一种提高大鼠体外受精效率的培养液组合及方法与流程

本发明属于生物保种，具体涉及一种提高大鼠体外受精效率的培养液组合及方法。

背景技术：

1、体外受精是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术，英文简称为ivf，由于它与胚胎移植技术(et)密不可分，又简称为ivf-et，在生物学中，把体外受精胚胎移植到母体后获得的动物称试管动物。

2、大鼠是基础生命科学研究中的一种重要的模式动物。体外受精技术能用于稀有的基因修饰大鼠的快速扩繁，尤其是在基因修饰会导致雄性动物生育能力下降的情况下。但是目前大鼠的体外受精技术成熟程度远远不及小鼠，缺少可用于基因修饰大鼠商品化生产的相关方法；且目前市面上缺少相关的大鼠体外受精试剂。因此，优化出一种提高大鼠体外受精效率的方法及配套的大鼠体外受精试剂，能够满足日益增长的科研需求，具有广泛的应用价值。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种提高大鼠体外受精效率的培养液组合及方法。

2、本发明所采取的技术方案是：

3、第一个方面，本发明提供一种提高大鼠体外受精效率的培养液组合，由精子获能培养液和精卵结合培养液组成，所述精子获能培养液组成为：基础培养基，甲基-β-环糊精0.5～1.2 mmol/l，聚乙烯醇0.8～1.5 g/l，抗生素适量；

4、所述精卵结合培养液组成为：基础培养基，还原性谷胱甘肽0.5～1.5 mmol/l，聚乙烯醇0.8～1.5 g/l，抗生素适量；

5、所述基础培养基的组分包括：钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、氯离子、磷酸二氢根离子、硫酸根离子、碳酸氢根离子、丙酮酸根离子、乳酸根离子、葡萄糖。

6、在一些实例中，所述精子获能培养液中，甲基-β-环糊精的浓度为0.7～0.9 mmol/l。

7、在一些实例中，所述精子获能培养液中，聚乙烯醇的浓度为1～1.2 g/l。

8、在一些实例中，所述精卵结合培养液中，还原性谷胱甘肽的浓度为0.8～1.0mmol/l。

9、在一些实例中，所述精卵结合培养液中，聚乙烯醇的浓度为1～1.2 g/l。

10、在一些实例中，所述基础培养基的组成为：氯化钠95～105 mmol/l，氯化钾4～5mmol/l，氯化钙5～6 mmol/l，磷酸二氢钾0.3～0.5 mmol/l，硫酸镁 0.2～0.3 mmol/l，碳酸氢钠24～25 mmol/l，丙酮酸钠 0.3～0.4 mmol/l，乳酸钠17.5～19.0 mmol/l，葡萄糖2～3.5 mmol/l。

11、在一些实例中，所述抗生素选自青霉素、链霉素中的至少一种。

12、在一些实例中，所述抗生素在所述精子获能培养液中的用量为青霉素 0.04～0.08 mg/ml，链霉素0.04～0.06 mg/ml。

13、第二个方面，本发明提供一种提高大鼠体外受精效率的方法，包括以下步骤：

14、1)从大鼠附睾尾中取出精子团放入精子获能培养液中获能50～60分钟；

15、2)卵丘团的处理：将卵丘团拨入精卵结合培养液中，预培养20～30 min；

16、3)取出精子获能培养液中的精子，加入到含有卵丘团的精卵结合培养液中进行受精培养；

17、4)受精完成后，将受精卵转移至新的精卵结合培养液中，清洗去除死卵、畸形卵。

18、在一些实例中，精子团与精子获能培养液的质量混合比为1：(80～100)，卵丘团与精卵结合培养液的质量混合比为1：(7～10)。

19、本发明的有益效果是：

20、发明人根据大鼠精子获能、精卵结合过程中的不同营养需要，分别提供精子获能培养液、精卵结合培养液，不仅受精率优于仅使用一种大鼠受精培养液单一组分的常规方法，更重要的是缩短了大鼠体外受精的时间，提高了实验效率，另外其稳定性适用于多种品系的基因修饰大鼠的商品化生产。

21、鉴于大鼠在基础生命科学研究中的重要作用，本发明提供的方法可突破多种品系的基因修饰大鼠商品化生产的瓶颈，尤其是在基因修饰导致雄性动物生育能力下降，通过自然繁殖方式无法获得大鼠资源的情况下，可通过本发明的技术，获得足够数量的大鼠胚胎，并经过胚胎移植的方式快速大量地建立spf级子代种群，为稀有的基因修饰大鼠资源提供高效的生产方式。

技术特征：

1.一种提高大鼠体外受精效率的培养液组合，由精子获能培养液和精卵结合培养液组成，其特征在于，

2.根据权利要求1所述的培养液组合，其特征在于，所述精子获能培养液中，甲基-β-环糊精的浓度为0.7～0.9 mmol/l。

3.根据权利要求1或2所述的培养液组合，其特征在于，所述精子获能培养液中，聚乙烯醇的浓度为1～1.2 g/l。

4.根据权利要求1所述的培养液组合，其特征在于，所述精卵结合培养液中，还原性谷胱甘肽的浓度为0.8～1.0 mmol/l。

5.根据权利要求1或4所述的培养液组合，其特征在于，所述精卵结合培养液中，聚乙烯醇的浓度为1～1.2 g/l。

6.根据权利要求1所述的培养液组合，其特征在于，所述基础培养基的组成为：氯化钠95～105 mmol/l，氯化钾4～5 mmol/l，氯化钙5～6 mmol/l，磷酸二氢钾0.3～0.5 mmol/l，硫酸镁 0.2～0.3 mmol/l，碳酸氢钠24～25 mmol/l，丙酮酸钠 0.3～0.4 mmol/l，乳酸钠17.5～19.0 mmol/l，葡萄糖2～3.5 mmol/l。

7.根据权利要求1所述的培养液组合，其特征在于，所述抗生素选自青霉素、链霉素中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的培养液组合，其特征在于，所述抗生素在所述精子获能培养液中的用量为青霉素 0.04～0.08 mg/ml，链霉素0.04～0.06 mg/ml。

9.一种提高大鼠体外受精效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，精子团与精子获能培养液的质量混合比为1：(80～100)，卵丘团与精卵结合培养液的质量混合比为1：(7～10)。

技术总结
本发明公开了一种提高大鼠体外受精效率的培养液组合，由精子获能培养液和精卵结合培养液组成，所述精子获能培养液组成为：基础培养基，甲基‑β‑环糊精0.5～1.2 mmol/L，聚乙烯醇0.8～1.5 g/L，抗生素适量；所述精卵结合培养液组成为：基础培养基，还原性谷胱甘肽0.5～1.5 mmol/L，聚乙烯醇0.8～1.5 g/L，抗生素适量；所述基础培养基的组分包括：钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、氯离子、磷酸二氢根离子、硫酸根离子、碳酸氢根离子、丙酮酸根离子、乳酸根离子、葡萄糖。通过本发明的技术，可以获得足够数量的大鼠胚胎，并经过胚胎移植的方式快速大量地建立SPF级子代种群，为稀有的基因修饰大鼠资源提供高效的生产方式。

技术研发人员：林祁远,黎肖容,苏翠
受保护的技术使用者：广州赛业百沐生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15