一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞及其培养方法和应用与流程

本发明属于皮肤创面修复，具体涉及一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞及其培养方法和应用。

背景技术：

1、在医疗领域中，创面修复是一个关键的课题。烧伤、创伤、糖尿病、慢性溃疡等常导致皮肤的缺损。难治性、慢性创伤及组织缺损导致的疼痛、生理功能缺失、容貌的改变严重影响着病人的行动自由和生活质量，并进一步导致心理和社会问题。传统的创面修复方法包括缝合、皮瓣移植和皮肤移植等，但存在着一些局限性，如长时间愈合、不完全的再生和瘢痕形成等。因此，需要开发新的方法来促进创面修复的速度和质量。

2、adscs(adipose-derived mesenchymal stem cells，adscs)是一类具有自我更新和多向分化潜力的多能干细胞，存在于脂肪组织中。由于其丰富的来源、易获取和较高的增殖能力，adscs成为了组织工程和再生医学领域的研究热点。lipus(low-intensity pulsedultrasound，lipus)是一种非侵入性的物理刺激技术，已在骨科和软组织修复领域取得了广泛应用。研究表明，lipus能够促进骨折愈合、软组织修复和创面愈合等过程。lipus通过刺激细胞增殖、分化和基质合成等生物学过程，加速组织再生和修复。

3、但是，现有的以lipus刺激adscs增殖的方法存在刺激后adscs存活率低的问题，无法更好地激活adscs的生物学响应，进而影响其在创面修复过程中的功能性。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞及其培养方法和应用，所述培养方法可以更好地激活脂肪间充质干细胞的生物性能，使得到的脂肪间充质干细胞存活率和活性更高，创面修复效果更优。

2、本发明提供了一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞的培养方法，包括：

3、对脂肪间充质干细胞进行低强度脉冲超声处理，得到所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞；

4、所述低强度脉冲超声处理的频率为0.5～2mhz，占空比为10～50％，时间为1～20min，强度为0.1～00w/cm2。

5、优选的，所述脂肪间充质干细胞的制备方法包括如下步骤：

6、以含有抗生素和血清的生理盐水对脂肪组织进行浸泡后，对浸泡得到的脂肪组织进行清洗，得到脂肪组织颗粒；

7、以消化酶对所述脂肪组织颗粒进行组织消化，得到细胞混悬液；

8、对所述细胞混悬液进行离心，将得到的细胞沉淀进行洗涤，得到所述脂肪间充质干细胞。

9、优选的，所述抗生素包括青霉素-链霉素双抗，所述含有抗生素和血清的生理盐水中青霉素-链霉素双抗的质量浓度为1％，血清的质量浓度为1％。

10、优选的，所述消化酶包括胶原酶ⅰ型；所述胶原酶ⅰ型的酶活力≥125cdu/mg；所述胶原酶ⅰ型在组织消化体系中的终浓度为0.5～2mg/ml。

11、优选的，所述组织消化的条件包括：温度为30～40℃，震荡频率为50～200rpm，时间为0.5～1.5h。

12、本发明还提供了上述技术方案所述培养方法培养得到的用于创面修复的脂肪间充质干细胞，以细胞的od450nm计，所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞的细胞存活率为≥95％。

13、本发明还提供了上述技术方案所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞在制备皮肤创面修复的产品中的应用。

14、优选的，所述产品包括药物。

15、本发明还提供了一种用于皮肤创面修复的药物，所述药物的活性成分包括上述技术方案所述的用于创面修复的脂肪间充质干细胞。

16、优选的，所述药物的剂型包括注射剂、喷雾剂或搽剂。

17、有益效果：

18、本发明提供了一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞的培养方法，包括：对脂肪间充质干细胞进行低强度脉冲超声处理，得到所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞；所述低强度脉冲超声处理的频率为0.5～2mhz，占空比为10～50％，时间为1～20min，强度为0.1～100w/cm2。采用本发明所述低强度脉冲超声处理中的频率、强度、脉冲时间和刺激时间的参数对脂肪间充质干细胞进行处理可以最大限度地激活脂肪间充质干细胞的生物学响应，提高细胞的存活率、活性和增殖功能性，从而加速皮肤创面的细胞增殖、血管生成和基质合成等生物学过程，最终促进创面的愈合，减少瘢痕形成并改善功能恢复。

技术特征：

1.一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞的培养方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述脂肪间充质干细胞的制备方法包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述抗生素包括青霉素-链霉素双抗，所述含有抗生素和血清的生理盐水中青霉素-链霉素双抗的质量浓度为1％，血清的质量浓度为1％。

4.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述消化酶包括胶原酶ⅰ型；所述胶原酶ⅰ型的酶活力≥125cdu/mg；所述胶原酶ⅰ型在组织消化体系中的终浓度为0.5～2mg/ml。

5.根据权利要求2或4所述的培养方法，其特征在于，所述组织消化的条件包括：温度为30～40℃，震荡频率为50～200rpm，时间为0.5～1.5h。

6.权利要求1～5任一项所述培养方法培养得到的用于创面修复的脂肪间充质干细胞，其特征在于，以细胞的od450nm计，所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞的细胞存活率≥95％。

7.权利要求6所述用于创面修复的脂肪间充质干细胞在制备皮肤创面修复的产品中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述产品包括药物。

9.一种用于皮肤创面修复的药物，其特征在于，所述药物的活性成分包括权利要求6所述的用于创面修复的脂肪间充质干细胞。

10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型包括注射剂、喷雾剂或搽剂。

技术总结
本发明属于皮肤创面修复技术领域，具体涉及一种用于创面修复的脂肪间充质干细胞及其培养方法和应用。采用本发明所述低强度脉冲超声(LIPUS)处理中的频率、强度、脉冲时间和刺激时间的参数对脂肪间充质干细胞(ADSCs)进行处理可以最大限度地激活脂肪间充质干细胞的生物学响应，提高细胞的存活率、活性和功能性，从而加速皮肤创面的细胞增殖、血管生成和基质合成等生物学过程，最终促进创面的愈合，减少瘢痕形成并改善功能恢复。

技术研发人员：赵贤省,吴金燕,朱宁文
受保护的技术使用者：上海垠曦生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/8