1.一种构建表达胶原蛋白的酵母细胞的方法,其包括将重组表达载体导入酵母细胞中,其中重组表达载体包含编码胶原蛋白的多核苷酸,所述胶原蛋白包含以seq id no.1所示的序列的重复单元,重复单元的数目是2-32,重复单元是直接连接的;优选地,胶原蛋白是重组ⅲ型人源化胶原蛋白,优选164.88°三螺旋结构胶原蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法,其中胶原蛋白包含seq id no.2或3所示的氨基酸序列;优选地,多核苷酸包含seq id no.4或5所示的核苷酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其中重组表达载体是酵母系统表达载体,优选为ppiczαa、ppic9、ppic9k、phil-s1、或pyam75p载体。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中酵母是巴斯德毕赤酵母;优选是巴斯德毕赤酵母x33、gs115、smd1168、km71或km71h菌株。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法,其包括以下一个或多个步骤:
6.表达胶原蛋白的酵母细胞,其中所述胶原蛋白包含以seq id no.1所示的序列的重复单元,重复单元的数目是2-32,重复单元是直接连接的;酵母细胞是巴斯德毕赤酵母;优选是巴斯德毕赤酵母x33、gs115、smd1168、km71或km71h菌株;优选地,胶原蛋白包含seq idno.2或3所示的氨基酸序列;优选地,胶原蛋白是重组ⅲ型人源化胶原蛋白,优选164.88°三螺旋结构胶原蛋白。
7.根据权利要求6所述的酵母细胞,其包含酵母系统表达载体,优选为ppiczαa、ppic9、ppic9k、phil-s1、或pyam75p载体;表达载体包含多核苷酸,该多核苷酸包含seq id no.4或5所示的核苷酸序列。
8.根据权利要求6或7所述的酵母细胞用于制备胶原蛋白的用途,优选地,胶原蛋白包含以seq id no.1所示的序列的重复单元,重复单元的数目是2-32,重复单元是直接连接的;优选地,胶原蛋白包含seq id no.2或3所示的氨基酸序列;优选地,胶原蛋白是重组ⅲ型人源化胶原蛋白,优选164.88°三螺旋结构胶原蛋白。
9.通过发酵生产胶原蛋白的方法,其包括在合适的条件下培养根据权利要求6或7所述的酵母细胞,对酵母细胞添加甲醇以进行诱导表达,并且收获培养上清液以得到胶原蛋白;优选地,培养基为补充有无氨基酵母氮源和生物素的bmmy培养基。
10.根据权利要求9所述的方法,其包括: