一种过表达稳转细胞株的快速构建方法及其应用与流程

文档序号:37457968发布日期:2024-03-28 18:41阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种过表达稳转细胞株的快速构建方法,其特征在于,

2.根据权利要求1所述的一种过表达稳转细胞株的快速构建方法,其特征在于,所述crispr/cas9一体化载体的切割载体可选用px330、px458、px459的其中一种为骨架进行构建。

3.根据权利要求1所述的一种过表达稳转细胞株的快速构建方法,其特征在于,所述供体质粒可以选用所有含有ampr基因的质粒。

4.根据权利要求1所述的一种过表达稳转细胞株的快速构建方法,其特征在于,所述宿主细胞株为野生型293t细胞。

5.权利要求1至4任一项所述的快速构建方法所构建的过表达稳转细胞株在基因功能研究或药物筛选或抗体滴度测定或疫苗评价中的应用。

6.一种人ace2过表达稳转细胞株的构建方法,其特征在于,其包括如下步骤:

7.权利要求6所述的人ace2过表达稳转细胞株在基因功能研究或药物筛选或抗体滴度测定或疫苗评价中的应用。

8.一种bfp过表达稳转细胞株的构建方法,其特征在于,其包括如下步骤:

9.权利要求6或8所用的crispr/cas9一体化载体的构建方法,其特征在于,其包括如下步骤:


技术总结
本发明公开一种过表达细胞株的快速构建方法,本发明采用CRISPR/Cas9一体化载体与供体质粒对宿主细胞进行共转染,通过2个sgRNA分别对待敲入质粒(供体质粒)的AmpR基因和宿主细胞特定基因位点HPRT基因同时进行切割,通过诱导非同源末端连接(NHEJ)修复的方式实现全质粒定点整合,无需二次载体构建,无需线性DNA片段转染,即可快速获得目的序列稳定表达的细胞株,构建时间短,实验成本低,且商品化的AmpR抗性质粒易于获得,非常适用于突发公共卫生事件急需过表达细胞株以及分子实验技术相对薄弱的科研工作者进行过表达细胞株的快速构建。

技术研发人员:张亮亮,李丹丹,边海波,卢俊南
受保护的技术使用者:长治市人民医院(长治市职业病防治院)
技术研发日:
技术公布日:2024/3/27
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