一种血凝块液化试剂及方法

本发明属于生物，尤其涉及一种血凝块液化试剂及方法。

背景技术：

1、血样中的dna或rna提取在基因工程和分子生物学研究中占有重要地位，通常用于pcr反应、基因分析等技术。但是，常规临床检验、流行病学调查、动物疫病抗体监测中通常是采集血清，而血凝块常常被废弃。如果需要提取核酸样本，则需另外采集抗凝血分离白细胞，不仅增加了研究成本，还降低了现场操作的可行性。此外，抗凝血保存太长时间，即使加了肝素、枸橼酸钠、edta等抗凝剂，也会形成血块，给提取dna和rna带来不便，结果导致珍贵的血液标本被废弃。然而血液虽然凝固了，但dna和rna并没有遭到破坏，如果能从这些血凝块中提取dna和rna，不仅免去了采集抗凝血的成本，而且还能增加血样的数量，大大提高效率。

2、传统的提取血凝块dna的方法源自于《分子克隆实验指南》从哺乳动物的细胞和组织中提取dna，该方法主要利用匀浆机，但此方法提取dna的纯度低，容易受到血浆蛋白的污染，实验操作时间长，dna的完整性容易被破坏。目前常用的血凝块dna的方法有：血凝块放入乳胶手套中进行挤压法、研钵研磨法、高速匀浆法、超声匀浆法、滤网过滤法，但是现有的方法要么效率太低、浪费太多的时间和工作量，要么效果不好使得血凝块中产量很低，不能保准血凝块液化完全。

3、可见，现有的血凝块基因组提取方式，提取时费时费力，样本间相互污染、危险样本持续和人的接触、血凝块液态化不完全、血凝块基因组产量低且不稳定。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于血凝块液化的试剂，能够使血凝块液态化完全、核酸片段维持了较好的完整性，血凝块dna和rna产量高、质量好，能够满足后续pcr扩增、基因测序的需求。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

3、一种用于血凝块液化的试剂，所述试剂包括红细胞裂解液、研磨珠、蛋白酶抑制剂和rna酶抑制剂。

4、优选的，所述研磨珠为合金钢研磨珠、石英砂研磨珠、陶瓷珠研磨珠、石榴石研磨珠中的任意一种。

5、优选的，所述红细胞裂解液为：nh4cl 0.802g、khco30.1g、na2edta 0.037g，将ph值调至7.2-7.4，加水定容至100ml。

6、本发明的另一目的在于提供一种用于血凝块液化的试剂盒，含有本发明所述的试剂，还含有离心管和一次性取样勺。

7、本发明的另一目的在于提供一种血凝块液化的方法，使用本发明所述的试剂或本发明所述的试剂盒，包括如下步骤：在血凝块中加入研磨珠、红细胞裂解液和蛋白酶抑制剂，静置后混匀，得到裂解混合液；将裂解混合液使用研磨仪进行研磨，离心收集上清液。

8、本发明的另一目的在于提供一种血凝块液化的方法，使用本发明所述的试剂或本发明所述的试剂盒，包括如下步骤：在血凝块中加入研磨珠、红细胞裂解液和rna酶抑制剂，静置后混匀，得到裂解混合液；将裂解混合液使用研磨仪进行研磨，离心收集上清液。

9、优选的，所述血凝块为1-2cm3，所述研磨珠添加3-5粒，所述红细胞裂解液添加450-550μl。

10、优选的，所述血凝块中加入研磨珠和红细胞裂解液后，于37℃静置13-18min，每隔3-6min进行一次混匀。

11、本发明的另一目的在于提供所述血凝块液化的方法在提取血凝块dna或rna中的应用。

12、相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：

13、本发明提供了用于血凝块液化的试剂，具有如下优点：

14、1.提高血凝块基因组dna和rna提取效率：传统的血凝块基因组提取方法存在一些技术挑战和限制，如样品处理复杂、提取效率低等。本发明通过研磨珠法，提供一种高效、可靠的血凝块基因组提取方法，使提取过程更加简化和高效。

15、2.提供高质量的血凝块基因组dna和rna提取产物：血凝块中的基因组是研究遗传疾病、个体基因变异等重要信息的关键来源。本发明通过优化试剂盒中的反应体系和提取过程，确保提取得到的血凝块基因组具有高纯度、高质量，并能够满足后续分析的要求。

16、3.简化操作流程：本发明设计了一种简单易行的试剂盒，使血凝块基因组dna和rna提取的操作过程更加简化和标准化，可以降低操作的复杂性和技术要求，提高实验的可重复性和稳定性。

17、4.提高样品处理的安全性和稳定性：血凝块样品携带有潜在的感染风险和病原体，因此对样品处理的安全性要求较高。本发明提供一种试剂盒，能够在保证提取效果的同时，确保样品处理的安全性和稳定性，减少潜在的污染和损失。

18、5.促进基因组学研究和临床应用：血凝块基因组提取是许多基因组学研究和临床应用的前提步骤。本发明为研究人员和临床医生提供一种可靠、高效的血凝块基因组提取工具，促进相关领域的研究进展和临床应用。

技术特征：

1.一种用于血凝块液化的试剂，其特征在于，所述试剂包括红细胞裂解液、研磨珠、蛋白酶抑制剂和rna酶抑制剂。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述研磨珠为合金钢研磨珠、石英砂研磨珠、陶瓷珠研磨珠、石榴石研磨珠中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述红细胞裂解液为：nh4cl 0.802g、khco30.1g、na2edta 0.037g，将ph值调至7.2-7.4，加水定容至100ml。

4.一种用于血凝块液化的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1-3任意一项所述的试剂，还含有离心管和一次性取样勺。

5.一种血凝块液化的方法，其特征在于，使用权利要求1-3任意一项所述的试剂或权利要求4所述的试剂盒，包括如下步骤：

6.一种血凝块液化的方法，其特征在于，使用权利要求1-3任意一项所述的试剂或权利要求4所述的试剂盒，包括如下步骤：

7.根据权利要求5或6所述的血凝块液化的方法，其特征在于，所述血凝块为1-2cm3，所述研磨珠添加3-5粒，所述红细胞裂解液添加450-550μl。

8.根据权利要求5或6所述的血凝块液化的方法，其特征在于，所述血凝块中加入研磨珠和红细胞裂解液后，于37℃静置13-18min，每隔3-6min进行一次混匀。

9.权利要求5所述血凝块液化的方法在提取血凝块dna中的应用。

10.权利要求6所述血凝块液化的方法在提取血凝块rna中的应用。

技术总结
本发明提供了一种血凝块液化的试剂，属于生物技术领域。本发明血凝块液化试剂包括红细胞裂解液、研磨珠、蛋白酶抑制剂和RNA酶抑制剂。使用本发明试剂液化血凝块，操作简便、省时、样本间不相互污染、减少危险样本暴露次数、血凝块液态化完全、核酸片段维持了较好的完整性，血凝块DNA和RNA产量高、质量好且稳定等优点能够满足后续PCR扩增、基因测序等科研或临床诊断分析。

技术研发人员：于龙政,贾芮,王楠,刘禹馨,杨孝龙,王奕博,金春梅
受保护的技术使用者：延边大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/1