一种抗FcRn抗体及其制剂与应用的制作方法

本发明属于生物医药，具体涉及一种抗fcrn抗体及其制剂与应用。

背景技术：

1、新生儿fc受体(fcrn)是一种与主要组织相容性复合体(mhc)i类相关的受体。fcrn在调节igg抗体在体内的动态行为，包括分布、运输和持久性等方面发挥着重要的作用。fcrn不仅结合igg的fc区域，还结合血清白蛋白(hsa)。与igg的结合一样，fcrn与hsa的结合也是ph依赖性的，在酸性ph环境(通常小于ph6，最佳为ph5)有结合作用，但在中性ph值下不结合。fcrn与血清白蛋白的结合也能保护hsa不被降解，从而延长血清白蛋白的半衰期。

2、fcrn在调控igg水平中的重要作用，使得fcrn抑制剂成为降低诸如自身免疫性疾病或炎症性疾病中引起症状的抗体水平的靶点。fcrn缺陷小鼠对由病原性igg自体抗体引起的自身免疫性疾病更具抗性，因为它们不能维持高浓度的病原性igg(christianson等，1996，j.immunol.156:4932-4939；

3、ghetie等，1996，eur.j.immunol.26:690-696；israel等，1996，immunol.89:573-578)。在非人灵长类动物中，基于fcrn的抑制剂的研究和临床试验结果表明，它们在健康志愿者中诱导内源性igg水平的持续性显著下降，并对自身免疫性疾病肌萎缩症有积极的影响(nixon,a.e.et al.(2015)fully human monoclonal antibody inhibitors of theneonatal fc receptor reduce circulating igg in non-humanprimates.front.immunol.6,176；kiessling,p.et al.(2017)the fcrn inhibitorrozanolixizumab reduces human serum igg concentration:a randomized phase1study.sci.transl.med.9,eaan1208)。因此，特异性阻断fcrn与igg的相互作用可促进病原性igg抗体的降解，从而可用于治疗igg介导的自身免疫性疾病以及炎症疾病等。

4、本发明提供了一种分离的抗fcrn抗体及其具有优异稳定性的抗fcrn抗体制剂，用于治疗igg介导的自身免疫性疾病以及炎症疾病等。

技术实现思路

1、本发明提供一种分离的抗fcrn抗体，所述抗体包含vh，所述vh包含：hc-cdr1，其包含氨基酸序列seq id no:1，hc-cdr2，其包含氨基酸序列seq id no:2，和hc-cdr3，其包含氨基酸序列seq id no:3；以及vl，所述vl包含：lc-cdr1，其包含氨基酸序列seq id no:9，lc-cdr2，其包含氨基酸序列seq id no:10，和lc-cdr3，其包含氨基酸序列seq id no:11；或

2、所述抗体包含vh，所述vh包含：hc-cdr1，其包含氨基酸序列seq id no:4，hc-cdr2，其包含氨基酸序列seq id no:5，和hc-cdr3，其包含氨基酸序列seq id no:6；以及vl，所述vl包含：lc-cdr1，其包含氨基酸序列seq id no:12，lc-cdr2，其包含氨基酸序列seq idno:10，和lc-cdr3，其包含氨基酸序列seq id no:13；或

3、所述抗体包含vh，所述vh包含：hc-cdr1，其包含氨基酸序列seq id no:4，hc-cdr2，其包含氨基酸序列seq id no:7，和hc-cdr3，其包含氨基酸序列seq id no:8；以及vl，所述vl包含：lc-cdr1，其包含氨基酸序列seq id no:12，lc-cdr2，其包含氨基酸序列seq idno:10，和lc-cdr3，其包含氨基酸序列seq id no:13。

4、在本发明的一些实施方式中，所述抗体包含vh，其包含氨基酸序列seq id no:14，以及vl，其包含氨基酸序列seq id no:15；或

5、所述抗体包含vh，其包含氨基酸序列seq id no:16，以及vl，其包含氨基酸序列seqid no:15；或

6、所述抗体包含vh，其包含氨基酸序列seq id no:17，以及vl，其包含氨基酸序列seqid no:18；或

7、所述抗体包含vh，其包含氨基酸序列seq id no:19，以及vl，其包含氨基酸序列seqid no:18。

8、在本发明的一些实施方式中，所述抗体进一步包含重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区包含氨基酸序列seq id no:20或21，所述轻链恒定区包含氨基酸序列seq idno:12。

9、在本发明的一些实施方式中，所述抗体包含vh、vl、重链恒定区和轻链恒定区，所述vh包含氨基酸序列seq id no:14，所述vl包含氨基酸序列seq id no:15，所述重链恒定区包含氨基酸序列seq id no:20或21，所述轻链恒定区包含氨基酸序列seq id no:22；或

10、所述抗体包含vh、vl、重链恒定区和轻链恒定区，所述vh包含氨基酸序列seq idno:16，所述vl包含氨基酸序列seq id no:15，所述重链恒定区包含氨基酸序列seq id no:20或21，所述轻链恒定区包含氨基酸序列seq id no:22；或

11、所述抗体包含vh、vl、重链恒定区和轻链恒定区，所述vh包含氨基酸序列seq idno:17，所述vl包含氨基酸序列seq id no:18，所述重链恒定区包含氨基酸序列seq id no:20或21，所述轻链恒定区包含氨基酸序列seq id no:22；或

12、所述抗体包含vh、vl、重链恒定区和轻链恒定区，所述vh包含氨基酸序列seq idno:19，所述vl包含氨基酸序列seq id no:18，所述重链恒定区包含氨基酸序列seq id no:20或21，所述轻链恒定区包含氨基酸序列seq id no:22。

13、另一方面，本发明还提供一种抗fcrn抗体制剂，所述抗体制剂包含上述任一分离的抗fcrn抗体。

14、在本发明的一些实施方式中，所述抗体浓度为1mg/ml-300mg/ml；优选地，所述抗体浓度为10mg/ml-200mg/ml；进一步优选为100mg/ml-200mg/ml；更优选为135mg/ml-165mg/ml；在本发明的具体实施例中，所述抗体浓度为1mg/ml、10mg/ml、30mg/ml、50mg/ml、80mg/ml、100mg/ml、120mg/ml、135mg/ml、140mg/ml、145mg/ml、150mg/ml、155mg/ml、160mg/ml、165mg/ml、180mg/ml、190mg/ml、200mg/ml、230mg/ml、250mg/ml、280mg/ml或300mg/ml。

15、在本发明的一些实施方式中，所述抗体制剂还包括表面活性剂，所述表面活性剂为聚山梨酯和/或泊洛沙姆；优选地，所述聚山梨酯为聚山梨酯20和/或聚山梨酯80；优选地，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆188。

16、在本发明的一些实施方式中，所述表面活性剂的浓度为0.05mg/ml-2.0mg/ml，更优选为0.45mg/ml-1.95mg/ml；在本发明的具体实施例中，所述表面活性剂的浓度为0.05mg/ml、0.06mg/ml、0.08mg/ml、0.10mg/ml、0.12mg/ml、0.15mg/ml、0.20mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml、1.2mg/ml、1.5mg/ml或2.0mg/ml。

17、在本发明的一些实施方式中，所述表面活性剂为聚山梨酯和泊洛沙姆；优选地，所述聚山梨酯的浓度为0.05mg/ml-0.45mg/ml，优选为0.3mg/ml；在本发明的具体实施例中，所述聚山梨醇的浓度为0.05mg/ml、0.06mg/ml、0.08mg/ml、0.10mg/ml、0.12mg/ml、0.15mg/ml、0.2mg/ml、0.25mg/ml、0.3mg/ml、0.35mg/ml、0.4mg/ml或0.45mg/ml；所述泊洛沙姆的浓度为0.4mg/ml-1.5mg/ml，优选为1.0mg/ml；在本发明的具体实施例中，所述泊洛沙姆的浓度为0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml、1.2mg/ml或1.5mg/ml。

18、在本发明的一些实施方式中，所述抗体制剂进一步包括稳定剂，优选地，所述稳定剂为蔗糖、海藻糖、麦芽糖、山梨醇、甘露醇、氯化钠、精氨酸、甘氨酸、脯氨酸、赖氨酸中的任一种或几种；更优选地，所述稳定剂为蔗糖、海藻糖、氯化钠或精氨酸中的任一种或几种。

19、在本发明的一些实施方式中，所述稳定剂是：浓度为40mg/ml-80mg/ml，优选为50mg/ml-80mg/ml，进一步优选为50mg/ml-70mg/ml的蔗糖、海藻糖、麦芽糖、山梨醇和/或甘露醇，或浓度为100mm-180mm，优选为130mm-150mm的氯化钠、精氨酸、甘氨酸、脯氨酸或赖氨酸；在本发明的具体实施例中，所述稳定剂是浓度为40mg/ml、50mg/ml、60mg/ml、70mg/ml或80mg/ml的蔗糖、海藻糖、麦芽糖、山梨醇和/或甘露醇，或所述稳定剂为100mm、110mm、120mm、130mm、140mm、150mm、160mm、170mm、或180mm的氯化钠、精氨酸、甘氨酸、脯氨酸或赖氨酸。

20、在本发明的一些实施方式中，所述抗体制剂进一步包括缓冲液，优选地，所述缓冲液为柠檬酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液和/或组氨酸盐酸盐缓冲液。

21、在本发明的一些实施方式中，所述缓冲液的浓度为3mm-50mm；优选地，所述缓冲液的浓度为10mm-30mm；在本发明的具体实施例中，所述缓冲液的浓度为3mm、5mm、8mm、10mm、15mm、20mm、25mm或30mm。

22、在本发明的一些实施方式中，所述制剂的ph值为4.8-5.5，优选为5.0-5.4；在本发明的具体实施例中，所述制剂的ph值为4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4或5.5。

23、在本发明的一些实施方式中，所述抗体浓度为100mg/ml-200mg/ml；所述稳定剂为40mg/ml-80mg/ml的蔗糖和/或海藻糖，或所述稳定剂为100mm-180mm氯化钠或精氨酸；所述缓冲液为3mm-50mm的醋酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液和/或组氨酸盐酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为4.8-5.5；所述表面活性剂为0.05mg/ml-0.45mg/ml的聚山梨酯和0.4mg/ml-1.5mg/ml的泊洛沙姆。

24、在本发明的一些实施方式中，所述抗体浓度为135mg/ml-165mg/ml；所述稳定剂为50mg/ml-80mg/ml的蔗糖和/或海藻糖，或所述稳定剂为130mm-150mm氯化钠或精氨酸；所述缓冲液为10mm-30mm的醋酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液和/或组氨酸盐酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为4.8-5.5；所述表面活性剂为0.05mg/ml-0.45mg/ml的聚山梨酯和0.4mg/ml-1.5mg/ml的泊洛沙姆。

25、在本发明的一些实施方式中，所述抗体浓度为135mg/ml-165mg/ml；所述稳定剂为50mg/ml-70mg/ml的蔗糖和/或海藻糖，或所述稳定剂为130mm-150mm氯化钠或精氨酸；所述缓冲液为10mm-30mm的醋酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.0-5.4；所述表面活性剂为0.05mg/ml-0.45mg/ml的聚山梨酯和0.4mg/ml-1.5mg/ml的泊洛沙姆；

26、在本发明的一些实施方式中，所述抗体浓度为135mg/ml-165mg/ml；所述稳定剂为50mg/ml-70mg/ml的蔗糖；所述缓冲液为10mm-30mm的醋酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.0-5.4；所述表面活性剂为0.05mg/ml-0.45mg/ml的聚山梨酯和0.4mg/ml-1.5mg/ml的泊洛沙姆。

27、在本发明的一些实施方式中，所述制剂为下述抗体制剂中的任一种：

28、(1)所述抗体浓度为135mg/ml、140mg/ml、145mg/ml、150mg/ml、155mg/ml、160mg/ml或165mg/ml；所述稳定剂为50mg/ml-70mg/ml的蔗糖和/或海藻糖，或所述稳定剂为130mm-150mm氯化钠或精氨酸；所述缓冲液为10mm-30mm的醋酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液和/或组氨酸盐酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.0-5.4；所述表面活性剂为0.05mg/ml-0.45mg/ml的聚山梨酯和0.4mg/ml-1.5mg/ml的泊洛沙姆；

29、(2)所述抗体浓度为135mg/ml-165mg/ml；所述稳定剂为50mg/ml、60mg/ml或70mg/ml的蔗糖和/或海藻糖，或所述稳定剂为130mm、140mm或150mm氯化钠或精氨酸；所述缓冲液为10mm-30mm的醋酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液和/或组氨酸盐酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.0-5.4；所述表面活性剂为0.05mg/ml-0.45mg/ml的聚山梨酯和0.4mg/ml-1.5mg/ml的泊洛沙姆；

30、(3)所述抗体浓度为135mg/ml-165mg/ml；所述稳定剂为50mg/ml-70mg/ml的蔗糖或海藻糖，或所述稳定剂为130mm-150mm氯化钠或精氨酸；所述缓冲液为10mm、20mm或30mm的醋酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液和/或组氨酸盐酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.0-5.4；所述表面活性剂为0.05mg/ml-0.45mg/ml的聚山梨酯和0.4mg/ml-1.5mg/ml的泊洛沙姆；

31、(4)所述抗体浓度为135mg/ml-165mg/ml；所述稳定剂为50mg/ml-70mg/ml的蔗糖或海藻糖，或所述稳定剂为130mm-150mm氯化钠或精氨酸；所述缓冲液为10mm-30mm的醋酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液和/或组氨酸盐酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.0、5.1、5.2、5.3或5.4；所述表面活性剂为0.05mg/ml-0.45mg/ml的聚山梨酯和0.4mg/ml-1.5mg/ml的泊洛沙姆；

32、(5)所述抗体浓度为135mg/ml-165mg/ml；所述稳定剂为50mg/ml-70mg/ml的蔗糖或海藻糖，或所述稳定剂为130mm-150mm氯化钠或精氨酸；所述缓冲液为10mm-30mm的醋酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液和/或组氨酸盐酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.0-5.4；所述表面活性剂为0.05mg/ml、0.06mg/ml、0.08mg/ml、0.10mg/ml、0.12mg/ml、0.15mg/ml、0.20mg/ml、0.30mg/ml、0.40mg/ml或0.45mg/ml的聚山梨酯和0.4mg/ml-1.5mg/ml的泊洛沙姆；

33、(6)所述抗体浓度为135mg/ml-165mg/ml；所述稳定剂为50mg/ml-70mg/ml的蔗糖或海藻糖，或所述稳定剂为130mm-150mm氯化钠或精氨酸；所述缓冲液为10mm-30mm的醋酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液和/或组氨酸盐酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.0-5.4；所述表面活性剂为0.05mg/ml-0.45mg/ml的聚山梨酯和0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml、1.2mg/ml或1.5mg/ml的泊洛沙姆；

34、所述聚山梨酯为聚山梨酯80或聚山梨酯20。

35、在本发明的一些实施方式中，所述抗体制剂为下述制剂中的任一种：

36、(1)所述抗体浓度150mg/ml；所述稳定剂为130mm氯化钠；所述缓冲液为20mm的醋酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.4；所述表面活性剂为0.3mg/ml的聚山梨酯和1.0mg/ml的泊洛沙姆；

37、(2)所述抗体浓度为150mg/ml；所述稳定剂为60mg/ml的蔗糖；所述缓冲液为20mm的柠檬酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.0；所述表面活性剂为0.3mg/ml的聚山梨酯和1.0mg/ml的泊洛沙姆；

38、(3)所述抗体浓度为135mg/ml；所述稳定剂为50mg/ml的蔗糖；所述缓冲液为10mm的醋酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.4；所述表面活性剂为0.05mg/ml的聚山梨酯和1.5mg/ml的泊洛沙姆；

39、(4)所述抗体浓度为150mg/ml；所述稳定剂为60mg/ml的蔗糖；所述缓冲液为20mm的醋酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.2；所述表面活性剂为0.3mg/ml的聚山梨酯和1.0mg/ml的泊洛沙姆；

40、(5)所述抗体浓度为165mg/ml；所述稳定剂为70mg/ml的蔗糖；所述缓冲液为30mm的醋酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.0；所述表面活性剂为0.45mg/ml的聚山梨酯和0.4mg/ml的泊洛沙姆；

41、(6)所述抗体浓度为150mg/ml；所述稳定剂为80mg/ml的蔗糖；所述缓冲液为30mm的醋酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.4；所述表面活性剂为0.3mg/ml的聚山梨酯和1.0mg/ml的泊洛沙姆；

42、(7)所述抗体浓度为150mg/ml；所述稳定剂为150mm的精氨酸；所述缓冲液为20mm的醋酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.2；所述表面活性剂为0.3mg/ml的聚山梨酯和1.0mg/ml的泊洛沙姆；

43、(8)所述抗体浓度为160mg/ml；所述稳定剂为60mg/ml的蔗糖；所述缓冲液为20mm的柠檬酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.0；所述表面活性剂为0.3mg/ml的聚山梨酯和1.0mg/ml的泊洛沙姆；

44、(9)所述抗体浓度为150mg/ml；所述稳定剂为60mg/ml的蔗糖；所述缓冲液为20mm的柠檬酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为4.8；所述表面活性剂为0.3mg/ml的聚山梨酯和1.0mg/ml的泊洛沙姆；

45、(10)所述抗体浓度为150mg/ml；所述稳定剂为60mg/ml的蔗糖；所述缓冲液为20mm的组氨酸盐酸盐缓冲液；所述制剂的ph值为5.5；所述表面活性剂为0.3mg/ml的聚山梨酯和1.0mg/ml的泊洛沙姆；

46、所述聚山梨酯为聚山梨酯80或聚山梨酯20。

47、在本发明的一些实施方式中，所述抗体制剂进一步包含抗氧化剂和/或防腐剂。所述防腐剂或抗氧剂为抗体制剂中常用的防腐剂或抗氧剂。所述氧化剂和/或防腐剂的浓度为0-20mm，在一些具体实施方式中，抗氧剂的浓度为0、5mm、8mm、10mm、12mm、15mm、18mm或20mm。在一些实施方式中，所述防腐剂为乙二胺四乙酸(edta)、二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)或其组合；所述抗氧剂为蛋氨酸。

48、在本发明的一些实施方式中，所述抗体制剂为液体制剂或注射用粉针剂。

49、在另一方面，本发明还提供了上述抗体或抗体制剂制剂在制备治疗疾病的药物中的用途；优选地，所述疾病包括炎症性或自身免疫性疾病。

50、在本发明的一些实施方式中，所述疾病选自重症肌无力、寻常性天疱疮、视神经脊髓炎、guillain-barré综合征、狼疮、特发性血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、格雷夫斯病、自身免疫性心肌炎、膜性肾小球肾炎、糖尿病、i型或ii型糖尿病、多发性硬化症、雷诺氏综合征、自身免疫性甲状腺炎、胃炎、乳糜泻、白癜风、肝炎、原发性胆汁性肝硬化、炎症性肠病、脊椎关节病、实验性自身免疫性脑脊髓炎、免疫性嗜中性粒细胞减少症、青少年发病型糖尿病、与细胞因子、结核病中常见的t淋巴细胞介导的迟发型超敏反应相关的免疫反应、结节病和多肌炎、多动脉炎、皮肤血管炎、天疱疮、类天疱疮、肺出血肾炎综合征、川崎氏病、系统性硬化症、抗磷脂综合征和干燥综合征中的一种或几种。

51、在另一方面，本发明提供一种治疗所需个体疾病或病症的方法，包括向所述个体施用有效量的如上所述的任一种抗体制剂。所述施用方式包括：静脉注射、动脉内给药、腹腔注射、肺内给药、血管内给药、肌肉注射、气管内给药、皮下注射、眼内给药、鞘内给药、粘膜给药或经皮给药。在一些实施例中，制剂通过皮下给药。在一些实施例中，制剂通过肌肉给药。

52、本发明所述的“抗体”包括全长抗体及其抗原结合片段。全长抗体包括两条重链和两条轻链。轻链和重链的可变区负责抗原的结合。两条链中的可变区通常包括3个高变的环，被称为互补决定区(cdrs)(轻链(lc)cdrs包括lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，重链(hc)cdrs包括hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3)。本文所披露的抗体或抗原结合片段的cdr边界可以通过kabat，chothia或al-lazikani惯例来定义或识别(al-lazikani 1997；chothia 1985；chothia 1987；chothia 1989；kabat 1987；kabat1991)。重链或轻链的3个cdr区插入到被称为框架区(frs)的侧翼区段之间，所述框架区比cdr区具有更高的保守性，并形成支撑高变环的支架。重链和轻链的恒定区并不参与抗原结合，但展示出多种效应功能。抗体是基于它们重链恒定区的氨基酸序列进行分类的。本发明所述的全长抗体的五种主要类别或同种型是iga、igd、ige、igg和igm，其特征在于分别具有α、δ、ε、γ和μ型重链。进一步的，本发明中所述的几种主要的抗体类别可进一步被分为亚类，包括：igg1(γ1重链)、igg2(γ2重链)、igg3(γ3重链)、igg4(γ4重链)、iga1(α1重链)或iga2(α2重链)。

53、如本文所述，术语“抗原结合片段”包括抗体片段，例如，双链抗体、fab、fab’、f(ab’)2、fv片段、二硫键稳定的fv片段(dsfv)、(dsfv)2、双特异性dsfv(dsfv-dsfv’)、二硫键稳定的双链抗体(ds双链抗体)、单链抗体(scfv)、scfv二聚体(二价双链抗体)，由包含一个或多个cdrs的抗体片段组成的多特异性抗体、单域抗体、纳米抗体、域抗体、二价域抗体或者能够与抗原结合但不包含完整抗体结构的任何其他抗体片段。

54、本发明提供的抗体及抗体制剂具有以下优异效果：

55、(1)本发明提供的抗fcrn抗体能够有效的抑制人igg的循环，从而可用于治疗igg介导的自身免疫性疾病以及炎症疾病。

56、(2)本发明的抗fcrn抗体制剂采用双表面活性剂(聚山梨酯和泊洛沙姆)的组合，在冻融、振荡、加速和长期条件下稳定性强，可保证该制剂在制备、运输及存储过程中保持良好的稳定性，保证临床用药安全性及质量可控性。