抗HSP70蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用与流程

本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗hsp70蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术：

1、热休克蛋白(heat shock proteins，hsp)广泛存在于生物体中，具有高度保守性，当细胞受到高温、缺氧、感染、炎症因子等不利因素刺激后可诱导hsp的产生，因此，hsp又称为应激蛋白，其在应激状态下通过促进蛋白质折叠并维持各种类型蛋白质的自然结构和功能来协助维持细胞内稳态。根据hsp相对分子质量大小，哺乳动物hsp包含hsp27、hsp40、hsp60、hsp70、hsp90、hsp110和葡萄糖调节蛋白170(glucose regulated protein 170，grp170)7个家族成员。hsp70在细胞内含量最高，是hsp家族中最重要的一族，其在指导蛋白质正确折叠、维持蛋白质稳态和促进细胞在各种应激条件下存活等方面发挥着重要作用(fernández-fernández mr1和valpuesta jm1，2018)。研究发现，hsp70在肝癌等种恶性肿瘤中呈高表达；而在肝细胞癌(hcc)患者中，hsp70过度表达与致癌性的提高以及存活率的降低相关，对肝细胞癌的诊断和治疗功效等方面具有重要意义。

2、研究表明hsp70在肝癌前病变及增生结节中不表达或极弱表达，而在肝癌组织中表达明显升高，并且其表达水平与癌组织恶性程度相关，随着病情进展，癌灶增大，hsp70表达水平逐渐增高，相应地由肿瘤细胞主动分泌并释放到血液循环中的hsp70含量也增加，故认为组织中或血清中hsp70的检测是肝细胞癌患者早期诊断及鉴别诊断的敏感性指标。胡沛臻(2001)运用免疫组化技术检测了原发性肝癌组织中hsp70表达情况，发现肝癌组织中hsp70表达水平明显增高。鉴于肝癌组织高水平表达hsp70，美国肝病年会(aasld)肝细胞癌诊疗指南建议(王莉琳等，2011)，对于不确定为肝癌组织的组织标本，可以选用hsp70等生物标志物进行免疫组化检测，从而增强诊断的准确性。

技术实现思路

1、发明人提供了一种抗hsp70蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为seq id no.1所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为seq id no.2所示的氨基酸序列。(cdr区为划线部分)seq id no.1：

2、evqlqesgpelvkpgasmkisclasgysftgylkfwvkqshgknlewigllnpwncdtlymqtakgkatltldkssstaymeflsltsedsavyycardsydyenwafywgqgtlvtvsa

3、seq id no.2：

4、qavvtqesalttspgetvtltctsatvaiftlynclwvqekpdhlftgligmytnaprgvparfsgsligdkaaltitgaqtedeaiyfcsynwvalwhffgggtkleik

5、进一步的，所述单克隆抗体特异性识别hsp70蛋白。

6、进一步的，所述单克隆抗体为兔单克隆抗体。

7、进一步的，所述兔单克隆抗体的克隆号为27b15。

8、发明人还提供了一种抗hsp70蛋白单克隆抗体的制备方法，用于免疫兔的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达。

9、进一步的，所述重组蛋白包含gst蛋白标签、hsp70蛋白片段及his蛋白标签。

10、进一步的，所述hsp70蛋白片段为116-274位点的片段，其为seq id no.3所示的氨基酸序列。

11、seq id no.3：

12、peeissmvltkmkeiaeaylgypvtnavitvpayfndsqrqatkdagviaglnvlriineptaaai

13、aygldrtgkgernvlifdlgggtfdvsiltiddgifevkatagdthlggedfdnrlvnhfveefkr

14、khkkdisqnkravrrlr

15、进一步的，重组过程中选用的质粒载体为pet30a-gst。

16、发明人还提供了一种hsp70蛋白免疫检测试剂，所述免疫检测试剂含有上述抗hsp70蛋白的单克隆抗体为其有效成分。

17、区别于现有技术，本发明所产生的有益技术效果为：上述技术方案提供一种抗hsp70蛋白兔单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为seq id no.1所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为seq id no.2所示的氨基酸序列。该抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达hsp70蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术特征：

1.一种抗hsp70蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为seq id no.1所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为seqid no.2所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别hsp70蛋白。

3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为兔单克隆抗体。

4.根据权利要求3所述的单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体的克隆号为27b15。

5.一种抗hsp70蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，用于免疫兔的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述重组蛋白包含gst蛋白标签、hsp70蛋白片段及his蛋白标签。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述hsp70蛋白片段为116-274位点的片段，其为seq id no.3所示的氨基酸序列。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，重组过程中选用的质粒载体为pet30a-gst。

9.一种hsp70蛋白免疫检测试剂，其特征在于，所述免疫检测试剂含有权利要求1所述抗hsp70蛋白的单克隆抗体为其有效成分。

10.根据权利要求9所述的免疫检测试剂，其特征在于，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。

技术总结
本发明涉及一种可以识别人HSP70抗原的单克隆抗体，其制备方法以及其在免疫检测中的用途。本发明提供一种抗HSP70蛋白兔单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。该抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达HSP70蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术研发人员：蒋宁城,李婷,赵普,林洋
受保护的技术使用者：福州迈新生物技术开发有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/25