用于肝癌预后评估的T细胞抗原受体标志物及其应用

本发明属于疾病预后和分子生物学，具体涉及用于肝癌预后评估的t细胞抗原受体标志物及其应用。

背景技术：

1、公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、肝癌是常见的消化系统恶性肿瘤，致病因素包括慢性病毒性肝炎、长期酒精摄入、微量元素缺乏、性激素调节异常、亚硝胺类物质与黄曲霉素的直接毒性作用等。其发病率逐年升高，临床上早期无明显特征性症状及体征，虽然血清甲胎蛋白是当前诊断肝癌常用而又重要的临床检测指标，但是仍有约30％的肝癌病人afp水平正常，所以肝癌的诊断和治疗仍值得深入研究。因此，建立肝癌相关的预后预测模型有利于指导临床治疗。

3、以往研究显示，肿瘤淋巴结转移分期和血管侵犯等传统临床病理指标有助于预测肝癌患者的预后；然而，由于肝癌巨大的异质性，这些传统指标的预测效果仍远不能令人满意。因此，临床上亟待需要找到一种新的生物标志物，提高临床诊断准确率。

4、t淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞。在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前t细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的t细胞。其在疾病的发生发展阶段发挥重要作用。而t细胞表面都具有唯一的t细胞抗原受体(t cell receptor,tcr)以特异性的识别抗原，执行免疫功能，使得tcr成为了辨别t细胞唯一性的可靠的生物标志物。t细胞抗原受体组库是特定时间内机体免疫循环中t淋巴细胞克隆的总和，可反映特定时间点机体对外界刺激的应答能力，其多样性与机体免疫力的强弱相关。通常，高多样性tcr组库代表免疫系统功能正常，对病毒及其他病原体感染有良好的调控作用。tcr组库会随着疾病的发生发展而改变，反映不同疾病情况下机体的免疫系统状态，其已成为免疫学研究领域的热点。二代测序技术的发展使得免疫组库高通量测序成为可能。然而发明人发现，目前基于免疫分子tcr标志物用于肝癌预后的研究仍然鲜有报道。

技术实现思路

1、针对上述现有技术的不足，发明人提供用于肝癌预后评估的t细胞抗原受体标志物及其应用。本发明以t淋巴细胞为研究对象，应用多重pcr技术扩增tcr互补决定区(complementarity determining region,cdr)，再结合高通量测序技术，从而全面评估免疫系统中免疫受体多样性，进而获得肝癌相关的特异性的免疫分子tcr标志物，从而成功用于肝癌的预后评估。

2、为实现上述技术目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明第一方面，提供一种用于肝癌的预后评估的tcr标志物，所述tcr标志物的氨基酸序列选自：

4、(a1)如seq id no.1-100中任意一项或多项所示的氨基酸序列；或，

5、(a2)如seq id no.1-100中任意一项或多项所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸的取代、缺失和/或添加而形成的氨基酸序列，所述氨基酸序列获得的蛋白质能够表达与(a)所述氨基酸序列获得蛋白质相同或相似功能。

6、所述tcr标志物其来源于受试者外周血，所述受试者为肝癌患者，所述tcr标志物可用于肝癌预后评估。所述英语肝癌的预后评估至少包括对肝癌患者总生存期(os)的评估。

7、本发明第二方面，提供检测上述tcr标志物的物质在制备肝癌预后评估产品中的应用。

8、本发明第三方面，提供一种用于肝癌预后评估的检测试剂，所述检测试剂用于检测上述tcr标志物。

9、本发明第四方面，提供一种用于肝癌预后评估的试剂盒，所述试剂盒包含上述所述检测试剂。

10、本发明第五方面，提供一种用于肝癌预后评估的系统，其包含：

11、i)分析模块，其被配置为获取受试者的样品中选自上述tcr标志物的表达水平；

12、ii)评估模块，其被配置为至少包含一个数据处理器，所述数据处理器嵌入用于将通过所述分析模块确定的量与参考进行比较的算法，并且能够生成包含基于所述比较建立的结果的输出文件。

13、本发明第六方面，提供上述tcr标志物作为靶点用于筛选防治肝癌药物的用途。

14、与现有技术方案相比，上述一个或多个技术方案具有如下有益效果：

15、上述技术方案通过分析肝癌预后生存不良的特异性tcr序列，预测肝癌预后生存不良的风险，具有更高的特异性和准确性，从而用于相关产品(包括引物、试剂、试剂盒、装置和设备等)的研发，同时也可将上述tcr标志物作为靶点用于筛选相关用于防治肝癌的药物。

技术特征：

1.一种用于肝癌预后评估的tcr标志物，其特征在于，所述tcr标志物的氨基酸序列选自：

2.如权利要求1所述tcr标志物，其特征在于，所述tcr标志物的氨基酸序列选自如seqid no.1-100中所示的所有氨基酸序列所组成的组。

3.如权利要求1所述tcr标志物，其特征在于，所述tcr标志物其来源于受试者外周血，所述受试者为肝癌患者，所述用于肝癌预后评估包括对受试者的总生存期进行评估。

4.检测权利要求1-3任一项所述tcr标志物的物质在制备肝癌预后评估产品中的应用。

5.如权利要求4所述应用，其特征在于，所述物质包括基于高通量测序方法和/或基于定量pcr方法和/或基于探针杂交方法检测权利要求1或2所述tcr标志物表达水平的物质；

6.一种用于肝癌预后评估的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂用于检测权利要求1-3任一项所述tcr标志物。

7.一种用于肝癌预后评估的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求5所述检测试剂。

8.一种用于肝癌预后评估的系统，其特征在于，其包含：

9.如权利要求8所述系统，其特征在于，在所述分析模块中，所述受试者为肝癌患者，所述样品为受试者的外周血。

10.如权利要求8所述的系统，其特征在于，所述预后评估至少包括对肝癌患者总生存期的评估。

技术总结
本发明属于疾病预后和分子生物学技术领域，具体涉及用于肝癌预后评估的T细胞抗原受体标志物及其应用。本发明以T淋巴细胞为研究对象，应用多重PCR技术扩增TCR互补决定区，再结合高通量测序技术，从而全面评估免疫系统中免疫受体多样性，进而获得肝癌相关的特异性的免疫分子TCR标志物，从而成功用于肝癌的预后评估，因此具有良好的实际应用之价值。

技术研发人员：邓莉,王凤燕,李坤,徐昌青,路迅,蒋润泽
受保护的技术使用者：山东第一医科大学第一附属医院（山东省千佛山医院）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15