一种表皮葡萄球菌及其应用的制作方法

本发明涉及生物工程，尤其是涉及一种表皮葡萄球菌及其应用。

背景技术：

1、在卷烟工业生产中，不同地区的烟叶有其独特的特点，卷烟厂根据需求向各地烟农购买烟叶，但由于收购的烟叶质量参差不齐，往往会出现难以进入卷烟配方的烟叶。为了处理这一类烟叶，烟草企业往往需要花费大量的经费，部分烟叶一方面有可能因库存年限过长而导致废弃，另一方面在仓库囤积占用人力物力，已经严重影响了企业的效益。

2、目前，这一类香气量少、香气质差、杂气大、刺激性大的烟叶统称为不适用或难适用烟叶。这类烟叶的产生主要是由于烟叶农业种植和卷烟工业生产存在的结构性矛盾所造成的，工业企业目前积压这类烟叶大量库存，如何有效利用这类不适用或难适用烟叶已经成为卷烟行业亟需解决的重大问题。

3、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种表皮葡萄球菌及其应用，该表皮葡萄球菌可作为发酵菌株在复烤烟叶发酵中发挥作用。

2、本发明提供一种表皮葡萄球菌(staphylococcus epidermidis)，其保藏编号为cgmcc no.27696。

3、本发明的表皮葡萄球菌(staphylococcus epidermidis)已于2023年06月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.27696，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

4、本发明的表皮葡萄球菌(staphylococcus epidermidis)为革兰氏阴性菌，菌株大小为0.6-0.8μm×1.5-2.0μm，呈细杆状，无鞭毛，在平板上为黄色圆斑状。

5、本发明还提供上述表皮葡萄球菌在复烤烟叶发酵中的应用。

6、本发明还提供一种复烤烟叶发酵方法，将上述表皮葡萄球菌的悬浮液均匀喷洒在复烤烟叶上，随后进行发酵。

7、表皮葡萄球菌的悬浮液的制备方法包括：对表皮葡萄球菌进行活化培养、种子培养和发酵培养，对发酵培养得到的发酵液进行离心，随后采用无菌水进行复溶，得到悬浮液。

8、具体地，活化培养包括：将表皮葡萄球菌接种于培养基中进行活化培养，得到表皮葡萄球菌活化液；其中，培养基的组成为：酵母粉4-6g/l，蛋白胨8-12g/l，氯化钠8-12g/l，ph值为5-7，活化条件为：25-35℃、100-150r/min条件下震荡培养12-18h。

9、种子培养包括：将表皮葡萄球菌活化液按体积比1-3％接种于培养基中进行种子培养，得到表皮葡萄球菌种子液；其中，培养基的组成为：酵母粉4-6g/l，蛋白胨8-12g/l，氯化钠8-12g/l，ph值为5-7，种子培养条件为：25-35℃、100-150r/min条件下震荡培养12-18h。

10、发酵培养包括：将表皮葡萄球菌种子液按接种量1-3％接种于培养基中进行发酵培养，得到表皮葡萄球菌发酵液；其中，培养基的组成为：酵母粉4-6g/l，蛋白胨8-12g/l，氯化钠8-12g/l，ph值为5-7，发酵培养条件为：25-35℃、100-150r/min条件下震荡培养至od600为0.8-1。

11、将表皮葡萄球菌发酵液在在2-6℃、8000-12000r/min条件下进行高速离心，随后用无菌水进行复溶，得到悬浮液；将悬浮液按0.20×107cfu/g至0.35×107cfu/g均匀喷洒在复烤烟叶上。

12、发酵时的温度为30-37℃，湿度为60-80％，发酵时间为16-30h。

13、将发酵好的烟叶打碎成粉末并过40目筛，过筛后的烟叶粉末进行蒸馏萃取，利用gc-ms检测烟叶粉末中的香气成分；结果表明：发酵烟叶中1-二十烯、2-乙酰基呋喃、西柏烯b、烟叶酮、二氢猕猴桃内酯、7-甲基十五烷、2,6,10-三甲基-十四烷、1,2-脱氢-α-香附酮、苯甲醛、beta-环柠檬醛、壬醛、雌酚酮b、3-糠醛的含量均有所提高。

14、2-乙酰基呋喃具有甜的、杏仁、坚果、烤香、烟熏香；西柏烯类化合物是烟草中一类重要的香味前体物质，其降解可产生茄酮、茄呢呋喃、降茄二酮等增加烟草香气；苯甲醛具有苦杏仁、樱桃及坚果香；柠檬醛具有典型的柠檬香气；糠醛具有木香、焦糖香。

15、本发明还提供一种发酵烟叶，按照上述复烤烟叶发酵方法制得。

16、本发明的表皮葡萄球菌(staphylococcus epidermidis)可以在16-30h内发酵复烤烟叶，明显改善其品质，发酵后的烟叶香气质增强，杂气降低，有清甜感，口感柔绵，润感提升，由此说明该表皮葡萄球菌可用于烟叶发酵；在烟叶的陈化期间，该表皮葡萄球菌可增加复烤后烟叶的香味物质，从而增加烟叶香味，提高了烟叶的香气质和香气量，降低了刺激性，增加了甜润感，显著改善了卷烟的口感。

技术特征：

1.一种表皮葡萄球菌(staphylococcus epidermidis)，其特征在于，其保藏编号为cgmcc no.27696。

2.权利要求1所述的表皮葡萄球菌在复烤烟叶发酵中的应用。

3.一种复烤烟叶发酵方法，其特征在于，将权利要求1所述的表皮葡萄球菌的悬浮液均匀喷洒在复烤烟叶上，随后进行发酵。

4.根据权利要求3所述的复烤烟叶发酵方法，其特征在于，将悬浮液按0.20×107cfu/g至0.35×107cfu/g均匀喷洒在复烤烟叶上。

5.根据权利要求3所述的复烤烟叶发酵方法，其特征在于，发酵时的温度为30-37℃，湿度为60-80％，发酵时间为16-30h。

6.根据权利要求3所述的复烤烟叶发酵方法，其特征在于，悬浮液的制备方法包括：对表皮葡萄球菌进行活化培养、种子培养和发酵培养，对发酵培养得到的发酵液进行离心，随后采用无菌水进行复溶，得到悬浮液。

7.根据权利要求6所述的复烤烟叶发酵方法，其特征在于，发酵培养至od600为0.8-1。

8.根据权利要求6所述的复烤烟叶发酵方法，其特征在于，活化培养、种子培养和发酵培养所采用的培养基组成为：酵母粉4-6g/l，蛋白胨8-12g/l，氯化钠8-12g/l，培养基的ph值为5-7。

9.根据权利要求6所述的复烤烟叶发酵方法，其特征在于，活化培养、种子培养和发酵培养的培养条件包括：培养温度为25-35℃，培养时的震荡速度为100-150r/min，活化培养和种子培养的培养时间为12-18h。

10.一种发酵烟叶，其特征在于，按照权利要求3-9任一所述的复烤烟叶发酵方法制得。

技术总结
本发明提供了一种表皮葡萄球菌及其应用。本发明的表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)的保藏编号为CGMCC NO.27696，该表皮葡萄球菌可作为发酵菌株在复烤烟叶发酵中发挥作用，发酵后的复烤烟叶中3‑糠醛、2‑乙酰基呋喃、苯甲醛、2,2‑二甲基戊酸乙烯酯、苯乙醛、芳樟醇、4‑氧代异佛尔酮、香叶基丙酮、二氢猕猴桃内酯、3‑羟基‑β‑大马酮、1,2‑脱氢‑α‑香附酮、法尼基丙酮等香味物质明显增加，提高了烟叶的香气质和香气量，降低了刺激性，增加了甜润感，显著改善了卷烟的口感。

技术研发人员：翟玉俊,王祯,刘晨,宋凯,张建栋,魏进彬,毛多斌,张兰馨
受保护的技术使用者：甘肃烟草工业有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/25