er-fy0140045m2d2、n-er-fy0140045m3、n-er-fy0140045m4、n-er-fy0140045m5、n-er-fy0140045m6、n-er-fy0140032m2、n-er-fy0140032m3、n-er-fy0140032m4、n-er-fy0140032m5、n-er-fy014082m2、n-er-fy014082m3、n-er-fy014082m4、n-er-fy014082m5、n-er-fy014082m2d2。

131、本发明还提供了一种sirna缀合物，所述sirna缀合物含有本发明的sirna以及缀合至该sirna的缀合基团(如下式所示，双螺旋结构表示所述sirna，并且所述缀合基团连接至所述sirna的正义链3'末端)：

132、

133、上述缀合物结构中x可选择为o或s，在一个实施方案中，x为o。

134、在一个实施方案中，所述缀合基团包含药学上可接受的靶向基团和接头，并且所述sirna、所述接头和所述靶向基团依次共价或非共价连接；

135、优选地，在所述sirna缀合物中，sirna的正义链与反义链互补形成所述sirna缀合物的双链区，且所述正义链的3’末端形成平末端，所述反义链的3’末端具有1-3个延伸出所述双链区的突出的核苷酸；

136、或者，

137、在所述sirna缀合物中，sirna的正义链与反义链互补形成所述sirna缀合物的双链区，且所述正义链的3’末端形成平末端，所述反义链的3’末端形成平末端。

138、在一个实施方案中，所述缀合基团为下式的l96：

139、

140、在一个具体实施方案中，所述sirna缀合物为选自表2的sirna缀合物。

141、本发明还提供了一种药物组合物，其包含本发明的sirna，或本发明的sirna缀合物，以及药学上可接受的载体。

142、本发明还提供了试剂盒，其包含本发明的sirna，或本发明的sirna缀合物，或本发明的药物组合物。

143、本发明还提供了本发明的sirna，或本发明的sirna缀合物，或本发明的药物组合物用于制备抑制agt基因表达的药剂的用途。

144、本发明还提供了本发明的sirna，或本发明的sirna缀合物，或本发明的药物组合物用于制备预防和/或治疗agt基因过表达相关的疾病的药剂的用途。

145、在一个实施方案中，所述疾病为高血压病、高血压、临界性高血压、原发性高血压、继发性高血压、孤立性收缩期或舒张期高血压、妊娠相关高血压、糖尿病性高血压、顽固性高血压、难治性高血压、阵发性高血压、肾血管性高血压、射血分数降低的高血压、戈德布拉特氏高血压、低血浆肾素活性或血浆肾素浓度相关的高血压、眼高血压、青光眼、肺动脉高血压、门静脉高血压、系统性静脉高血压、收缩期高血压、不稳定性高血压；高血压性心脏病、高血压性肾病、动脉粥样硬化、动脉硬化、血管病变、糖尿病性肾病、子痫前期、糖尿病性视网膜病、慢性心力衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、肾小球硬化症、主动脉缩窄、主动脉瘤、心室纤维化、心力衰竭、心肌梗塞、心绞痛、中风、肾疾病、肾衰竭、系统性硬化症、宫内发育迟缓(iugr)、胎儿生长受限、肥胖、肝脂肪变性/脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、非酒精性脂肪肝病(nafld)；葡萄糖耐受不良、2型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病)和代谢综合征。

146、本发明还提供了抑制agt基因表达的方法，包括将治疗有效量的本发明的sirna，或本发明的sirna缀合物，或本发明的药物组合物与表达agt的细胞接触或给予有需要的受试者。

147、本发明还提供了治疗和/或预防agt基因过表达相关的疾病的方法，包括将治疗有效量的本发明的sirna，或本发明的sirna缀合物，或本发明的药物组合物给予有需要的受试者。

148、有益效果

149、本技术提供的sirna、药物组合物和sirna缀合物在体外细胞实验中显示出优异的agt基因表达抑制活性，具有良好的治疗agt基因过表达相关的疾病的潜力。例如，本技术公开的sirna及其缀合物能够降低肝脏中agt mrna的表达，毒副作用低，血浆稳定性好，具有良好的临床应用前景。

150、本技术提供的sirna在人肝癌细胞huh7中显示出对agt基因良好的抑制效果。在一些具体实施方式中，本技术提供的sirna在0.1nm的浓度下抑制率高达92.63％，在0.01nm的浓度下抑制率高达75.28％。

151、在一些具体实施方式中，本技术提供的sirna在huh7细胞中有较高的agt基因抑制活性，例如，ic50低至15.17pm。

152、在一些具体实施方式中，本技术提供的sirna缀合物在phh细胞中具有较高的agt基因抑制活性，例如，在sirna缀合物通过自由摄取进入phh的情况下，ic50可低至0.559nm；在sirna缀合物通过转染进入phh的情况下，ic50可低至0.004nm。