用于鉴别诊断和/或筛查患者感染的念珠菌属真菌是否对唑类药物耐药的试剂盒、标志物及其应用

本发明涉及耐药检测领域，特别涉及用于鉴别诊断和/或筛查患者感染的念珠菌属真菌是否对唑类药物耐药的试剂盒、标志物及其应用。

背景技术：

1、近年来，随着免疫抑制患者、临床侵入性操作的增多，侵袭性念珠菌病的发病率不断升高。目前报道的念珠菌属内能造成人类感染的菌种包括：白念珠菌复合群、光滑念珠菌复合群、近平滑念珠菌复合群、热带念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、角膜念珠菌、解酯念珠菌等。近年来，念珠菌属菌株对唑类的耐药性不断升高，尤其是热带念珠菌耐药性升高趋势最为显著。根据我国侵袭性真菌监测网(chif-net)的最新数据显示，我国侵袭性感染热带念珠菌唑类耐药率已超过30％，且增长势头毫不见缓。更严峻的是，绝大多数菌为氟康唑、伏立康唑交叉耐药。

2、由于抗真菌药物品类有限，唑类药物是临床预防和治疗念珠菌感染最常用、价格最经济，且应用最广泛的抗真菌药物。目前用于抗真菌感染的唑类药物分为三代，咪唑类属第二代抗真菌药，三唑类属第三代抗真菌药。咪唑类包括克霉唑、咪康唑、益康唑和酮康唑；三唑类包括氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑和艾莎康唑。但目前第二代抗真菌药临床应用逐步减少，已被第三代抗真菌药所取代。

3、基于侵袭性念珠菌感染病死率高，并且我国菌株耐药性急剧增高的事实，临床需要对感染菌株进行唑类药物耐药性检测，从而指导临床用药。念珠菌对唑类耐药机制单一，预计基于分子的耐药性检测结果与表型检测将有很好的一致性，临床应用前景广泛。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供用于鉴别诊断和/或筛查患者所感染念珠菌属真菌是否对唑类药物耐药的试剂盒，所述试剂盒包括用于检测念珠菌属真菌erg11基因的串联重复的检测试剂，所述念珠菌属真菌优选是热带念珠菌。

2、在一种实施方式中，所述试剂盒还包括检测念珠菌属真菌erg11基因a395t突变的检测试剂。

3、在一种实施方式中，提供一种鉴别诊断和/或筛查唑类药物耐药的标志物，所述标志物为念珠菌属真菌串联重复的erg11基因。

4、在一种实施方式中，所述标志物为念珠菌属真菌含有基因a395t突变的erg11基因。

5、在一种实施方式中，一种念珠菌属真菌erg11基因的串联重复的检测试剂在制备用于预测患者是否对唑类药物耐药的试剂盒中的应用，所述念珠菌属真菌优选是热带念珠菌。

6、在一种实施方式中，念珠菌属真菌erg11基因的串联重复的检测试剂也包括同时检测erg11基因a395t突变的试剂。

7、在一种实施方式中，当所述唑类药物是氟康唑时，携带3-4个erg11基因拷贝的分离株，氟康唑最低抑菌浓度中位数为128mg/l。

8、在一种实施方式中，当所述唑类药物是氟康唑时，携带5-6个erg11基因拷贝的分离株，氟康唑唑最低抑菌浓度中位数为256mg/l。

9、在一种实施方式中，当所述唑类药物是氟康唑时，携带7-8个和≥9个erg11基因拷贝的分离株，氟康唑唑最低抑菌浓度中位数为512mg/l。

10、全球热带念珠菌全基因组系统发育分析发现，azr簇的出现和快速传播，它是过去几十年来中国唑类耐药性急剧增加的原因。azr簇分离株表现出极高水平的唑类耐药性表型。erg11基因的串联重复加上关键为位点突变a395t，成为在azr簇分离株中观察到的独特特征。这种特定的cnv机制与菌株erg11基因表达水平的升高和氟康唑mic的增加密切相关。

技术特征：

1.用于鉴别诊断和/或筛查患者感染的念珠菌属真菌是否对唑类药物耐药的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测念珠菌真菌erg11基因的串联重复的检测试剂，所述念珠菌属真菌优选是热带念珠菌。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括检测念珠菌属真菌erg11基因a395t突变的检测试剂。

3.一种鉴别诊断和/或筛查唑类药物耐药的标志物，其特征在于，所述标志物为念珠菌属真菌串联重复的erg11基因，所述念珠菌属真菌优选是热带念珠菌。

4.根据权利要求3所述的标志物，其特征在于，所述标志物为念珠菌属真菌含有基因a395t突变的erg11基因。

5.一种念珠菌属真菌erg11基因的串联重复的检测试剂在制备用于预测患者感染的念珠菌属真菌是否对唑类药物耐药的试剂盒中的应用，所述念珠菌属真菌优选是热带念珠菌。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，念珠菌属真菌erg11基因的串联重复的检测试剂也包括同时检测erg11基因a395t突变的试剂。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，当所述唑类药物是氟康唑时，携带3-4个erg11基因拷贝的分离株，氟康唑最低抑菌浓度中位数为128mg/l。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，当所述唑类药物是氟康唑时，携带5-6个erg11基因拷贝的分离株，氟康唑最低抑菌浓度中位数为256mg/l。

9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，当所述唑类药物是氟康唑时，携带7-8个和≥9个erg11基因拷贝的分离株，氟康唑最低抑菌浓度中位数为512mg/l。

技术总结
本发明提供用于鉴别诊断和/或筛查患者感染的念珠菌属真菌是否对唑类药物耐药的试剂盒、标志物及其应用，所述试剂盒所述试剂盒包括用于检测念珠菌真菌ERG11基因的串联重复的检测试剂。系统发育簇AZR分离株表现出极高水平的唑类耐药性表型，ERG11基因的串联重复加上关键位点突变A395T，成为在AZR簇分离株中观察到的独特特征。这种特定的拷贝数变异(CNV)机制与菌株ERG11基因表达水平的升高和唑类最小抑菌浓度(MIC)的升高密切相关。

技术研发人员：范欣,肖盟,戴榕辰,徐英春
受保护的技术使用者：首都医科大学附属北京朝阳医院
技术研发日：
技术公布日：2024/2/29