1.一种基于劣势pam一锅法检测单增李斯特菌的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括crispr体系、rpa扩增体系和环状近端报告探针;其中,所述crispr体系包括ascas 12a rnp和包含劣势pam序列的crrna;所述rpa扩增体系包括rpa颗粒、聚合酶和扩增引物。
2.根据权利要求1所述的一种基于劣势pam一锅法检测单增李斯特菌的试剂盒,其特征在于,所述劣势pam序列包括单碱基差异pam:vttv、tvtv、ttvv;多碱基差异pam:vvtv、vtvv、tvvv;和特殊碱基差异pam:tttt、rrrn、vvvn;其中,r表示a+g、y表示c+t、v表示a+c+g、n表示a+c+g+t。
3.根据权利要求1所述的一种基于劣势pam一锅法检测单增李斯特菌的试剂盒,其特征在于,1x所述crispr体系包括20~30 mm hapes、3~8%蔗糖、2~3%普鲁兰糖、3~8%甘露醇、100~300nm ascas 12a rnp和100~200 nm 包含劣势pam序列的crrna。
4.根据权利要求1所述的一种基于劣势pam一锅法检测单增李斯特菌的试剂盒,其特征在于,所述crispr体系和所述rpa体系分别经过冻干处理,得到crispr冻干粉和rpa冻干粉。
5.根据权利要求4所述的一种基于劣势pam一锅法检测单增李斯特菌的试剂盒,其特征在于,所述crispr冻干粉和rpa冻干粉使用1xneb buffer 2.1作为切割和扩增反应的缓冲液。
6.根据权利要求1所述的一种基于劣势pam一锅法检测单增李斯特菌的试剂盒,其特征在于,所述扩增引物包括如seq id no .1所示的上游引物和如seq id no .2所示的下游引物。
7.根据权利要求1所述的一种基于劣势pam一锅法检测单增李斯特菌的试剂盒,其特征在于,所述环状近端报告探针具有“3gc+2at”的茎序列和不同长度的环结构域。
8.根据权利要求7所述的一种基于劣势pam一锅法检测单增李斯特菌的试剂盒,其特征在于,所述环结构域为10t。
9.一种基于劣势pam一锅法检测单增李斯特菌的方法,其特征在于,包括以下步骤:
10.根据权利要求9所述的一种基于劣势pam一锅法检测单增李斯特菌的方法,其特征在于,在一锅反应中,所述环状近端报告探针的加入量为200~400nm,核酸的浓度为5~12nm。