本发明属于分子生物学以及基因工程领域,尤其是涉及一种从缢蛏中分离的具有凝菌活性的基因。
背景技术:
1、缢蛏(sinonovacula constricta)属于软体动物门,双壳纲,广泛分布于西太平洋沿岸的潮间带和河口水域,是我国四大养殖贝类之一。缢蛏具有生长快、产量高、效益高等特点,被广泛用于水产养殖。然而,随着高密度集约化饲养规模的扩大,缢蛏种质资源不断退化并受到多种复杂污染物的威胁。在养殖过程中,缢蛏病害问题时有发生,尤其是细菌性病原引发的疾病极大地制约了缢蛏养殖业的发展。
2、目前对细菌性病害的防治方法主要是使用抗生素和化学药物,但是抗生素以及化学药物的长期使用会导致抗生素失效,同时对养殖环境也造成一定影响。因此,筛选特异性好、结合活性强的病原识别分子势在必行。
技术实现思路
1、本发明提供一种从缢蛏中分离的具有凝菌活性的基因,该基因编码的蛋白对脂多糖、肽聚糖和甘露聚糖等具有明显的结合作用,对革兰氏阴性菌灿烂弧菌、鳗弧菌、大肠杆菌、哈维氏弧菌和副溶血弧菌以及革兰氏阳性菌粪肠球菌等具有明显的凝集作用,可以作为海水养殖动物的免疫增强剂来使用。
2、本发明所提供的从缢蛏中分离的具有凝菌活性的基因,其包含有
3、1)核苷酸序列为seq id no:1的基因,
4、2)在1)的基因上取代、缺失、添加一个或数个核酸,由1)所衍生的基因;
5、3)与核苷酸序列为seq id no:1的基因具有不少于90%同源性,缢蛏来源的其它等位基因;
6、本发明还提供所述的基因编码的蛋白,其包含有:
7、1)氨基酸序列为seq id no:2的蛋白;
8、2)与氨基酸序列为seq id no:2的蛋白具有不少于90%同源性,缢蛏来源的其它等位基因蛋白;
9、本发明再一个方面还提供所述的基因编码的胞外结构域蛋白,所述的蛋白包含有:
10、1)氨基酸序列为seq id no:3的蛋白;
11、2))与氨基酸序列为seq id no:3的蛋白具有不少于90%同源性的蛋白;
12、用于编码上述胞外结构域蛋白的基因,其一种具体的核苷酸序列为seq id no:4。
13、本发明再一个方面还提供一种重组基因工程菌,所述的重组基因工程菌用于重组表达上述的胞外结构域蛋白。
14、本发明还提供所述的胞外结构域蛋白和/或重组基因工程菌在凝集细菌或制备用于凝集细菌的制品中的应用;
15、本发明还提供一种用于凝集细菌的制品,所述的制品中包含有胞外结构域蛋白和/或重组基因工程菌。
16、所述的细菌,为革兰氏阴性菌灿烂弧菌、鳗弧菌、大肠杆菌、哈维氏弧菌和副溶血弧菌以及革兰氏阳性菌粪肠球菌。
17、本发明从缢蛏中克隆得到了具有凝菌活性的类tlr2基因,同时对tlr2胞外结构域lrr蛋白进行重组质粒的构建和表达,获得了一株具有对脂多糖、肽聚糖以及甘露聚糖有结合活性,以及对灿烂弧菌、鳗弧菌、大肠杆菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌和粪肠球菌有凝集作用的tlr2-lrr的基因工程菌。本发明的基因蛋白对革兰氏阴性细菌有很强的凝集作用。将所构建的重组菌株投放于缢蛏养殖环境中,在缢蛏自身产生tlr2-lrr的基础上增加了tlr2-lrr对阴性致病菌和阳性致病菌的结合能力,从而提升缢蛏机体的免疫力,预防缢蛏疾病发生。
1.一种基因,其特征在于,所述的基因包含有:
2.一种蛋白,其特征在于,所述的蛋白是由权利要求1所述的基因编码的。
3.如权利要求2所述的蛋白,其特征在于,所述的蛋白包含有:
4.一种胞外结构域蛋白,其特征在于,所述的胞外结构域蛋白是由权利要求1所述的基因的片段编码的。
5.如权利要求4所述的胞外结构域蛋白,其特征在于,所述的胞外结构域蛋白包含有:
6.一种重组工程菌株,其特征在于,所述的重组工程菌株用于重组表达权利要求4所述的胞外结构域蛋白。
7.权利要求4所述的胞外结构域蛋白在结合脂多糖、肽聚糖或甘露聚糖中的应用。
8.权利要求4所述的胞外结构域蛋白在凝集细菌中的应用。
9.如权利要求7或8所述的应用,其特征在于,所述的胞外结构域蛋白是由权利要求6所述的重组工程菌株表达制备的。
10.一种用于提升缢蛏机体的免疫的制品,其特征在于,所述的制品中包含有权利要求4所述的胞外结构域蛋白和/或权利要求6所述的重组工程菌株。