抗体药物偶联物及其应用的制作方法

本公开涉及生物医药领域，具体地，本公开涉及抗体药物偶联物及其应用。

背景技术：

1、抗体-药物偶联物(antibody-drug conjugate，下文简称“adc”或“偶联物”)相对于单纯的抗体药物而言已经显示出独特的优势，其通过将具有肿瘤细胞表面抗原结合特异性的单克隆抗体与生物活性分子(如细胞毒素)相连，从而将抗体的肿瘤识别靶向性和细胞毒素的高效杀伤作用相结合，巧妙的同时解决了抗体疗效偏低和毒素缺乏靶向性导致毒性过大的缺陷。这使得adc与传统的抗肿瘤药物相比，在准确的靶向肿瘤细胞的同时，降低对正常细胞的影响，大幅提高了抗肿瘤药物的有效性和安全性。

2、adc一般包括三个部分：抗体、接头(linker)和生物活性分子。adc的生物活性分子部分为发挥杀伤作用的毒素小分子，一般通过抑制dna或蛋白合成、抑制细胞有丝分裂等方式来杀伤肿瘤细胞。目前用于adc开发的毒素主要包括微管抑制剂美登素类(参见ep0425235、us5208020、us5416064、us7276497)和奥瑞他汀(mmae/mmaf，参见us2016304621a)。其他种类的细胞毒素还包括卡奇霉素类(calicheamicin，参见us5606040)，苯并二吡咯类衍生物(duocarmycin，参见us7129261)，咯并苯二氮卓类(pbds，参见wo2005/040170)和喜树碱类衍生物。其中喜树碱类衍生物包括sn-38、dxd、cpt-11、依沙替康、9-硝基喜树碱、10-羟基喜树碱等。毒素通过接头偶联到抗体上；抗体则能够特异性识别肿瘤细胞表面的靶点，将adc富集到肿瘤细胞表面，使得adc通过细胞内吞效应进入肿瘤细胞，释放毒素，达到特异性杀灭肿瘤的作用。

3、可见，毒素是adc的关键元素之一。因此，新的毒素、新的linker-payload分子以及由其制备的新的adc需要持续开发和研究。

技术实现思路

1、本公开涉及一类结构新颖的毒素分子，以及由该毒素分子制备的具有特定结构的linker-payload分子和抗体药物偶联物，本公开的毒素分子和/或抗体药物偶联物在多种肿瘤(如结肠癌、胰腺癌、乳腺癌等)上体现出优异的抗肿瘤活性。

2、为此，本公开的第一方面，提供了式i所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，

3、

4、其中：

5、r选自

6、r1选自氢、c1-c6烷基；

7、r2选自氢、c1-c6烷基、羟基取代的c1-c6烷基；

8、r3选自氢、c1-c6烷基、羟基取代的c1-c6烷基、c1-c6烷氧基c1-c6亚烷基、羟基-c1-c6亚烷基-c(＝o)-；

9、r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-、rarbn-c(＝o)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；

10、r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-、rarbn-c(＝o)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；

11、ra、rb各自独立地选自氢、c1-c6烷基。

12、在一些实施方案中，r1为氢。

13、在一些实施方案中，r2选自氢、

14、在一些实施方案中，r2选自氢、c1-c6烷基。

15、在一些实施方案中，r2为氢。

16、在一些实施方案中，r3选自氢、羟基取代的c1-c6烷基、c1-c6烷氧基c1-c6亚烷基、羟基-c1-c6亚烷基-c(＝o)-。

17、在一些实施方案中，r3选自氢、

18、在一些实施方案中，r3选自羟基取代的c1-c6烷基。

19、在一些实施方案中，r3为

20、在一些实施方案中，ra、rb均为氢。

21、在一些实施方案中，r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-c(＝o)-。

22、在一些实施方案中，r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、rarbn-c(＝o)-。

23、在一些实施方案中，r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

24、在一些实施方案中，r4选自氢、c1-c6烷基。

25、在一些实施方案中，r4选自氢、甲基。

26、在一些实施方案中，r5选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

27、在一些实施方案中，r5选自氢、甲基、

28、在一些实施方案中，r4、r5均为氢。

29、在一些实施方案中，r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-c(＝o)-。

30、在一些实施方案中，r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、rarbn-c(＝o)-。

31、在一些实施方案中，r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

32、在一些实施方案中，r6选自氢、c1-c6烷基。

33、在一些实施方案中，r6选自氢、甲基。

34、在一些实施方案中，r7选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

35、在一些实施方案中，r7选自氢、甲基、

36、在一些实施方案中，r6、r7均为氢。

37、在一些优选的实施方案中，所述化合物具有式i-1所示的结构式，

38、

39、其中：

40、r1选自氢、c1-c6烷基；

41、r2选自氢、c1-c6烷基、羟基取代的c1-c6烷基；

42、r3选自氢、c1-c6烷基、羟基取代的c1-c6烷基、c1-c6烷氧基c1-c6亚烷基、羟基-c1-c6亚烷基-c(＝o)-。

43、在一些实施方案中，r1为氢。

44、在一些实施方案中，r2选自氢、

45、在一些实施方案中，r2选自氢、c1-c6烷基。

46、在一些实施方案中，r2为氢。

47、在一些实施方案中，r3选自氢、羟基取代的c1-c6烷基、c1-c6烷氧基c1-c6亚烷基、羟基-c1-c6亚烷基-c(＝o)-。

48、在一些实施方案中，r3选自氢、

49、在一些实施方案中，r3选自羟基取代的c1-c6烷基。

50、在一些实施方案中，r3为

51、在一些优选的实施方案中，所述化合物具有式i-2所示的结构式，

52、

53、其中：

54、r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-、rarbn-c(＝o)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；

55、ra、rb各自独立地选自氢、c1-c6烷基。

56、在一些实施方案中，ra、rb均为氢。

57、在一些实施方案中，r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-c(＝o)-。

58、在一些实施方案中，r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、rarbn-c(＝o)-。

59、在一些实施方案中，r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

60、在一些实施方案中，r4选自氢、c1-c6烷基。

61、在一些实施方案中，r4选自氢、甲基。

62、在一些实施方案中，r5选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

63、在一些实施方案中，r5选自氢、甲基、

64、在一些实施方案中，r4、r5均为氢。

65、在一些优选的实施方案中，所述化合物具有式i-3所示的结构式，

66、

67、其中：

68、r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-、rarbn-c(＝o)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；

69、ra、rb各自独立地选自氢、c1-c6烷基。

70、在一些实施方案中，ra、rb均为氢。

71、在一些实施方案中，r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-c(＝o)-。

72、在一些实施方案中，r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、rarbn-c(＝o)-。

73、在一些实施方案中，r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

74、在一些实施方案中，r6选自氢、c1-c6烷基。

75、在一些实施方案中，r6选自氢、甲基。

76、在一些实施方案中，r7选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

77、在一些实施方案中，r7选自氢、甲基、

78、在一些实施方案中，r6、r7均为氢。

79、在一些实施方案中，所述化合物选自：

80、

81、

82、

83、本公开的第二方面，提供了式ii所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，

84、m-l1-l2-l3-d

85、ii

86、其中：

87、m为

88、l1选自-(ch2)p1c(＝o)-、-(ch2ch2o)q1-、-(ch2)p2c(＝o)-nh-(ch2ch2o)q2(ch2)p3c(＝o)-；

89、p1、p2、p3各自独立地选自1-10之间的任意整数；

90、q1、q2各自独立地选自1-20之间的任意整数；

91、l2为氨基酸残基或由2-10个氨基酸残基形成的肽残基；

92、l3不存在或为-nh-ch2-；

93、d为

94、r’选自优选地，r’中，左侧的连接位点与l3相连接；

95、r1选自氢、c1-c6烷基；

96、r2选自氢、c1-c6烷基、羟基取代的c1-c6烷基；

97、r3选自氢、c1-c6烷基、羟基取代的c1-c6烷基、c1-c6烷氧基c1-c6亚烷基、羟基-c1-c6亚烷基-c(＝o)-；

98、r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-、rarbn-c(＝o)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；

99、r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-、rarbn-c(＝o)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；

100、ra、rb各自独立地选自氢、c1-c6烷基。

101、在一些实施方案中，l1为-(ch2)p1c(＝o)-。

102、在一些实施方案中，p1选自1、2、3、4、5。在一些实施方案中，p1选自3、4、5。在一些实施方案中，p1为5。

103、在一些实施方案中，p2选自1、2、3、4、5。在一些实施方案中，p2选自2、3、4、5。在一些实施方案中，p2选自2、3、4。在一些实施方案中，p2为2。

104、在一些实施方案中，p3选自1、2、3、4、5。在一些实施方案中，p3选自2、3、4、5。在一些实施方案中，p3选自2、3、4。在一些实施方案中，p3为2。

105、在一些实施方案中，q1选自1-12之间的任意整数。在一些实施方案中，q1选自2-12之间的任意整数。在一些实施方案中，q1选自6-10之间的任意整数。在一些实施方案中，q1为8。

106、在一些实施方案中，q2选自1-12之间的任意整数。在一些实施方案中，q2选自2-12之间的任意整数。在一些实施方案中，q2选自6-10之间的任意整数。在一些实施方案中，q2为8。

107、在一些实施方案中，l2为由2-4个(优选2个)氨基酸残基形成的肽残基。在一些实施方案中，所述氨基酸残基选自甘氨酸残基、苯丙氨酸残基、缬氨酸残基、瓜氨酸残基、丙氨酸残基。

108、在一些实施方案中，l2选自甘氨酸残基-甘氨酸残基-苯丙氨酸残基-甘氨酸残基(ggfg)、缬氨酸残基-瓜氨酸残基(vc)、缬氨酸残基-丙氨酸残基(va)、丙氨酸残基-丙氨酸残基-丙氨酸残基(aaa)。

109、在一些实施方案中，l2为甘氨酸残基-甘氨酸残基-苯丙氨酸残基-甘氨酸残基(ggfg)，如为

110、在一些实施方案中，l3为-nh-ch2-。

111、在一些实施方案中，r1为氢。

112、在一些实施方案中，r2选自氢、

113、在一些实施方案中，r2选自氢、c1-c6烷基。

114、在一些实施方案中，r2为氢。

115、在一些实施方案中，r3选自氢、羟基取代的c1-c6烷基、c1-c6烷氧基c1-c6亚烷基、羟基-c1-c6亚烷基-c(＝o)-。

116、在一些实施方案中，r3选自氢、

117、在一些实施方案中，r3选自羟基取代的c1-c6烷基。

118、在一些实施方案中，r3为

119、在一些实施方案中，ra、rb均为氢。

120、在一些实施方案中，r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-c(＝o)-。

121、在一些实施方案中，r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、rarbn-c(＝o)-。

122、在一些实施方案中，r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

123、在一些实施方案中，r4选自氢、c1-c6烷基。

124、在一些实施方案中，r4选自氢、甲基。

125、在一些实施方案中，r5选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

126、在一些实施方案中，r5选自氢、甲基、

127、在一些实施方案中，r4、r5均为氢。

128、在一些实施方案中，r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-c(＝o)-。

129、在一些实施方案中，r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、rarbn-c(＝o)-。

130、在一些实施方案中，r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

131、在一些实施方案中，r6选自氢、c1-c6烷基。

132、在一些实施方案中，r6选自氢、甲基。

133、在一些实施方案中，r7选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

134、在一些实施方案中，r7选自氢、甲基、

135、在一些实施方案中，r6、r7均为氢。

136、在一些优选的实施方案中，d具有以下式i-1’所示的结构式，

137、

138、其中：

139、r1选自氢、c1-c6烷基；

140、r2选自氢、c1-c6烷基、羟基取代的c1-c6烷基；

141、r3选自氢、c1-c6烷基、羟基取代的c1-c6烷基、c1-c6烷氧基c1-c6亚烷基、羟基-c1-c6亚烷基-c(＝o)-。

142、在一些实施方案中，r1为氢。

143、在一些实施方案中，r2选自氢、

144、在一些实施方案中，r2选自氢、c1-c6烷基。

145、在一些实施方案中，r2为氢。

146、在一些实施方案中，r3选自氢、羟基取代的c1-c6烷基、c1-c6烷氧基c1-c6亚烷基、羟基-c1-c6亚烷基-c(＝o)-。

147、在一些实施方案中，r3选自氢、

148、在一些实施方案中，r3选自羟基取代的c1-c6烷基。

149、在一些实施方案中，r3为

150、在一些优选的实施方案中，d具有以下式i-2’所示的结构式，

151、

152、其中：

153、r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-、rarbn-c(＝o)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；

154、ra、rb各自独立地选自氢、c1-c6烷基。

155、在一些实施方案中，ra、rb均为氢。

156、在一些实施方案中，r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-c(＝o)-。

157、在一些实施方案中，r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、rarbn-c(＝o)-。

158、在一些实施方案中，r4、r5各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

159、在一些实施方案中，r4选自氢、c1-c6烷基。

160、在一些实施方案中，r4选自氢、甲基。

161、在一些实施方案中，r5选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

162、在一些实施方案中，r5选自氢、甲基、

163、在一些实施方案中，r4、r5均为氢。

164、在一些优选的实施方案中，d具有以下式i-3’所示的结构式，

165、

166、其中：

167、r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、羧基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-、rarbn-c(＝o)-、咪唑基(如)、苯基、羟基取代的苯基(如)、吲哚基(如)；

168、ra、rb各自独立地选自氢、c1-c6烷基。

169、在一些实施方案中，ra、rb均为氢。

170、在一些实施方案中，r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷硫基、rarbn-c(＝o)-。

171、在一些实施方案中，r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、巯基、rarbn-c(＝o)-。

172、在一些实施方案中，r6、r7各自独立地选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

173、在一些实施方案中，r6选自氢、c1-c6烷基。

174、在一些实施方案中，r6选自氢、甲基。

175、在一些实施方案中，r7选自氢、c1-c6烷基，且所述c1-c6烷基任选地被选自以下的基团所取代：羟基、rarbn-c(＝o)-。

176、在一些实施方案中，r7选自氢、甲基、

177、在一些实施方案中，r6、r7均为氢。

178、在一些实施方案中，d选自：

179、

180、

181、在一些实施方案中，所述化合物选自：

182、

183、

184、

185、

186、本公开的第三方面，提供了式iii所示的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，

187、ab-(m’-l1-l2-l3-d)n

188、iii

189、ab为抗体或其抗原结合片段；

190、m’为

191、l1、l2、l3、d的定义各自独立地如第二方面的任一技术方案所描述；

192、n为1-20之间的任意数值(如1、1.5、2、2.5、2.7、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5或20，或者如1-1.5、1.5-2、2-2.5、2.5-3、3-3.5、3.5-4、4-4.5、4.5-5、5-5.5、5.5-6、6-6.5、6.5-7、7-7.5、7.5-8、8-8.5、8.5-9、9-9.5、9.5-10、10-10.5、10.5-11、11-11.5、11.5-12、12-12.5、12.5-13、13-13.5、13.5-14、14-14.5、14.5-15、15-15.5、15.5-16、16-16.5、16.5-17、17-17.5、17.5-18、18-18.5、18.5-19、19-19.5或19.5-20)。

193、本公开中，dar(drug antibody ratio)是指偶联到抗体的药物分子的个数(例如，式iii中的n)。本文所述的抗体药物偶联物中包含的药物分子的个数可以是整数，也可以是小数。无论是整数还是小数，其指的均是每个抗体偶联的药物分子的平均数量。“n为1-20之间的任意数值”，其表示，n可以是选自1-20之间的任意整数(包括端点1和20)，也可以是选自1-20之间的任意小数。同时，本领域技术人员可以理解，即使采用相同的制备方法，不同的批次制备得到的抗体药物偶联物的dar值也不一定完全相同，例如，可以在上下不超过0.5的范围内浮动。

194、dar可以通过常规手段来测定，诸如质谱、elisa测定法、hic和hplc。还可以测定adc在n方面的定量分布。在有些情况中，将n为某数值的同质adc从具有其它药物载荷的adc中分离、纯化和验证可以通过诸如hic、反相hplc或电泳的手段来实现。

195、在一些实施方案中，所述抗体药物偶联物选自：

196、

197、

198、

199、本公开形成的adc中，抗体ab通过-s-与linker-payload末端的丁二酰亚胺的碳原子相连接，该-s-并非另外引入ab的巯基，而是抗体ab被还原而打开二硫键后的抗体自身所含有的巯基。

200、在一些实施方案中，所述抗体选自抗adam9抗体、抗trop-2抗体、抗cd37抗体、抗her2抗体、抗b7h4抗体、抗cd70抗体、抗egfrviii抗体、抗mesothelin抗体、抗folateeceoptor1抗体、抗mucin 1抗体、抗cd138抗体、抗cd20抗体、抗cd19抗体、抗cd30抗体、抗sltrk6抗体、抗nectin 4抗体、抗tissue factor抗体、抗mucin16抗体、抗endothelinreceoptor抗体、抗steap1抗体、抗slc39a6抗体、抗guanylylcyclase c抗体、抗psma抗体、抗ccd79b抗体、抗cd22抗体、抗sodium phosphate cotransporter2b抗体、抗gpnmb抗体、抗trophoblast glycoprotein抗体、抗ags-16抗体、抗egfr抗体、抗cd33抗体、抗cd66e抗体、抗cd74抗体、抗cd56抗体、抗pd-l1抗体、抗tacstd2抗体、抗dr5抗体、抗e16抗体、抗steap1抗体、抗0772p抗体、抗mpf抗体、抗napi3b抗体、抗sema 5b、抗psca hlg抗体、抗etbr抗体、抗msg783抗体、抗steap2抗体、抗trpm4抗体、抗cripto抗体、抗cd21抗体、抗cd79b抗体、抗fcrh2抗体、抗nca抗体、抗mdp抗体、抗il20rα抗体、抗brevican抗体、抗ephb2r抗体、抗aslg659抗体、抗psca抗体、抗geda抗体、抗baff-r抗体、抗cd22抗体、抗cd79a抗体、抗cxcr5抗体、抗hla-dob抗体、抗p2x5抗体、抗cd72抗体、抗ly64抗体、抗fcrh1抗体、抗irta2抗体、抗tenb2抗体、抗整合素α5β6抗体、抗α4β7抗体、抗fgf2抗体、抗fgfr2抗体、抗her3抗体、抗cd70抗体、抗ca6抗体、抗dll3抗体、抗dll4抗体、抗p-cadherin抗体、抗epcam抗体、抗pcad抗体、抗cd223抗体、抗lypd3抗体、抗ly6e抗体、抗efna4抗体、抗ror1抗体、抗slitrk6抗体、抗5t4抗体、抗enpp3抗体、抗slc39a6抗体、抗claudin18.2抗体、抗bmpr1b抗体、抗e16抗体、抗steap1抗体、抗tyro7抗体、抗0772p抗体、抗mpf抗体、抗napi3b抗体、抗sema 5b抗体、抗psca hlg抗体、抗etbr抗体、抗msg783抗体、抗steap2抗体、抗trpm4抗体、抗cripto抗体、抗cd21抗体、抗cd79b抗体、抗fcrh2抗体、抗nca抗体、抗mdp抗体、抗il20rα抗体、抗brevican抗体、抗ephb2r抗体、抗aslg659抗体、抗psca抗体、抗geda抗体、抗cd22抗体、抗cd79a抗体、抗cxcr5抗体、抗hla-dob抗体、抗p2x5抗体、抗cd72抗体、抗ly64抗体、抗fcrh1抗体、抗irta2抗体、抗c-met抗体、抗apoe抗体、抗cd1 lc抗体、抗cd40抗体、抗cd45(ptprc)抗体、抗cd49d(itga4)抗体、抗cd80抗体、抗csf1r抗体、抗ctsd抗体、抗gzmb抗体、抗ly86抗体、抗ms4a7抗体、抗pik3ap1抗体、抗pik3cd抗体、抗ccr5抗体、抗ifng抗体、抗il10ra1抗体、抗il-6抗体、抗acta2抗体、抗col7a1抗体、抗lox抗体、抗lrrc15抗体、抗mcpt8抗体、抗mmp10抗体、抗nog抗体、抗serpinel抗体、抗stat1抗体、抗tgfbr1抗体、抗ctss抗体、抗pgf抗体、抗vegfa抗体、抗c1qa抗体、抗c1qb抗体、抗angptl4抗体、抗egln抗体、抗angptl4抗体、抗egln3抗体、抗bnip3抗体、抗aif1抗体、抗ccl5抗体、抗cxcl10抗体、抗cxcl11抗体、抗ifi6抗体、抗plod2抗体、抗kiss1r抗体、抗stc2抗体、抗ddit4抗体、抗pfkfb3抗体、抗pgk1抗体、抗pdk1抗体、抗akr1c1抗体、抗akr1c2抗体、抗cadm1抗体、抗cdh11抗体、抗col6a3抗体、抗ctgf抗体、抗hmox1抗体、抗krt33a抗体、抗lum抗体、抗wnt5a抗体、抗igfbp3抗体、抗mmp14抗体、抗cdcp1抗体、抗pdgfra抗体、抗tcf4抗体、抗tgf抗体、抗tgfb1抗体、抗tgfb2抗体、抗cdl lb抗体、抗adgre1抗体、抗emr2抗体、抗tnfrsf21抗体、抗upk1b抗体、抗tnfsf9抗体、抗mmp16抗体、抗mfi2抗体、抗igf-1r抗体、抗rnf43抗体、抗napi2b抗体、抗bcma抗体、抗tenb2抗体。

201、在一些实施方案中，所述抗体选自抗adam9抗体、抗her3抗体、抗her2抗体、抗trop-2抗体、抗b7h4抗体、抗claudin18.2抗体。

202、在一些实施方案中，所述抗体为抗adam9抗体、抗trop-2抗体。

203、在一些实施方案中，所述抗体为抗adam9抗体。

204、在一些实施方案中，所述抗体为抗trop-2抗体。

205、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，其中：

206、所述轻链可变区包含seq id no:1所示的lcdr1、seq id no:3所示的lcdr2和seqid no:4所示的lcdr3；所述重链可变区包含seq id no:6所示的hcdr1、seq id no:8所示的hcdr2和seq id no:10所示的hcdr3；或者，

207、所述轻链可变区包含seq id no:2所示的lcdr1、seq id no:3所示的lcdr2和seqid no:5所示的lcdr3；所述重链可变区包含seq id no:7所示的hcdr1、seq id no:9所示的hcdr2和seq id no:11所示的hcdr3；或者，

208、所述轻链可变区包含seq id no:22所示的lcdr1、seq id no:23所示的lcdr2和seq id no:24所示的lcdr3；所述重链可变区包含seq id no:25所示的hcdr1、seq id no:26所示的hcdr2和seq id no:27所示的hcdr3。

209、在一些实施方案中，所述轻链可变区包含seq id no:2所示的lcdr1、seq id no:3所示的lcdr2和seq id no:5所示的lcdr3；所述重链可变区包含seq id no:7所示的hcdr1、seq id no:9所示的hcdr2和seq id no:11所示的hcdr3。

210、在一些实施方案中，所述轻链可变区包含seq id no:22所示的lcdr1、seq id no:23所示的lcdr2和seq id no:24所示的lcdr3；所述重链可变区包含seq id no:25所示的hcdr1、seq id no:26所示的hcdr2和seq id no:27所示的hcdr3。

211、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，其中：

212、所述轻链可变区包含如seq id no:12所示的序列，所述重链可变区包含如seq idno:13所示的序列；或者，

213、所述轻链可变区包含如seq id no:14所示的序列，所述重链可变区包含如seq idno:15所示的序列；或者，

214、所述轻链可变区包含如seq id no:14所示的序列，所述重链可变区包含如seq idno:16所示的序列；或者，

215、所述轻链可变区包含如seq id no:28所示的序列，所述重链可变区包含如seq idno:29所示的序列。

216、在一些实施方案中，所述轻链可变区包含如seq id no:14所示的序列，所述重链可变区包含如seq id no:16所示的序列。

217、在一些实施方案中，所述轻链可变区包含如seq id no:28所示的序列，所述重链可变区包含如seq id no:29所示的序列。

218、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段还包含轻链恒定区和重链恒定区，其中：

219、所述轻链恒定区选自人源性lambda恒定区、kappa恒定区或上述恒定区的突变体；

220、所述重链恒定区选自人源性igg、igm、iga、igd、ige恒定区或上述恒定区的突变体。

221、在一些实施方案中，所述igg选自igg1、igg2、igg3和igg4。

222、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：

223、如seq id no:17所示的轻链和如seq id no:18所示的重链；或者，

224、如seq id no:19所示的轻链和如seq id no:20所示的重链；或者，

225、如seq id no:19所示的轻链和如seq id no:21所示的重链；或者，

226、如seq id no:30所示的轻链和如seq id no:31所示的重链。

227、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如seq id no:19所示的轻链和如seq id no:21所示的重链。

228、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含如seq id no:30所示的轻链和如seq id no:31所示的重链。

229、在一些实施方案中，n为1-10之间的任意数值。

230、在一些实施方案中，n为4-8之间的任意数值，例如7.6、7.7、7.8或7.9。

231、本公开的第四方面，提供了制备前述的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物的方法，其包括：

232、将权利要求前述的式ii所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物与前述任一方案所描述的ab反应，获得所述的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物。

233、下面，对于本公开的抗体-药物偶联物或其制造中间体的代表性的制造方法进行说明。

234、具体而言，本公开中，经由硫醚而将抗体和接头结构连接的抗体-药物偶联物例如可通过下述的方法来制造。

235、m-l1-l2-l3-d+ab-sh→ab-s-m’-l1-l2-l3-d

236、如上接头-药物中间体化合物与ab-sh反应，以通过由抗体的铰链部的二硫键部分形成的硫醚键将接头-药物中间体化合物与抗体连接；制备得到式表示的抗体-药物偶联物。其中，l1-l2-l3-d的定义如本公开说明书所述。

237、式中，ab-sh表示携带巯基的抗体，ab表示抗体，m-l1-l2-l3-d所示的化合物即为本公开上述的接头-药物中间体化合物，作为产物的ab-s-m’-l1-l2-l3-d所示的化合物即为本公开的抗体-药物偶联物。

238、为了便于说明，ab-s-m’-l1-l2-l3-d所示的化合物中，以1个从药物至接头末端的结构部分与1个抗体连接而成的结构的形式进行了记载，但实际上，相对于1个抗体分子而言连接有多个该结构部分的情况较多。例如，如上所述，在一个抗体分子上连接2～8个、优选为4～8个、更优选为6～8个接头-药物中间体化合物。该情况在以下的制造方法的说明中也同样。实际上，如上所述，本公开中，以平均药物连接数表示连接于每一个分子抗体的接头-药物的平均数目。

239、即，如上所示，通过使本公开上述的接头-药物中间体化合物与具有巯基的抗体ab-sh反应，可制造式ab-s-m’-l1-l2-l3-d所示的抗体-药物偶联物。

240、具有巯基的抗体可利用本领域技术人员公知的方法获得(hermanson，g.t、bioconjugate techniques、pp.56-136、pp.456-493、academic press(1996))。例如，可举出以下方法：使traut举出试剂与抗体的氨基作用；使n-琥珀酰亚胺基s-乙酰硫代链烷酸酯(n-succinimidyl s-acetylthioalkanoate)类与抗体的氨基作用后，与羟基胺作用；在使n-琥珀酰亚胺基3-(吡啶基二硫代)丙酸酯作用后，使还原剂作用；使二硫苏糖醇、2-巯基乙醇、三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(tcep)等还原剂与抗体作用而将抗体内铰链部的二硫键还原从而产生巯基；等等，但不限于这些方法。

241、具体而言，作为还原剂，相对于每一个抗体内铰链部二硫键，使用2～8摩尔当量tcep，在含有螯合剂的缓冲液中，使其与抗体反应，由此，可得到部分或完全地将抗体内铰链部二硫醚还原而得到的携带巯基的抗体(ab-sh)。作为螯合剂，可举出例如乙二胺四乙酸(edta)、二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)等。可以以1mm～20mm的浓度使用它们。作为缓冲液，可使用磷酸钠、硼酸钠、乙酸钠溶液等。在具体的例子中，于4℃～37℃使抗体与tcep反应1～4小时，由此，可得到部分或完全还原而具有巯基的抗体ab-sh。

242、相对于每一个具有巯基的抗体ab-sh，可使用2～20摩尔当量的ab-s-m’-l1-l2-l3-d所示的化合物，制造1个抗体连接2个-8个药物而成的抗体-药物偶联物ab-s-m’-l1-l2-l3-d。具体而言，在含有具有巯基的抗体ab-sh的缓冲液中，添加溶解有式m-l1-l2-l3-d所示的化合物的溶液并使其进行反应。此处，作为缓冲液，可使用乙酸钠溶液、磷酸钠、硼酸钠，epps等。反应时的ph为5～9，更优选在ph7附近反应。作为溶解化合物m-l1-l2-l3-d的溶剂，可使用二甲基亚砜(dmso)、二甲基甲酰胺(dmf)、二甲基乙酰胺(dma)、n-甲基-2-吡啶酮(nmp)等有机溶剂。可以以1～20％v/v将溶解有式m-l1-l2-l3-d所示的化合物的有机溶剂溶液添加到含有具有巯基的抗体ab-sh的缓冲液中并进行反应。反应温度为0～37℃、更优选为10～25℃，反应时间为0.5～2小时。可通过利用含硫醇试剂使未反应的式m-l1-l2-l3-d所示的化合物的反应性失活而结束反应。含硫醇试剂例如为半胱氨酸或n-乙酰-l-半胱氨酸(nac)。更具体而言，添加相对于使用的式m-l1-l2-l3-d所示的化合物而言1～2摩尔当量的nac，于室温孵育10～30分钟，由此使反应结束。

243、对于制造的抗体-药物偶联物ab-s-m’-l1-l2-l3-d，可利用以下的共通操作，进行浓缩、缓冲液交换、纯化等的操作。

244、共通操作a：抗体或抗体-药物偶联物水溶液的浓缩

245、在超滤管内，放入抗体或抗体-药物偶联物溶液，使用离心机进行离心操作(例如，以2000g～3800g离心5～20分钟)，将抗体或抗体-药物偶联物溶液浓缩。

246、共通操作b：抗体的浓度测定

247、使用uv测定器，按照制造商规定的方法，进行抗体浓度的测定。

248、此时，使用随着抗体不同而显示不同的280nm吸光系数(1.3mlmg-1cm-1～1.8mlmg-1cm-1)。

249、共通操作c-1：抗体的缓冲液交换

250、按照制造商说明书的方法，用含有氯化钠(例如，137mm)及乙二胺四乙酸(edta，例如，5mm)的磷酸缓冲液或者(例如，10mm，ph6.5)(本说明书中也称为pbs6.5/edta)或者epps缓冲液/edta。将使用了sephadex g-25载体的pd-10柱平衡化。针对一根该pd-10柱，装填2ml抗体水溶液，然后分离用pbs6.5/edta 3.5ml洗脱的级分(3.5ml)。利用共通操作a将该级分浓缩，使用共通操作b，进行抗体浓度的测定，然后使用pbs6.5/edta，将抗体浓度调整为10mg/ml。

251、共通操作c-2：抗体的缓冲液交换

252、按照制造商规定的方法，用含有氯化钠(例如，50mm)及edta(例如，2mm)的磷酸缓冲液(例如，50mm，ph7.2)(本说明书中也称为pbs7.2/edta)。将使用了sephadex g-25载体的pd-0柱平衡化。针对一根该pd-10柱，装填2ml抗体水溶液，然后分离获取用pbs7.2/edta3.5ml洗脱的级分(3.5ml)。利用共通操作a将该级分浓缩，使用共通操作b进行抗体浓度的测定，然后使用pbs6.5/edta，将抗体浓度调整为5mg/ml。

253、共通操作d-1：抗体-药物偶联物的纯化

254、使用市售的磷酸缓冲液(例如，pbs7.4)、含有氯化钠(例如，137mm)的磷酸钠缓冲液(例如，10mm，ph6.0；本说明书中也称为pbs6.0。)或含有山梨糖醇(例如，5％)的乙酸缓冲液(例如，10mm，ph5.5；本说明书中也称为pbs)中的任一种缓冲液将pd-10柱平衡化。在该pd-10柱中装填抗体-药物偶联物反应水溶液(例如，约1.5ml)，用制造商规定的量的缓冲液洗脱，由此分离获取抗体级分。将该分离获取的级分再次装填至pd-10柱，用缓冲液洗脱，进行凝胶过滤纯化操作，反复操作计2～3次，由此，得到了除去了未连接的药物接头、低分子化合物(三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(tce p)，n-乙酰-l-半胱氨酸(nac)，二甲基亚砜)的抗体-药物偶联物。

255、共通操作d-2：抗体-药物偶联物的纯化

256、使用市售的磷酸缓冲液(例如，pbs7.4)、含有氯化钠(例如，137mm)的磷酸钠缓冲液(例如，10mm，ph6.0；本说明书中也称为pbs6.0。)或含有山梨糖醇(例如，5％)的组氨酸缓冲液(例如，10mm，ph5.5)中的任一种缓冲液将akta柱(填料：sephadex g 25)平衡化。进样器装载抗体-药物偶联物反应水溶液(例如，约2ml)，用制造商规定的量的缓冲液洗脱，由此分离获取抗体级分。由此，得到了除去了未连接的药物接头、低分子化合物(三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(tcep)，n-乙酰-l-半胱氨酸(nac)，二甲基亚砜)的抗体-药物偶联物。

257、本公开的第五方面，提供了药物组合物，其包含前述的式i所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者包含前述的式ii所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者包含前述的式iii所示的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物；任选地，还包含一种或多种药用辅料，例如载体和/或赋形剂。

258、本公开的第六方面，提供了前述的式i所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的式ii所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的式iii所示的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗疾病的药物中的用途。

259、本公开的第七方面，提供了前述的式i所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的式ii所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的式iii所示的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的药物组合物，其用于预防和/或治疗疾病。

260、本公开的第八方面，提供了预防和/或治疗疾病的方法，其包括给予有需要的受试者有效量的前述的式i所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的式ii所示的化合物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的式iii所示的抗体药物偶联物、其药学上可接受的盐、其立体异构体、或其溶剂合物，或者前述的药物组合物。

261、在一些实施方案中，所述疾病为癌症。

262、在一些实施方案中，所述疾病选自膀胱癌、乳腺癌(尤其是三阴性乳腺癌)、宫颈癌、结直肠癌(尤其是腺癌、胃肠类癌瘤、胃肠道间质瘤、原发性结直肠淋巴瘤、平滑肌肉瘤、黑素瘤或鳞状细胞癌)、脑癌、食管癌、胃癌、头颈癌、肝癌、非小细胞肺癌(尤其是鳞状细胞癌、腺癌或大细胞未分化癌)、骨髓癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、甲状腺癌、睾丸癌、子宫内膜癌、胆囊癌。

263、在一些实施方案中，所述疾病选自胃癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、脑癌、胰腺癌、肝癌、结直肠癌、乳腺癌。

264、有益效果：

265、1.本公开的adc(如靶向adam-9的各个adc或靶向trop-2的各个adc)对胰腺癌细胞系如bxpc-3的抑瘤效果优异。

266、2.本公开的adc(如靶向adam-9的各个adc或靶向trop-2的各个adc)对结肠癌细胞系如colo-205的抑瘤效果优异。

267、3.细胞毒试验中，本公开的毒素分子和adc(如靶向adam-9的各个adc或靶向trop-2的各个adc)对多种肿瘤细胞系(如bxpc-3)的抑瘤效果优异。