一种分泌抗小反刍兽疫病毒F蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗与应用的制作方法

本技术涉及生物检测领域，具体涉及一种分泌抗小反刍兽疫病毒f蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗与在小反刍兽疫病毒感染检测中的应用。

背景技术：

1、小反刍兽疫(peste des petits ruminants, ppr)是由小反刍兽疫病毒(pestedes petits ruminants virus, pprv) 引起的一种高度接触性病毒性传染病，主要感染山羊、绵羊等小反刍动物，其中山羊高度易感，发病率高达100％，严重暴发时致死率为100％，为养殖业造成严重的经济损失。pprv属于副黏病毒科麻疹病毒属，根据n基因和f基因可分为4个谱系，目前只有一个血清型。

2、目前已经证实了国内目前存在的毒株主要都是ⅳ系，虽然pprv疫苗毒株属于ⅱ系，但是该疫苗毒株免疫保护效果良好，通过制定合理的防疫措施，该病有望从国内清除。

技术实现思路

1、在本领域中，建立快速、有效、高通量的pprv检测方法，能够为消灭小反刍兽疫提供技术支撑。此前对pprv病原的检测多用常规rt-pcr和qrt-pcr检测方法，需要进行病毒rna提取等操作，操作繁杂、耗时长、成本较高，且不能高通量检测。单克隆抗体在动物病毒的诊断和防治中起重要作用。利用单克隆抗体建立的检测病原的双抗体夹心elisa检测方法或间接免疫荧光方法，都在病原的临床监测和实验室检测中发挥着重要作用。目前国内尚无针对pprv病原f蛋白的单克隆抗体以及高通量检测方法，因此，需要提供一种简便、快速、敏感性高和特异性好的有效检测手段对大量样品进行pprv病原检测。

2、本技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种分泌抗小反刍兽疫病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其制备方法。

3、本技术还要解决的技术问题是提供上述杂交瘤细胞株分泌的单抗及其制备方法。

4、本技术最后要解决的技术问题是提供上述单抗的应用。具体来说，本技术涉及如下内容：

5、本技术提供一种杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞株的保藏编号为cgmcc no.45615。

6、本技术的一个具体实施方式中，所述杂交瘤细胞结合的抗原为pprv nigeria 75/1株f蛋白，优选所述杂交瘤细胞结合的抗原表位的氨基酸序列包括如seq id no.1所示的序列，进一步优选所述杂交瘤细胞结合的抗原表位的氨基酸序列如seq id no.1所示，

7、抗原表位序列seq id no.1为：

8、alhqslmnsqaieslktsleksnqaieeirlanketilavqgvqdyinnelvpsvhrmscelvghklslkllryyteilsifgpslrdpiaaeisiqalsyalggdinkildklgysggdflaileskgikarvtyvdtrdyfiilsiayptlseikgvivhkieaisynigaqewyttipryvatqgylisnfdetscvftpegtvcsqnalypmspllqecfrgstkscartlvsgttsnrfilskgnliancasvlckcyttetvinqdpdklltviasdkcpvvevdgvtiqvgsreypdsvylheidlgpaislekldvgtnlgnavtrlenakelldasdqilktvkgvp的氨基酸序列。

9、本技术提供一种单克隆抗体，该单克隆抗体由保藏编号为cgmcc no.45615的杂交瘤细胞株产生。

10、本技术的一个具体实施方式中，所述单克隆抗体能够结合pprv nigeria 75/1株f蛋白，优选能够结合包括如seq id no.1所示的序列的抗原表位，优选能够结合如seq idno.1所示的抗原表位。

11、本技术的一个具体实施方式中，所述单克隆抗体包含抗体重链互补决定区，其包含：cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3，其中：cdr-h1具有序列seq id no 4：sygls的氨基酸序列，cdr-h2具有序列seq id no 5：titwnggstyypdtvkg的氨基酸序列，cdr-h3具有序列seq id no6：esllrlpawfay的氨基酸序列。

12、本技术的一个具体实施方式中，所述单克隆抗体包含抗体轻链互补决定区，其包含：cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3，其中：cdr-l1具有序列seq id no 7：rasksvstsgysymh的氨基酸序列，cdr-l2具有序列seq id no 8：lvsnles的氨基酸序列，cdr-l3具有序列seq id no9：qhirelyt的氨基酸序列。

13、本技术的一个具体实施方式中，一种结合pprv nigeria 75/1株f蛋白的单克隆抗体包含：

14、a）抗体重链互补决定区，其包含：cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3，其中：

15、cdr-h1具有序列seq id no 4：sygls的氨基酸序列，

16、cdr-h2具有序列seq id no 5：titwnggstyypdtvkg的氨基酸序列，

17、cdr-h3具有序列seq id no 6：esllrlpawfay的氨基酸序列，

18、b）抗体轻链互补决定区，其包含：cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3，其中：

19、cdr-l1具有序列seq id no 7：rasksvstsgysymh的氨基酸序列，

20、cdr-l2具有序列seq id no 8：lvsnles的氨基酸序列，

21、cdr-l3具有序列seq id no 9：qhirelyt的氨基酸序列。

22、本技术的一个具体实施方式中，所述单克隆抗体包括如seq id no 10所示抗体重链可变区hcvr或与seq id no 10所示的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的抗体重链可变区hcvr和如seq id no 11所示抗体轻链可变区lcvr或与seq id no 11所示的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的抗体重链可变区lcvr，其中：

23、hcvr具有序列seq id no 10：evklvesggglvqpggslklscaasgftfssyglswvrqtpdkrlelvatitwnggstyypdtvkgrftisrdsaknilylqmsslksedtamyycaresllrlpawfaywgqgtlvtvsa的氨基酸序列；

24、lcvr具有序列seq id no 11：

25、divltqspaslavslgqratisyrasksvstsgysymhwnqqkpgqpprlliylvsnlesgvparfsgsgsgtdftlnihpveeedaatyycqhirelytfgggtkleik的氨基酸序列。

26、本技术的一个具体实施方式中，所述单克隆抗体包括如seq id no 12所示重链或与seq id no 12所示的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的重链和如seq id no 13所示轻链或与seq id no 13所示的氨基酸序列具有90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的轻链，其中：

27、所述重链氨基酸序列是seq id no 12：

28、akttppsvyplapgsaaqtnsmvtlgclvkgyfpepvtvtwnsgslssgvhtfpavlqsdlytlsssvtvpsstwpsetvtcnvahpasstkvdkkivprdcgckpcictvpevssvfifppkpkdvltitltpkvtcvvvdiskddpevqfswfvddvevhtaqtqpreeqfnstfrsvselpimhqdwlngkefkcrvnsaafpapiektisktkgrpkapqvytipppkeqmakdkvsltcmitdffpeditvewqwngqpaenykntqpimdtdgsyfvysklnvqksnweagntftcsvlheglhnhhtekslshspgkl的氨基酸序列；

29、所述轻链氨基酸序列是seq id no 13：radaaptvsifppsseqltsggasvvcflnnfypkdinvkwkidgserqngvlnswtdqdskdstysmsstltltkdeyerhnsytceathktstspivksfnrnec的氨基酸序列。

30、一种用于检测和/或诊断动物小反刍兽疫病毒感染的试剂盒，其包括：上述单克隆抗体或由保藏编号为cgmcc no.45615的杂交瘤细胞产生的抗体。

31、有益效果：与现有技术相比，本技术具有如下优势：

32、（1）本技术得到的单克隆抗体可用于检测pprv，特异性强，抗体滴度高，其与感染小反刍兽疫病毒pprv nigeria 75/1株的vero细胞发生特异性的荧光反应，不与正常vero细胞及羊疱疹病毒ⅰ型、牛病毒性腹泻病毒ⅰ型、牛病毒性腹泻病毒ⅱ型等常见羊病毒发生反应。

33、（2）本技术的提出为建立一种快速、简易、准确的检测方法，以及在免疫机制研究、免疫功能研究、检测方法建立等方面提供技术手段，对pprv的防控及实验室研究都具有重要意义。