一种琥珀酰化KEAP1抗体的制备方法及应用与流程

本发明属于生物，具体涉及一种琥珀酰化keap1抗体的制备方法及应用。

背景技术：

1、2010年芝加哥大学在nature chemical biology杂志首次披露赖氨酸琥珀酰化(lysine succinylation)，该研究通过实验分析鉴定表明琥珀酰-赖氨酸肽段是一种自然发生的赖氨酸修饰，来自于体内蛋白，进化趋于保守，对不同生理环境能够做出应答。

2、翻译后修饰(post-translational modifications，ptms)是指对翻译后的蛋白质进行共价加工过程，在一个或多个氨基酸残基加上修饰基团，可以改变蛋白质的理化性质，进而影响蛋白质的空间构像、活性状态、亚细胞定位、折叠及其稳定性以及蛋白互作。而琥珀酰化(succinylation，ksucc)具有广泛调节细胞代谢的作用，正是由于此种特性研究表明此修饰可能影响其它下游细胞生物学功能。

3、新陈代谢和应激反应信号之间的相互作用对于维持细胞稳态至关重要。这种串扰通常是通过内源性反应性代谢物对蛋白质进行共价修饰来实现的，这些代谢物调节关键的应激反应性转录因子(如nrf2)。包括甲基乙二醛、甘油醛3-磷酸、富马酸和衣康酸在内的代谢物共价修饰nrf2阻遏物keap1的传感器半胱氨酸，从而稳定nrf2并激活其细胞保护转录程序。在这里，我们采用了基于shrna的筛选，针对中心碳代谢的酶，以确定桥接代谢与nrf2激活的其他调节节点。通过tca循环酶琥珀酰辅酶a合成酶的基因缺失或直接给药来增加琥珀酸酐，导致keap1赖氨酸131的n-琥珀酰化，从而激活nrf2信号传导。这项研究确定keap1不仅能够通过几个半胱氨酸残基，而且还可以通过一个保守的赖氨酸残基来感知反应性代谢物，这表明它有可能感知更多的反应性代谢信使。

4、美国lara ibrahim博士在2023年8月发现该位点的琥珀酰化修饰后，该发明制备出位点特异性的琥珀酰化keap1位点特异性抗体，为全球科学家进一步探索keap1的琥珀酰化修饰提供极大便利。

技术实现思路

1、因此基于以上背景，鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供第131位点赖氨酸琥珀酰化keap1抗体的制备方法，用于解决目前科学家无琥珀酰化keap1抗体使用的境况。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种用于制备酸琥珀酰化keap1抗体的多肽，所述多肽的氨基酸序列如seq idno.2所示；或如seq id no.2所示的多肽经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的衍生的多肽。

4、基于同一发明构思，本发明还提供了一种基因片段，所述基因片段能够编码所述的多肽。

5、基于同一发明构思，本发明还将上述的多肽应用于制备琥珀酰化keap1抗体。

6、基于同一发明构思，本发明还提供了一种上述的琥珀酰化keap1抗体的制备方法，所述方法为利用所述多肽免疫动物，使得动物产生酸琥珀酰化keap1抗体，然后通过收集动物血清，即可获得含有酸琥珀酰化keap1抗体的血清。

7、进一步地，所述动物为兔子。

8、进一步地，免疫动物的操作包括基础免疫和三次以上的加强免疫。

9、进一步地，所述多肽经过偶联klh以后用于免疫动物。

10、进一步地，所述方法还包括对动物血清进行提取纯化。

11、进一步地，所述提取纯化采用多肽欧联sulflink gel亲和纯化动物抗血清。

12、基于同一发明构思，上述的琥珀酰化keap1抗体可应用于免疫印迹实验。

13、相比现有技术，本发明的有益效果为：

14、如上所述，本发明的第131位点赖氨酸琥珀酰化keap1抗体的制备方法，解决了科学家目前研究keap1蛋白的琥珀酰化只能借助无位点特异性的pan-琥珀酰化抗体，我们发明的位点特异性keap1抗体只能识别keap1的131位点发生琥珀酰化的状态，不识别未修饰或者其他位点发生琥珀酰化修饰的情形，这对新陈代谢和应激反应信号之间的相互作用对于维持细胞稳态至关重要，为科学家攻克癌症提供了新思路。

技术特征：

1.一种用于制备酸琥珀酰化keap1抗体的多肽，其特征在于，

2.一种基因片段，其特征在于，所述基因片段能够编码如权利要求1所述的多肽。

3.权利要求1所述的多肽在制备琥珀酰化keap1抗体中的应用。

4.根据权利要求3的应用，其特征在于，所述多肽经过偶联以后用于制备酸琥珀酰化keap1抗体。

5.一种权利要求3所述的琥珀酰化keap1抗体的制备方法，其特征在于，

6.根据权利要求5所述的一种琥珀酰化keap1抗体的制备方法，其特征在于，所述动物为兔子。

7.根据权利要求5所述的一种琥珀酰化keap1抗体的制备方法，其特征在于，免疫动物的操作包括基础免疫和三次以上的加强免疫。

8.根据权利要求5所述的一种琥珀酰化keap1抗体的制备方法，其特征在于，所述多肽经过偶联klh以后用于免疫动物。

9.根据权利要求4所述的一种琥珀酰化keap1抗体的制备方法，其特征在于，所述方法还包括对动物血清进行提取纯化。

10.权利要求3至9任一项所述的琥珀酰化keap1抗体在免疫印迹实验中的应用。

技术总结
本发明公开一种琥珀酰化KEAP1抗体的制备方法及应用，本发明的第131位点赖氨酸琥珀酰化KEAP1抗体的制备方法，解决了科学家目前研究KEAP1蛋白的琥珀酰化只能借助无位点特异性的pan‑琥珀酰化抗体，我们发明的位点特异性KEAP1抗体只能识别KEAP1的131位点发生琥珀酰化的状态，不识别未修饰或者其他位点发生琥珀酰化修饰的情形，这对新陈代谢和应激反应信号之间的相互作用对于维持细胞稳态至关重要，为科学家攻克癌症提供了新思路。

技术研发人员：李建创,梁相丽
受保护的技术使用者：西安吉译生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/29